大规模培养的黄芪毛状根急性毒性研究
作者：杜旻 金若敏 吴耀平 张海桂 刘涤 胡之璧
单位：杜旻 金若敏 吴耀平 张海桂 刘涤 胡之璧 上海中医药大学中药研究所(200032)
关键词：黄芪 毛状根 毒性
990620 摘 要 对黄芪毛状根、野生黄芪和栽增黄芪的急性毒性进行了初步研究，结果表明三者均符合药典规定的毒性要求，可安全药用。
黄芪(膜荚黄芪Astragalus membranaceus, 蒙古黄芪A. mongholicus)是我国重要传统药材，每年需求量600万 kg[1]。由于野生资源逐年减少和栽培品种品质下降，给临床使用和中成药制造带来一定的困难。由发根农杆菌(Agrobacteriun rhizogenes)感染双子叶植物形成的毛状根，具有生长迅速、生化性质和遗传性稳定以及易于进行基因操作等特点，近年来已发展成进行工业化生产中药材的重要培养系统[2]。我室已成功地进行了黄芪毛状根的大规模培养实验[3]，药理实验证明培养的毛状根具有提高免疫功能和促进造血系统功能[4]、抗自由基、改善记忆、抗衰老和保护肾功能的作用。为保证用药的安全性，我们对黄芪毛状根的急性毒性进行了初步研究，并与野生黄芪和栽培黄芪进行了比较。
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1 实验材料
1.1 黄芪毛状根水煎液的制备：利用我们设计的培养系统[3]培养的黄芪毛状根，经冷冻干燥制成粗粉，取300 g，加10倍体积蒸馏水浸泡2h，微火煮沸30min，4层纱布过滤，再加6倍体积蒸馏水微火煮沸30 min，过滤后合并滤液，3000r/min离心15min，合并上清液，浓缩至97 mL。药液浓度为每亳升含生药3.09 g。
1.2 野生和栽培黄芪水煎液的制备：野生黄芪购自上海药材公司，经上海市中药质量监督检验室叶愈青教授鉴定为山西产膜荚黄芪(A. membranaceus Fisch. Bge)的干燥根。栽培黄芪购自上海药材公司崇明分公司。制备方法同黄芪毛状根，分别浓缩至98 mL和133 mL，药液浓度分别为每毫升3.06 g和2.26 g。
1.3 动物：昆明种小鼠， 由上海中医药大学实验动物中心提供。体重18～22 g，雌雄各半。
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2 实验方法
取小鼠雌雄各半，预先禁食不禁水12 h，将小鼠按体重随机分组(每组n=10)，分别一次大剂量(0.4 mL/10g)ig黄芪毛状根64.89、72、80、89 g/kg，野生黄芪97.92 g/kg，栽培黄芪90.23 g/kg。观察小鼠死亡情况，记录症状，连续7 d，7 d后再次称重。按寇氏法计算LD50值及95%可信限和平均可信限。
3 结果与讨论
在72、80、89 g/kg 3组中，ig给予黄芪毛状根的部分小鼠在10 min左右开始出现身体发抖、摇晃、呼吸急促，持续10～30 min后自发动作迟缓，四肢松软，继而产生剧烈抽搐、惊厥现象，直至死亡，死亡动物解剖后未见有内脏异常病变。小鼠死亡率随用药量的增加而增加，分别为20%、40%、90%，而ig给予64.89 g/kg黄芪毛状根、97.92 g/kg野生黄芪和90.23 g/kg栽培黄芪均未出现毒性反应。根据寇氏法计算得ig给予黄芪毛状根的LD50为79.98 g/kg体重，95%可信限为76.57～84.32 g/kg体重，平均可信限为(80.35±3.875) g/kg体重。由于野生黄芪和栽培黄芪无LD50，故对黄芪毛状根、野生和栽培黄芪进行最大耐受倍数的测定。根据1995版药典规定[5]，人常用量为9～30 g/d，如以人体重50 kg计称，小鼠ig野生黄芪用量相当于成人最大用量的163倍，小鼠ig栽培黄芪相当于人用量的150倍。因为未有黄芪毛状根成人临床用量的报道，因此，我们假设黄芪毛状根与药典(1995年版)规定的黄芪药材用量相当，即成人9～30 g/d，取最大量30 g，如成人体重以50 kg计，则小鼠ig黄芪毛状根的用量相当于成人最大用量的108倍。急性毒性实验表明，黄芪毛状根、野生黄芪和山西黄芪均符合药典规定的毒性要求，可安全药用。
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由于黄芪毛状根药效成分与干燥根相比无明显区别[6，7]，因此在药理作用方面，也有相同的表现[4]。本研究的结果更证实3种来源的黄芪均符合药典规定的毒性要求，说明大规模培养的黄芪毛状根可以替代野生或栽培黄芪，为开发中药材新资源提供了一条新途径。
参 考 文 献
1 中国药材公司编著.中国常见中药材.北京：科学出版社，1995：495
2 刘 涤，等.国外医学-植物药分册，1998，13(6)：245
3 郑志仁，等.植物生理学通讯，1997，33：133
4 金若敏，等.中药材，1998，21(1)：26
5 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典.广州：广东科技出版社，1995：271
6 郑志仁，等.生物工程学报，1998，14(2)：153
7 郑志仁，等.药学学报，1998，33(2)：148
(1999-02-12收稿), http://www.100md.com
单位：杜旻 金若敏 吴耀平 张海桂 刘涤 胡之璧 上海中医药大学中药研究所(200032)
关键词：黄芪 毛状根 毒性
990620 摘 要 对黄芪毛状根、野生黄芪和栽增黄芪的急性毒性进行了初步研究，结果表明三者均符合药典规定的毒性要求，可安全药用。
黄芪(膜荚黄芪Astragalus membranaceus, 蒙古黄芪A. mongholicus)是我国重要传统药材，每年需求量600万 kg[1]。由于野生资源逐年减少和栽培品种品质下降，给临床使用和中成药制造带来一定的困难。由发根农杆菌(Agrobacteriun rhizogenes)感染双子叶植物形成的毛状根，具有生长迅速、生化性质和遗传性稳定以及易于进行基因操作等特点，近年来已发展成进行工业化生产中药材的重要培养系统[2]。我室已成功地进行了黄芪毛状根的大规模培养实验[3]，药理实验证明培养的毛状根具有提高免疫功能和促进造血系统功能[4]、抗自由基、改善记忆、抗衰老和保护肾功能的作用。为保证用药的安全性，我们对黄芪毛状根的急性毒性进行了初步研究，并与野生黄芪和栽培黄芪进行了比较。
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1 实验材料
1.1 黄芪毛状根水煎液的制备：利用我们设计的培养系统[3]培养的黄芪毛状根，经冷冻干燥制成粗粉，取300 g，加10倍体积蒸馏水浸泡2h，微火煮沸30min，4层纱布过滤，再加6倍体积蒸馏水微火煮沸30 min，过滤后合并滤液，3000r/min离心15min，合并上清液，浓缩至97 mL。药液浓度为每亳升含生药3.09 g。
1.2 野生和栽培黄芪水煎液的制备：野生黄芪购自上海药材公司，经上海市中药质量监督检验室叶愈青教授鉴定为山西产膜荚黄芪(A. membranaceus Fisch. Bge)的干燥根。栽培黄芪购自上海药材公司崇明分公司。制备方法同黄芪毛状根，分别浓缩至98 mL和133 mL，药液浓度分别为每毫升3.06 g和2.26 g。
1.3 动物：昆明种小鼠， 由上海中医药大学实验动物中心提供。体重18～22 g，雌雄各半。
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2 实验方法
取小鼠雌雄各半，预先禁食不禁水12 h，将小鼠按体重随机分组(每组n=10)，分别一次大剂量(0.4 mL/10g)ig黄芪毛状根64.89、72、80、89 g/kg，野生黄芪97.92 g/kg，栽培黄芪90.23 g/kg。观察小鼠死亡情况，记录症状，连续7 d，7 d后再次称重。按寇氏法计算LD50值及95%可信限和平均可信限。
3 结果与讨论
在72、80、89 g/kg 3组中，ig给予黄芪毛状根的部分小鼠在10 min左右开始出现身体发抖、摇晃、呼吸急促，持续10～30 min后自发动作迟缓，四肢松软，继而产生剧烈抽搐、惊厥现象，直至死亡，死亡动物解剖后未见有内脏异常病变。小鼠死亡率随用药量的增加而增加，分别为20%、40%、90%，而ig给予64.89 g/kg黄芪毛状根、97.92 g/kg野生黄芪和90.23 g/kg栽培黄芪均未出现毒性反应。根据寇氏法计算得ig给予黄芪毛状根的LD50为79.98 g/kg体重，95%可信限为76.57～84.32 g/kg体重，平均可信限为(80.35±3.875) g/kg体重。由于野生黄芪和栽培黄芪无LD50，故对黄芪毛状根、野生和栽培黄芪进行最大耐受倍数的测定。根据1995版药典规定[5]，人常用量为9～30 g/d，如以人体重50 kg计称，小鼠ig野生黄芪用量相当于成人最大用量的163倍，小鼠ig栽培黄芪相当于人用量的150倍。因为未有黄芪毛状根成人临床用量的报道，因此，我们假设黄芪毛状根与药典(1995年版)规定的黄芪药材用量相当，即成人9～30 g/d，取最大量30 g，如成人体重以50 kg计，则小鼠ig黄芪毛状根的用量相当于成人最大用量的108倍。急性毒性实验表明，黄芪毛状根、野生黄芪和山西黄芪均符合药典规定的毒性要求，可安全药用。
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由于黄芪毛状根药效成分与干燥根相比无明显区别[6，7]，因此在药理作用方面，也有相同的表现[4]。本研究的结果更证实3种来源的黄芪均符合药典规定的毒性要求，说明大规模培养的黄芪毛状根可以替代野生或栽培黄芪，为开发中药材新资源提供了一条新途径。
参 考 文 献
1 中国药材公司编著.中国常见中药材.北京：科学出版社，1995：495
2 刘 涤，等.国外医学-植物药分册，1998，13(6)：245
3 郑志仁，等.植物生理学通讯，1997，33：133
4 金若敏，等.中药材，1998，21(1)：26
5 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典.广州：广东科技出版社，1995：271
6 郑志仁，等.生物工程学报，1998，14(2)：153
7 郑志仁，等.药学学报，1998，33(2)：148
(1999-02-12收稿), http://www.100md.com