三棱总黄酮抗血小板聚集及抗血栓作用研究
作者：陆兔林 叶定江 毛春芹 刘雪松
单位：陆兔林 叶定江 毛春芹 刘雪松 南京中医药大学(210029)
关键词：三棱；总黄酮；抗血小板聚集；抗血栓
三棱总黄酮抗血小板聚集及抗血栓作用研究 摘 要 采用血小板聚集功能测定法、小鼠体内血栓形成法对三棱总黄酮进行抗血小板聚集及抗血栓作用研究。结果表明：三棱总黄酮具较强的抗血小板聚集及抗血栓作用，提示三棱中总黄酮为其活血化瘀的有效活性部位。
Studies on Antiplatelet Aggregation and Antithrombosis Action of
Total Flavonoidsof Common Burreed (Sparganium stoloniferum)
, http://www.100md.com
Lu Tulin, Ye Dingjiang, Mao Chunqin, et al.
(Nanjing University of TCM, Nanjing, 210029)
Abstract Antiplatelet aggregation and antithrombotic action of total flavonoids of Sparganium stoloniferum Buch.-Ham. in mice were studied by pharmacological screening. The experimental results showed that total flavonoids of S. stoloniferum Buch.-Ham. can inhibit platelet aggregation, prevent thrombosis in rat, proving its effects in promoting blood circulation and resolving blood stasis as documented in ancient Chinese medical literatures.
, 百拇医药
Key words Sparganium stoloniferum Buch.-Ham. total flavonoids antiplatelet aggregation antithrombosis
三棱具破血散瘀、止痛功效。临床常用于治疗肿瘤、肝脾肿大、胁肋疼痛、产后瘀血、盆腔炎等症。文献记载其成分有挥发油、甾醇类、黄酮类等[1～3]。我们以抗血小板聚集及抗血栓为指标，对三棱中相对含量较高的总黄酮进行化瘀作用研究，为筛选三棱的活性成分或有效部位及其临床用药提供理论依据。
1 材料
1.1 药材：三棱购自南京市药材公司，经本校鉴定教研组陈建伟副教授鉴定为黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham.削去外皮的干燥块茎。
1.2 仪器：SPA-4型多功能血小板聚集仪(上海科达测试仪器厂)。
, 百拇医药
1.3 动物：昆明种小鼠，体重18～22 g，由本校实验动物中心提供。SD大鼠，雄性，180～220 g，由中国药科大学实验动物中心提供。
2 方法与结果
2.1 三棱总黄酮制备：取药材适量，加乙醇回流提取，回收乙醇，石油醚脱脂，样品进行聚酰胺柱层析。分别用蒸馏水、乙醇洗脱。将乙醇洗脱液回收乙醇，真空干燥，得三棱总黄酮。将制得总黄酮用无水乙醇、吐温-80及蒸馏水配成乳化剂，备用。
2.2 三棱总黄酮抗血小板聚集作用研究[4]：取健康雄性SD大鼠，随机分为5组，每组10只。以阿司匹林为阳性对照，空白溶剂为阴性对照，分别给药。每天ig 1次，连续给药7 d，最后1次给药1 h后，ip 0.2%戊巴比妥钠麻醉，用事先置有枸椽酸钠的硅化注射器刺入大鼠心尖部，抽取5 mL血液，置于硅化离心管中轻轻振摇混匀。500 r/min离心4 min，吸取上层米黄色悬液即为富血小板血浆(PRP)。将余下的血液以3 000 r/min离心8 min，吸取上清液即为贫血小板血浆(PPP)。以PPP稀释PRP至血小板数为2×105～2.2×105/mm3。同时加入ADP(2 μmol/L，以0.2 mol/L磷酸缓冲液为溶剂)，描记3 min聚集曲线。各样品同法操作。从曲线上算出1、2、3 min的聚集率[Agg(t)]、最大聚集率[Agg(m)]、达到最大聚集率时间(tm)，结果见表1。三棱水煎剂及总黄酮均具较强的抑制大鼠血小板聚集作用。与三棱水煎剂相比，三棱总黄酮仍具较强的抑制作用。
, 百拇医药
表1 三棱总黄酮对大鼠血小板聚集功能的影响(
±s,n=10)
组别
剂量
Agg(1)
Agg(2)
Agg(3)
Agg(m)
tm
(mg/kg)
, http://www.100md.com (%)
(s)
对照组
-
31.09±10.45
35.40±7.25
29.74±7.25
36.93±8.06
129.56±35.99
三棱水煎液
10 g
15.03±7.79**
, http://www.100md.com
12.16±10.03***
12.75±6.45***
15.98±8.43***
73.67±17.31***
三棱总黄酮
42
10.94±10.42***
9.92±11.94***
5.86±9.41***
, 百拇医药 12.48±10.5***
47.67±35.96***
84
11.43±11.24***
14.64±11.82**
9.75±12.5***
11.40±12.4***
72.53±58.24***
阿司匹林
50
, http://www.100md.com
13.39±11.89**
10.86±10.01***
4.94±3.64***
15.67±10.7***
53.10±37.36***
与对照组比较：**P<0.01 ***P<0.001
2.3 三棱总黄酮抗血栓作用研究[4]：取18～22 g雄性小鼠，随机分组。对照组给等量的空白溶剂，以阿司匹林为阳性对照组，按表2所示剂量ig给药。1 h后尾iv胶原蛋白(225 μg/只)与肾上腺素(9 μg/只)的混合诱导剂，注射后观察15 min内小鼠偏瘫的未恢复数，计算药物对小鼠脑血栓的保护率，结果见表2。三棱水煎剂及总黄酮对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓有显著的保护作用，同时与水煎剂相比三棱总黄酮具较强的抗血栓作用。
, http://www.100md.com
表2 三棱总黄酮对小鼠体内血栓形成的影响
组别
剂量
(mg/kg)
动物数
(只)
15 min内恢
复数(只)
恢复率
(%)
对照组
-
10
, 百拇医药
0
0
三棱水煎液
20 g
10
5
50
三棱总黄酮
84
10
7
70
168
10
, 百拇医药
9
90
阿司匹林
80
10
8
80
3 讨论与小结
实验采用抗血小板聚集和抗血栓两种实验方法对三棱总黄酮进行活血化瘀作用研究。结果表明：与三棱水煎剂及空白组比较，三棱总黄酮具较强的抗血小板聚集及抗血栓作用。按文献[3]法对提取总黄酮进行纯度分析，结果显示本品纯度达90%以上。本实验结果为进一步筛选三棱有效成分提供了理论依据。
参 考 文 献
1 陈耀祖，等.药物分析杂志，1989，8(5)：270
2 张卫东，等.中国中药杂志，1995，20(6)：356
3 陆兔林，等.中成药，1998，20(3)：23
4 陈 奇，等.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1994：581，579
(1998-10-19收稿), 百拇医药
单位：陆兔林 叶定江 毛春芹 刘雪松 南京中医药大学(210029)
关键词：三棱；总黄酮；抗血小板聚集；抗血栓
三棱总黄酮抗血小板聚集及抗血栓作用研究 摘 要 采用血小板聚集功能测定法、小鼠体内血栓形成法对三棱总黄酮进行抗血小板聚集及抗血栓作用研究。结果表明：三棱总黄酮具较强的抗血小板聚集及抗血栓作用，提示三棱中总黄酮为其活血化瘀的有效活性部位。
Studies on Antiplatelet Aggregation and Antithrombosis Action of
Total Flavonoidsof Common Burreed (Sparganium stoloniferum)
, http://www.100md.com
Lu Tulin, Ye Dingjiang, Mao Chunqin, et al.
(Nanjing University of TCM, Nanjing, 210029)
Abstract Antiplatelet aggregation and antithrombotic action of total flavonoids of Sparganium stoloniferum Buch.-Ham. in mice were studied by pharmacological screening. The experimental results showed that total flavonoids of S. stoloniferum Buch.-Ham. can inhibit platelet aggregation, prevent thrombosis in rat, proving its effects in promoting blood circulation and resolving blood stasis as documented in ancient Chinese medical literatures.
, 百拇医药
Key words Sparganium stoloniferum Buch.-Ham. total flavonoids antiplatelet aggregation antithrombosis
三棱具破血散瘀、止痛功效。临床常用于治疗肿瘤、肝脾肿大、胁肋疼痛、产后瘀血、盆腔炎等症。文献记载其成分有挥发油、甾醇类、黄酮类等[1～3]。我们以抗血小板聚集及抗血栓为指标，对三棱中相对含量较高的总黄酮进行化瘀作用研究，为筛选三棱的活性成分或有效部位及其临床用药提供理论依据。
1 材料
1.1 药材：三棱购自南京市药材公司，经本校鉴定教研组陈建伟副教授鉴定为黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham.削去外皮的干燥块茎。
1.2 仪器：SPA-4型多功能血小板聚集仪(上海科达测试仪器厂)。
, 百拇医药
1.3 动物：昆明种小鼠，体重18～22 g，由本校实验动物中心提供。SD大鼠，雄性，180～220 g，由中国药科大学实验动物中心提供。
2 方法与结果
2.1 三棱总黄酮制备：取药材适量，加乙醇回流提取，回收乙醇，石油醚脱脂，样品进行聚酰胺柱层析。分别用蒸馏水、乙醇洗脱。将乙醇洗脱液回收乙醇，真空干燥，得三棱总黄酮。将制得总黄酮用无水乙醇、吐温-80及蒸馏水配成乳化剂，备用。
2.2 三棱总黄酮抗血小板聚集作用研究[4]：取健康雄性SD大鼠，随机分为5组，每组10只。以阿司匹林为阳性对照，空白溶剂为阴性对照，分别给药。每天ig 1次，连续给药7 d，最后1次给药1 h后，ip 0.2%戊巴比妥钠麻醉，用事先置有枸椽酸钠的硅化注射器刺入大鼠心尖部，抽取5 mL血液，置于硅化离心管中轻轻振摇混匀。500 r/min离心4 min，吸取上层米黄色悬液即为富血小板血浆(PRP)。将余下的血液以3 000 r/min离心8 min，吸取上清液即为贫血小板血浆(PPP)。以PPP稀释PRP至血小板数为2×105～2.2×105/mm3。同时加入ADP(2 μmol/L，以0.2 mol/L磷酸缓冲液为溶剂)，描记3 min聚集曲线。各样品同法操作。从曲线上算出1、2、3 min的聚集率[Agg(t)]、最大聚集率[Agg(m)]、达到最大聚集率时间(tm)，结果见表1。三棱水煎剂及总黄酮均具较强的抑制大鼠血小板聚集作用。与三棱水煎剂相比，三棱总黄酮仍具较强的抑制作用。
, 百拇医药
表1 三棱总黄酮对大鼠血小板聚集功能的影响(
±s,n=10)组别
剂量
Agg(1)
Agg(2)
Agg(3)
Agg(m)
tm
(mg/kg)
, http://www.100md.com (%)
(s)
对照组
-
31.09±10.45
35.40±7.25
29.74±7.25
36.93±8.06
129.56±35.99
三棱水煎液
10 g
15.03±7.79**
, http://www.100md.com
12.16±10.03***
12.75±6.45***
15.98±8.43***
73.67±17.31***
三棱总黄酮
42
10.94±10.42***
9.92±11.94***
5.86±9.41***
, 百拇医药 12.48±10.5***
47.67±35.96***
84
11.43±11.24***
14.64±11.82**
9.75±12.5***
11.40±12.4***
72.53±58.24***
阿司匹林
50
, http://www.100md.com
13.39±11.89**
10.86±10.01***
4.94±3.64***
15.67±10.7***
53.10±37.36***
与对照组比较：**P<0.01 ***P<0.001
2.3 三棱总黄酮抗血栓作用研究[4]：取18～22 g雄性小鼠，随机分组。对照组给等量的空白溶剂，以阿司匹林为阳性对照组，按表2所示剂量ig给药。1 h后尾iv胶原蛋白(225 μg/只)与肾上腺素(9 μg/只)的混合诱导剂，注射后观察15 min内小鼠偏瘫的未恢复数，计算药物对小鼠脑血栓的保护率，结果见表2。三棱水煎剂及总黄酮对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓有显著的保护作用，同时与水煎剂相比三棱总黄酮具较强的抗血栓作用。
, http://www.100md.com
表2 三棱总黄酮对小鼠体内血栓形成的影响
组别
剂量
(mg/kg)
动物数
(只)
15 min内恢
复数(只)
恢复率
(%)
对照组
-
10
, 百拇医药
0
0
三棱水煎液
20 g
10
5
50
三棱总黄酮
84
10
7
70
168
10
, 百拇医药
9
90
阿司匹林
80
10
8
80
3 讨论与小结
实验采用抗血小板聚集和抗血栓两种实验方法对三棱总黄酮进行活血化瘀作用研究。结果表明：与三棱水煎剂及空白组比较，三棱总黄酮具较强的抗血小板聚集及抗血栓作用。按文献[3]法对提取总黄酮进行纯度分析，结果显示本品纯度达90%以上。本实验结果为进一步筛选三棱有效成分提供了理论依据。
参 考 文 献
1 陈耀祖，等.药物分析杂志，1989，8(5)：270
2 张卫东，等.中国中药杂志，1995，20(6)：356
3 陆兔林，等.中成药，1998，20(3)：23
4 陈 奇，等.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1994：581，579
(1998-10-19收稿), 百拇医药