内皮细胞功能变化在肝缺血再灌注中的意义及川芎嗪干预*
作者：王万铁 林丽娜 徐正介 王 卫 李 东
单位：王万铁 徐正介 王 卫 温州医学院 1病理生理教研室； 林丽娜 附属一院麻醉科； 李 东 检验系分析中心 浙江省温州市 325003
关键词：肝缺血再灌注损伤；内皮细胞；透明质酸；川芎嗪
中国图书馆分类号 R575中国图书馆分类号 R575
Subject headings hepatic ischemia reperfusion injury; endothelium; hyaluronic acid; tetramethylpyrazine
血管内皮细胞的完整性在心肌缺血再灌注损伤发生发展中起支点轴的作用，但有关内皮细胞功能变化在肝缺血再灌注损伤(HIRI)中的意义及川芎嗪对其的影响未见报道. 本文以透明质酸(HA)反应血管内皮细胞功能变化，并用川芎嗪干预，以探讨内皮细胞功能变化在HIRI中的发病机制及川芎嗪的调节作用.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 ①动物和模型建立：实验家兔20只，雌雄不拘，体重1.8kg～2.8kg，氨基甲酸乙酯1.0g/kg静脉麻醉，分离一侧颈外静脉以备采血. 消毒开腹，暴露肝门，于尾状叶上方游离肝左外叶、中叶、右中叶及方形叶的血管、胆管，用无损伤钳夹闭血管，造成该四叶完全性缺血，45min后松夹重新灌注45min形成HIRI模型. ②病例选择：肝癌手术患者18例，男13例，女5例，平均年龄45岁，均行择期肝叶切除术.
1.2 方法 随机将家兔及肝癌手术患者分为两组：肝缺血再灌注组(A组)；肝缺血再灌注+川芎嗪治疗组(B组). B组将盐酸川芎嗪注射液(广东湛江制药厂生产)30mg/kg(家兔)或3mg/kg(患者)分别在缺血前20min及再灌注即刻静脉注射. 两组血指标分别测缺血前、缺血45min(或25min)及再灌注45min(或25min)共3个时相点. 用放射免疫法测定血浆HA含量，赖氏法检测ALT活性.
, 百拇医药
2 结果
2.1 家兔肝缺血再灌注期间血HA变化及川芎嗪影响(表1)
A组HA缺血45min、再灌注45min明显升高，尤以再灌注时显著；B组各相应时相点HA仅轻度升高，但明显低于A组(P<0.01).
2.2 家兔肝缺血再灌注期间血ALT变化及川芎嗪影响(表1)A组ALT变化于缺血45min明显升高，再灌注45min达高峰；B组各相应时相点ALT也增高，但显著低于A组(P<0.05和P<0.01).
表1 两组家兔各时相点血浆HA含量及ALT活性比较 (
±s)
, 百拇医药
组别
n
缺血前
缺血45min
再灌45min
HA(ug/L)
A
10
1.00±0.16
1.12±0.16b
2.03±0.65bd
B
, http://www.100md.com
10
1.01±0.22
1.05±0.21
1.25±0.50f
ALT(U/L)
A
10
38.1± 2.9
47.3±4.6b
61.7±8.3bd
B
10
, 百拇医药
37.0± 4.9
40.5±6.3e
46.2±7.9bcf
bP<0.01，vs 本组缺血前；cP<0.05，dP<0.01，vs 本组缺血45min；eP<0.05，fP<0.01，vs A组；A 表示肝缺血再灌注组，B 表示肝缺血再灌注+川芎嗪治疗组.
2.3 肝手术患者肝缺血再灌注期间血HA变化及川芎嗪影响(表2)A组HA缺血25min、再灌注25min明显升高，与B组相应时值比较均有显著差异(P<0.05).
2.4 肝手术患者肝缺血再灌注期间血ALT变化及川芎嗪影响(表2) A组ALT缺血再灌注期间显著升高，尤以再灌注45min为著；B组仅见轻度升高，且明显低于同时相点A组(P<0.01)
, 百拇医药
2.5 HA与ALT之间的关系 直线相关分析显示，家兔及肝手术患者于缺血45min(或25min)和再灌注45min(或25min)，HA与ALT之间均存在着明显的正相关，相关系数r分别为(家兔)0.664(P<0.05)，0.844(P<0.01)和(患者)0.796(P<0.01)，0.890(P<0.01).
表2 两组肝癌手术患者各时相点血浆HA含量及ALT活性比较 (±s)
组别
n
缺血前
缺血25min
, 百拇医药
再灌25min
HA(ug/L)
A
9
0.39±0.10
0.51±0.13b
2.03±0.65bc
B
9
0.38±0.10
0.40±0.08e
0.45±0.11ae
, 百拇医药
ALT(U/L)
A
9
28.1± 8.3
95.1±12.2b
126.3±15.1bd
B
9
28.6± 8.4
33.9± 9.2f
41.4±16.3af
, http://www.100md.com
aP<0.05，bP<0.01, vs 本组缺血前；cP<0.05，dP<0.01，vs 本组缺血45min；eP<0.05，fP<0.01，vs A组；A 表示肝缺血再灌注组，B 表示肝缺血再灌注+川芎嗪治疗组.
3 讨论
肝缺血再灌注期间，钙超载、能量缺乏及氧自由基的大量形成，共同导致血管内皮细胞损伤，从而引起内皮功能紊乱. 而循环血中透明质酸主要由肝内皮细胞摄取并分解，因此血浆HA变化可作为早期判断肝窦内皮细胞功能变化的间接指标. 本实验肝缺血及再灌注时血HA明显升高，提示缺血再灌注诱发内皮功能紊乱，导致肝窦内皮细胞摄取与分解功能障碍.
血管内皮细胞可合成释放一氧化氮和前列环素等，对其本身有重要的保护作用. 肝缺血再灌注期间，一氧化氮和前列环素合成、释放明显减少，使其抗自由基、内皮素及血栓素A2等作用削弱，致使血管保护作用减弱，进一步加重血管内皮损伤，形成“恶性循环”，共同促使HIRI的发生发展. 本实验结果显示，HIRI时HA与ALT同步升高，两者呈显著正相关，表明内皮细胞功能紊乱可诱发、加重HIRI.
, http://www.100md.com
川芎嗪是川芎的一种有效成分，广泛应用于脏器缺血再灌注损伤的防治[1-3]. 本文观察到，川芎嗪干预后缺血及再灌注时ALT均显著低于非干预组，说明川芎嗪能有效地防治HIRI. 另外，川芎嗪干预后HA亦明显较非干预组低，表明川芎嗪抗HIRI与其保护内皮并逆转其功能紊乱之作用有关. 其机制可能是通过影响血管舒缓素系统产生内皮保护作用，即川芎嗪由缓激肽及其受体途径升高一氧化氮而发挥治疗效应，这有待于进一步研究.
致谢 承检验系胡云良老师协助部分指标检测.
*浙江省教委科研基金资助课题，No.951118
通讯作者 王万铁
4 参考文献
1 林丽娜，王万铁，徐正介，李东. 川芎嗪抗心肌缺血再灌注损伤的临床研究. 中国中西医结合杂志，1997；17：261-263
2 王万铁，林丽娜，徐正介，李东. 氧自由基在家兔低血容量性休克-再灌注损伤中的作用及川芎嗪的保护效应. 中国危重病急救医学，1997；9：259-260
3 王万铁，徐正介，林丽娜，李东，王宗敏. 川芎嗪注射液对家兔肝缺血再灌注损伤的保护作用观察. 中国危重病急救医学，1998；10：655-657
收稿日期 1999-02-05 修回日期 1999-03-28, 百拇医药
单位：王万铁 徐正介 王 卫 温州医学院 1病理生理教研室； 林丽娜 附属一院麻醉科； 李 东 检验系分析中心 浙江省温州市 325003
关键词：肝缺血再灌注损伤；内皮细胞；透明质酸；川芎嗪
中国图书馆分类号 R575中国图书馆分类号 R575
Subject headings hepatic ischemia reperfusion injury; endothelium; hyaluronic acid; tetramethylpyrazine
血管内皮细胞的完整性在心肌缺血再灌注损伤发生发展中起支点轴的作用，但有关内皮细胞功能变化在肝缺血再灌注损伤(HIRI)中的意义及川芎嗪对其的影响未见报道. 本文以透明质酸(HA)反应血管内皮细胞功能变化，并用川芎嗪干预，以探讨内皮细胞功能变化在HIRI中的发病机制及川芎嗪的调节作用.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 ①动物和模型建立：实验家兔20只，雌雄不拘，体重1.8kg～2.8kg，氨基甲酸乙酯1.0g/kg静脉麻醉，分离一侧颈外静脉以备采血. 消毒开腹，暴露肝门，于尾状叶上方游离肝左外叶、中叶、右中叶及方形叶的血管、胆管，用无损伤钳夹闭血管，造成该四叶完全性缺血，45min后松夹重新灌注45min形成HIRI模型. ②病例选择：肝癌手术患者18例，男13例，女5例，平均年龄45岁，均行择期肝叶切除术.
1.2 方法 随机将家兔及肝癌手术患者分为两组：肝缺血再灌注组(A组)；肝缺血再灌注+川芎嗪治疗组(B组). B组将盐酸川芎嗪注射液(广东湛江制药厂生产)30mg/kg(家兔)或3mg/kg(患者)分别在缺血前20min及再灌注即刻静脉注射. 两组血指标分别测缺血前、缺血45min(或25min)及再灌注45min(或25min)共3个时相点. 用放射免疫法测定血浆HA含量，赖氏法检测ALT活性.
, 百拇医药
2 结果
2.1 家兔肝缺血再灌注期间血HA变化及川芎嗪影响(表1)
A组HA缺血45min、再灌注45min明显升高，尤以再灌注时显著；B组各相应时相点HA仅轻度升高，但明显低于A组(P<0.01).
2.2 家兔肝缺血再灌注期间血ALT变化及川芎嗪影响(表1)A组ALT变化于缺血45min明显升高，再灌注45min达高峰；B组各相应时相点ALT也增高，但显著低于A组(P<0.05和P<0.01).
表1 两组家兔各时相点血浆HA含量及ALT活性比较 (
±s), 百拇医药
组别
n
缺血前
缺血45min
再灌45min
HA(ug/L)
A
10
1.00±0.16
1.12±0.16b
2.03±0.65bd
B
, http://www.100md.com
10
1.01±0.22
1.05±0.21
1.25±0.50f
ALT(U/L)
A
10
38.1± 2.9
47.3±4.6b
61.7±8.3bd
B
10
, 百拇医药
37.0± 4.9
40.5±6.3e
46.2±7.9bcf
bP<0.01，vs 本组缺血前；cP<0.05，dP<0.01，vs 本组缺血45min；eP<0.05，fP<0.01，vs A组；A 表示肝缺血再灌注组，B 表示肝缺血再灌注+川芎嗪治疗组.
2.3 肝手术患者肝缺血再灌注期间血HA变化及川芎嗪影响(表2)A组HA缺血25min、再灌注25min明显升高，与B组相应时值比较均有显著差异(P<0.05).
2.4 肝手术患者肝缺血再灌注期间血ALT变化及川芎嗪影响(表2) A组ALT缺血再灌注期间显著升高，尤以再灌注45min为著；B组仅见轻度升高，且明显低于同时相点A组(P<0.01)
, 百拇医药
2.5 HA与ALT之间的关系 直线相关分析显示，家兔及肝手术患者于缺血45min(或25min)和再灌注45min(或25min)，HA与ALT之间均存在着明显的正相关，相关系数r分别为(家兔)0.664(P<0.05)，0.844(P<0.01)和(患者)0.796(P<0.01)，0.890(P<0.01).
表2 两组肝癌手术患者各时相点血浆HA含量及ALT活性比较 (
±s)组别
n
缺血前
缺血25min
, 百拇医药
再灌25min
HA(ug/L)
A
9
0.39±0.10
0.51±0.13b
2.03±0.65bc
B
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0.38±0.10
0.40±0.08e
0.45±0.11ae
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ALT(U/L)
A
9
28.1± 8.3
95.1±12.2b
126.3±15.1bd
B
9
28.6± 8.4
33.9± 9.2f
41.4±16.3af
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aP<0.05，bP<0.01, vs 本组缺血前；cP<0.05，dP<0.01，vs 本组缺血45min；eP<0.05，fP<0.01，vs A组；A 表示肝缺血再灌注组，B 表示肝缺血再灌注+川芎嗪治疗组.
3 讨论
肝缺血再灌注期间，钙超载、能量缺乏及氧自由基的大量形成，共同导致血管内皮细胞损伤，从而引起内皮功能紊乱. 而循环血中透明质酸主要由肝内皮细胞摄取并分解，因此血浆HA变化可作为早期判断肝窦内皮细胞功能变化的间接指标. 本实验肝缺血及再灌注时血HA明显升高，提示缺血再灌注诱发内皮功能紊乱，导致肝窦内皮细胞摄取与分解功能障碍.
血管内皮细胞可合成释放一氧化氮和前列环素等，对其本身有重要的保护作用. 肝缺血再灌注期间，一氧化氮和前列环素合成、释放明显减少，使其抗自由基、内皮素及血栓素A2等作用削弱，致使血管保护作用减弱，进一步加重血管内皮损伤，形成“恶性循环”，共同促使HIRI的发生发展. 本实验结果显示，HIRI时HA与ALT同步升高，两者呈显著正相关，表明内皮细胞功能紊乱可诱发、加重HIRI.
, http://www.100md.com
川芎嗪是川芎的一种有效成分，广泛应用于脏器缺血再灌注损伤的防治[1-3]. 本文观察到，川芎嗪干预后缺血及再灌注时ALT均显著低于非干预组，说明川芎嗪能有效地防治HIRI. 另外，川芎嗪干预后HA亦明显较非干预组低，表明川芎嗪抗HIRI与其保护内皮并逆转其功能紊乱之作用有关. 其机制可能是通过影响血管舒缓素系统产生内皮保护作用，即川芎嗪由缓激肽及其受体途径升高一氧化氮而发挥治疗效应，这有待于进一步研究.
致谢 承检验系胡云良老师协助部分指标检测.
*浙江省教委科研基金资助课题，No.951118
通讯作者 王万铁
4 参考文献
1 林丽娜，王万铁，徐正介，李东. 川芎嗪抗心肌缺血再灌注损伤的临床研究. 中国中西医结合杂志，1997；17：261-263
2 王万铁，林丽娜，徐正介，李东. 氧自由基在家兔低血容量性休克-再灌注损伤中的作用及川芎嗪的保护效应. 中国危重病急救医学，1997；9：259-260
3 王万铁，徐正介，林丽娜，李东，王宗敏. 川芎嗪注射液对家兔肝缺血再灌注损伤的保护作用观察. 中国危重病急救医学，1998；10：655-657
收稿日期 1999-02-05 修回日期 1999-03-28, 百拇医药