凹甲陆龟染色体组型的研究
作者：方 玲 胡启平
单位：(广西医科大学生物学教研室 南宁 530021)
关键词：凹甲陆龟；染色体组型；遗传
广西医科大学学报990635
摘要 目的：研究凹甲陆龟Testudo impressa(Guenther)的染色体组型及减数分裂染色体。方法：以离体培养的外周血淋巴细胞、骨髓和精巢为材料，按常规的秋水仙素-低渗-空气干燥制片法制片和组型分析。结果：凹甲陆龟染色体数2n＝52，包括A组8对大型中部和亚中部着丝粒染色体，B组7对大型亚端部和端部着丝粒染色体及C组11对微小染色体。精母细胞减数分裂终变期显示具有26个二价体。雌雄细胞之间未见异型染色体。结论：凹甲陆龟在No.1、4～5、12～14号染色体的着丝粒位置上表现出种的特异性；在No.14染色体长臂近着丝粒区有一对明显的次缢痕。凹甲陆龟在近缘种间染色体组型的演化中较四爪陆龟和缅甸陆龟原始。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 Q959.63；Q953
THE STUDY ON THE KARYOTYPE OF TESTUDO IMPRESSA (GUENTHER)
Fang Ling,Hu Qiping
(Department of Biology,Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:For the first time,the Karyotype and the meiosis chromosome of Testudo impressa (Guenther) are reported in the research.Methods:The lymphocyte,marrow and spermary which are cultivated outside the body of Guenther are used as the experiment material.A routine method (the colchicine-hypotonic-air drying) is applied in the making of culture medium and the analysis of the Karyotype.Results:The diploid Testudo impressa (Guenther) has 2n=52,including 8 pairs with large metacentric and submetacentric chromosome in Group A,7 pairs with large acrocentric and telocentric chromosome in Group B,and 11 pairs microchromosome in Group C.The spermatocyte in diakinesis shows 26 bivalents.Abnormal chromosomes are not found among male and female cells.Conclusion:The specificity of species is found at the end of Nos.1,4～5,12～14 chromosome of Guenther after being compared with the Karyotypes.A pair of clear secondary constriction is also found at the close end of the long arm of No.14 chromosome.The compared results also indicate that Guenther is more primitive than Testudo horsfieldi Gray and Testudo elongata Blyth at the evolution of homologous Karyotype.
, 百拇医药
Key words testudo impressa (guenther);karyotype;inheritance
我国产龟鳖目动物计有26种，分隶6科15属[1]。其中陆龟科动物已知1属3种，四爪陆龟Testudo horsfieldi Gray和缅甸陆龟Testudo elongata Blyth的染色体组型已有报道[2，3]，而凹甲陆龟Testudo impressa (Guenther)的染色体组型未见报道。凹甲陆龟Testudo impressa (Guenther)隶属爬行纲(Reptilia)龟鳖目(Testudinata)陆龟科(Testudi-
nidae)动物，在我国分布于海南岛、云南、广西等地，是一种常见的经济爬行动物并具药用价值。组型特征是一种分类性状，研究凹甲陆龟的染色体组型，可为我国爬行类动物种间亲缘关系的研究提供细胞遗传学方面的依据。
, http://www.100md.com
1 材料及方法
1.1材料：性成熟凹甲陆龟(1♀，1♂)于1998年5月和1999年4月购于南宁市交易市场。
1.2 方法
1.2.1 制片：染色体标本制备按文献[3]外周血淋巴细胞离体培养法略加改变。骨髓及精巢细胞染色体标本制备方法与笔者以往报道的相同[4]。
1.2.2 分析：染色体标本制片用2∶10的Giemsa磷酸缓冲液(pH6.8)染色30 min，自来水冲洗数秒，空气干燥。显微镜下对分散良好的染色体进行计数、测量，并选择10个优良的中期分裂相拍照、放大，按常规方法进行染色体组型分析。染色体分类采用Levan etal.(1964年)标准[5]。
2 结 果
, 百拇医药
2.1观察凹甲陆龟100个细胞的中期分裂相，其中含有52条(26对)染色体的细胞占89%，可以确定凹甲陆龟体细胞二倍体染色体数目为2n＝52，共配成26对同源染色体(图1，2)。根据着丝粒位置这些染色体可分为A、B、C3组。A组包括8对大型中部和亚中部着丝粒染色体，B组包括7对大型亚端部和端部着丝粒染色体，C组包括11对着丝粒位置难以确定的微小染色体。同时精母细胞减数分裂终变期显示其有26个二价体(图3)。由于性染色体分化程度很低，雌雄细胞之间未见异型染色体。
2.2 凹甲陆龟染色体相对长度、臂比和着丝粒指数的测量数据见表1，根据染色体的测量统计值，可划分染色体类型。
2.3 将凹甲陆龟与陆龟科其它两种动物[2，3]染色体的着丝粒位置进行了比较，结果见表2。
图1 凹甲陆龟中期分裂相(2n＝52)
, http://www.100md.com
图2 凹甲陆龟的染色体组型
图3 凹甲陆龟精母细胞减数分裂终变期
表1 凹甲陆龟染色体测量数据(
±s) 组别
No.
相对长度
臂比
着丝粒指数
类型
A
1
, http://www.100md.com
15.32±0.14
1.79±0.26
35.82±0.93
SM
2
10.97±0.11
1.18±0.08
45.83±1.79
M
B
3
7.54±0.34
, http://www.100md.com
4.50±0.23
18.18±0.86
ST
A
4
5.39±0.08
2.91±1.06
25.42±5.33
SM
B
5
5.35±0.04
10.70±0.83
, 百拇医药
8.55±0.11
T
6
5.26±0.09
6.67±0.89
13.04±0.31
ST
A
7
5.03±0.08
1.44±0.15
40.91±5.87
, http://www.100md.com M
8
4.71±0.02
1.39±0.23
41.75±4.09
M
9
4.12±0.15
1.12±0.41
47.25±3.30
M
10
4.02±0.28
, 百拇医药
1.38±0.11
42.05±2.74
M
B
11
3.34±0.05
3.14±0.50
24.14±0.69
ST
A
12
3.06±0.14
2.64±1.40
, http://www.100md.com
27.44±3.39
SM
B
13
2.74±0.21
5.00±0.22
16.67±0.78
ST
14
2.29±0.05
4.02±0.54
20.01±1.98
, 百拇医药
ST
15
2.26±0.12
8.01±0.43
11.11±0.48
T
C
16～26
1.83±0.16～1.37±0.15
T
表2 陆龟科3种动物染色体的着丝粒位置比较 染色体对
凹甲陆龟
, 百拇医药
缅甸陆龟
四爪陆龟
1、12
SM
M
M
2、7～10
M
M
M
3、6
ST
ST
, 百拇医药 ST
4
SM
ST
ST
5
T
ST
ST
11
ST
SM
ST
13、14
, 百拇医药
ST
SM
SM
15
T
SM
T
3 讨 论
3.1 2n＝52是龟鳖目染色体组型的基本特征。凹甲陆龟的染色体组型与国内已报道[2，3，6～8]的龟鳖目大多数种类的染色体组型是一致的，即2n＝52，由于大小染色体不同，明显分为大型染色体和微小染色体两类，大型染色体通常12～15对，其余是着丝粒位置难以确定的微小染色体。由于龟鳖目染色体数目的一致，故染色体类型是龟种重要的分类依据。
, 百拇医药
3.2 着丝粒位置、次缢痕是细胞分类学区分种(亚种)之间的有用指标。染色体形态的变化，特别是着丝粒位置及次缢痕的数目和分布，随不同的种类有较大的差异。我们对凹甲陆龟和陆龟科其它两种动物[2，3]染色体的着丝粒位置进行了比较，结果发现，凹甲陆龟与陆龟科其它两种动物在No.1、4～5、12～14号染色体的着丝粒位置不同。染色体组型分析发现，在No.14染色体长臂近着丝粒区有一对明显的次缢痕，其出现率为70.3%，是较稳定的特征。故凹甲陆龟作为陆龟科中一个独立的种，与它在形态上的特异性相应，在染色体水平上亦表现出种的特异性。
3.3 按照微小染色体由多变少，相应的大型染色体由少变多；或大型染色体由端部着丝粒(T)向中部着丝粒(M)染色体发展的演化趋势，在较进化的染色体组型中，主要是中部或亚中部着丝粒染色体。从表2可知，凹甲陆龟在No.1、12为SM；在No.5为T；在No.13、14为ST，其它两种龟的染色体依次为M，ST，SM。这说明凹甲陆龟在近缘种间染色体组型的演化中较四爪陆龟和缅甸陆龟原始。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 赵尔宓.我国龟鳖目校正名录及其地理分布.两栖爬行动物学报，1986，5(2):145～148
2 贾陈喜，许设科.四爪陆龟核型的研究.中国动物学会成立60周年纪念论文集，1994.475～478
3 黄满盈，陆含华，刘银英，等.缅甸陆龟染色体组型的研究.动物学杂志，1990，25(2):13～16
4 方 玲，胡启平，刘清华.虎纹蛙的染色体组型.广西医科大学学报，1998，15(2):17～19
5 Levan A，Zarman TD.Nonemclature for centromeric position on chromosomes.Hereditas，1964，52:201～220
6 高建民，叶冰莹，丁汉波.乌龟染色体组型的初步研究.两栖爬行动物学报，1986，5(2):98～101
7 黄满盈，刘清华.锯缘摄龟染色体组型的研究.广西医科大学学报，1994，11(3):302～304
8 郭超文，聂刘旺，汪 鸣.中国四种龟的细胞遗传学研究.遗传学报，1995，22(1):40～45
收稿日期：1999-06-28, 百拇医药
单位：(广西医科大学生物学教研室 南宁 530021)
关键词：凹甲陆龟；染色体组型；遗传
广西医科大学学报990635
摘要 目的：研究凹甲陆龟Testudo impressa(Guenther)的染色体组型及减数分裂染色体。方法：以离体培养的外周血淋巴细胞、骨髓和精巢为材料，按常规的秋水仙素-低渗-空气干燥制片法制片和组型分析。结果：凹甲陆龟染色体数2n＝52，包括A组8对大型中部和亚中部着丝粒染色体，B组7对大型亚端部和端部着丝粒染色体及C组11对微小染色体。精母细胞减数分裂终变期显示具有26个二价体。雌雄细胞之间未见异型染色体。结论：凹甲陆龟在No.1、4～5、12～14号染色体的着丝粒位置上表现出种的特异性；在No.14染色体长臂近着丝粒区有一对明显的次缢痕。凹甲陆龟在近缘种间染色体组型的演化中较四爪陆龟和缅甸陆龟原始。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 Q959.63；Q953
THE STUDY ON THE KARYOTYPE OF TESTUDO IMPRESSA (GUENTHER)
Fang Ling,Hu Qiping
(Department of Biology,Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:For the first time,the Karyotype and the meiosis chromosome of Testudo impressa (Guenther) are reported in the research.Methods:The lymphocyte,marrow and spermary which are cultivated outside the body of Guenther are used as the experiment material.A routine method (the colchicine-hypotonic-air drying) is applied in the making of culture medium and the analysis of the Karyotype.Results:The diploid Testudo impressa (Guenther) has 2n=52,including 8 pairs with large metacentric and submetacentric chromosome in Group A,7 pairs with large acrocentric and telocentric chromosome in Group B,and 11 pairs microchromosome in Group C.The spermatocyte in diakinesis shows 26 bivalents.Abnormal chromosomes are not found among male and female cells.Conclusion:The specificity of species is found at the end of Nos.1,4～5,12～14 chromosome of Guenther after being compared with the Karyotypes.A pair of clear secondary constriction is also found at the close end of the long arm of No.14 chromosome.The compared results also indicate that Guenther is more primitive than Testudo horsfieldi Gray and Testudo elongata Blyth at the evolution of homologous Karyotype.
, 百拇医药
Key words testudo impressa (guenther);karyotype;inheritance
我国产龟鳖目动物计有26种，分隶6科15属[1]。其中陆龟科动物已知1属3种，四爪陆龟Testudo horsfieldi Gray和缅甸陆龟Testudo elongata Blyth的染色体组型已有报道[2，3]，而凹甲陆龟Testudo impressa (Guenther)的染色体组型未见报道。凹甲陆龟Testudo impressa (Guenther)隶属爬行纲(Reptilia)龟鳖目(Testudinata)陆龟科(Testudi-
nidae)动物，在我国分布于海南岛、云南、广西等地，是一种常见的经济爬行动物并具药用价值。组型特征是一种分类性状，研究凹甲陆龟的染色体组型，可为我国爬行类动物种间亲缘关系的研究提供细胞遗传学方面的依据。
, http://www.100md.com
1 材料及方法
1.1材料：性成熟凹甲陆龟(1♀，1♂)于1998年5月和1999年4月购于南宁市交易市场。
1.2 方法
1.2.1 制片：染色体标本制备按文献[3]外周血淋巴细胞离体培养法略加改变。骨髓及精巢细胞染色体标本制备方法与笔者以往报道的相同[4]。
1.2.2 分析：染色体标本制片用2∶10的Giemsa磷酸缓冲液(pH6.8)染色30 min，自来水冲洗数秒，空气干燥。显微镜下对分散良好的染色体进行计数、测量，并选择10个优良的中期分裂相拍照、放大，按常规方法进行染色体组型分析。染色体分类采用Levan etal.(1964年)标准[5]。
2 结 果
, 百拇医药
2.1观察凹甲陆龟100个细胞的中期分裂相，其中含有52条(26对)染色体的细胞占89%，可以确定凹甲陆龟体细胞二倍体染色体数目为2n＝52，共配成26对同源染色体(图1，2)。根据着丝粒位置这些染色体可分为A、B、C3组。A组包括8对大型中部和亚中部着丝粒染色体，B组包括7对大型亚端部和端部着丝粒染色体，C组包括11对着丝粒位置难以确定的微小染色体。同时精母细胞减数分裂终变期显示其有26个二价体(图3)。由于性染色体分化程度很低，雌雄细胞之间未见异型染色体。
2.2 凹甲陆龟染色体相对长度、臂比和着丝粒指数的测量数据见表1，根据染色体的测量统计值，可划分染色体类型。
2.3 将凹甲陆龟与陆龟科其它两种动物[2，3]染色体的着丝粒位置进行了比较，结果见表2。
图1 凹甲陆龟中期分裂相(2n＝52)
, http://www.100md.com
图2 凹甲陆龟的染色体组型
图3 凹甲陆龟精母细胞减数分裂终变期
表1 凹甲陆龟染色体测量数据(
±s) 组别No.
相对长度
臂比
着丝粒指数
类型
A
1
, http://www.100md.com
15.32±0.14
1.79±0.26
35.82±0.93
SM
2
10.97±0.11
1.18±0.08
45.83±1.79
M
B
3
7.54±0.34
, http://www.100md.com
4.50±0.23
18.18±0.86
ST
A
4
5.39±0.08
2.91±1.06
25.42±5.33
SM
B
5
5.35±0.04
10.70±0.83
, 百拇医药
8.55±0.11
T
6
5.26±0.09
6.67±0.89
13.04±0.31
ST
A
7
5.03±0.08
1.44±0.15
40.91±5.87
, http://www.100md.com M
8
4.71±0.02
1.39±0.23
41.75±4.09
M
9
4.12±0.15
1.12±0.41
47.25±3.30
M
10
4.02±0.28
, 百拇医药
1.38±0.11
42.05±2.74
M
B
11
3.34±0.05
3.14±0.50
24.14±0.69
ST
A
12
3.06±0.14
2.64±1.40
, http://www.100md.com
27.44±3.39
SM
B
13
2.74±0.21
5.00±0.22
16.67±0.78
ST
14
2.29±0.05
4.02±0.54
20.01±1.98
, 百拇医药
ST
15
2.26±0.12
8.01±0.43
11.11±0.48
T
C
16～26
1.83±0.16～1.37±0.15
T
表2 陆龟科3种动物染色体的着丝粒位置比较 染色体对
凹甲陆龟
, 百拇医药
缅甸陆龟
四爪陆龟
1、12
SM
M
M
2、7～10
M
M
M
3、6
ST
ST
, 百拇医药 ST
4
SM
ST
ST
5
T
ST
ST
11
ST
SM
ST
13、14
, 百拇医药
ST
SM
SM
15
T
SM
T
3 讨 论
3.1 2n＝52是龟鳖目染色体组型的基本特征。凹甲陆龟的染色体组型与国内已报道[2，3，6～8]的龟鳖目大多数种类的染色体组型是一致的，即2n＝52，由于大小染色体不同，明显分为大型染色体和微小染色体两类，大型染色体通常12～15对，其余是着丝粒位置难以确定的微小染色体。由于龟鳖目染色体数目的一致，故染色体类型是龟种重要的分类依据。
, 百拇医药
3.2 着丝粒位置、次缢痕是细胞分类学区分种(亚种)之间的有用指标。染色体形态的变化，特别是着丝粒位置及次缢痕的数目和分布，随不同的种类有较大的差异。我们对凹甲陆龟和陆龟科其它两种动物[2，3]染色体的着丝粒位置进行了比较，结果发现，凹甲陆龟与陆龟科其它两种动物在No.1、4～5、12～14号染色体的着丝粒位置不同。染色体组型分析发现，在No.14染色体长臂近着丝粒区有一对明显的次缢痕，其出现率为70.3%，是较稳定的特征。故凹甲陆龟作为陆龟科中一个独立的种，与它在形态上的特异性相应，在染色体水平上亦表现出种的特异性。
3.3 按照微小染色体由多变少，相应的大型染色体由少变多；或大型染色体由端部着丝粒(T)向中部着丝粒(M)染色体发展的演化趋势，在较进化的染色体组型中，主要是中部或亚中部着丝粒染色体。从表2可知，凹甲陆龟在No.1、12为SM；在No.5为T；在No.13、14为ST，其它两种龟的染色体依次为M，ST，SM。这说明凹甲陆龟在近缘种间染色体组型的演化中较四爪陆龟和缅甸陆龟原始。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 赵尔宓.我国龟鳖目校正名录及其地理分布.两栖爬行动物学报，1986，5(2):145～148
2 贾陈喜，许设科.四爪陆龟核型的研究.中国动物学会成立60周年纪念论文集，1994.475～478
3 黄满盈，陆含华，刘银英，等.缅甸陆龟染色体组型的研究.动物学杂志，1990，25(2):13～16
4 方 玲，胡启平，刘清华.虎纹蛙的染色体组型.广西医科大学学报，1998，15(2):17～19
5 Levan A，Zarman TD.Nonemclature for centromeric position on chromosomes.Hereditas，1964，52:201～220
6 高建民，叶冰莹，丁汉波.乌龟染色体组型的初步研究.两栖爬行动物学报，1986，5(2):98～101
7 黄满盈，刘清华.锯缘摄龟染色体组型的研究.广西医科大学学报，1994，11(3):302～304
8 郭超文，聂刘旺，汪 鸣.中国四种龟的细胞遗传学研究.遗传学报，1995，22(1):40～45
收稿日期：1999-06-28, 百拇医药