银杏叶总黄酮对脑、心缺氧的保护作用
作者：章家胜 陈志武 赵维中 岑德意 方明
单位：章家胜 陈志武 赵维中 岑德意 方明(安徽医科大学药理教研室 合肥 230032)
关键词：银杏叶总黄酮；丙二醛；一氧化氮；脑缺氧；心脏缺氧
中国中医基础医学杂志990611 摘 要 目的 研究银杏叶总黄酮对脑、心缺氧的保护作用。方法 小鼠脑、心缺氧模型分别采用断头和挟闭气管术制备，一氧化氮(NO)含量用green法测定，丙二醛(MDA)含量用TBA法测定。结果 银杏叶总黄酮25、50、100 mg.kg-2显著延长夹闭气管后小鼠心电图时间和断头喘气时间，并呈量效关系，在25-100 mg.kg-1范围内，银杏叶总黄酮显著降低脑、心组织中MDA和NO含量。结论 银杏叶总黄酮对脑、心缺氧有显著保护作用，其作用可能与抑制膜脂质过氧化及减少NO有关。
, 百拇医药
proteive effects of TFG against cerebral
and myocardial anoxia in mice.
Zhang Jiasheng, Chen zhiwu, Zhao wei zhong et al
(Department of pharmacclogy, Anhui Medical University, Heiei, 230032)
Abstract:ATM: To study the protective effects of TFG against cerebral and myocardial anoxia. METHODS:The cerbral and myocardial anoxic models in mice wear made by means of Cutting head and clamping trachea respectively. The nitric oxide (NO) content was measured with green method. The TBA method was used to measured the malondialhyde (MDA) content. RESULTS:TFG 25, 50, 100mg.kg-1 markedly amd dose-dependently prolonged the EEG tine after clamping trachea and the grspimg tine induced by cutting head. 25-100 mg.kg-1 TFG significcantiy roduced the MDA and No contents in the myocardium and cerebrumof mice. CONCLLUSION:TFG has protective effects against myocardial and cerebral anoxia via attenuating lipid peroxidation and No.
, http://www.100md.com
Key words:TFG, cerebral anoxia, myocardial anoxia, malondialdehyde, nitrio oxide.
银杏叶总黄酮为银杏叶有效成分，文献报道银杏叶对冠心病、心绞痛、脑血管疾病有较好的疗效，但其对脑、心缺血缺氧治疗作用和机制如何，尚未见报道。现将银杏叶有效成分银杏叶总黄酮对小鼠脑，心缺氧的保护作用进行研究。
材料与方法
1 材料
银杏叶总黄酮(Total flavone of ginkgoTFG)：由湖南医药工业研究所提供；四氧甲基丙烷(Tetramethyoxy,TMP):sigma公司出品；硫代巴比要酸(Thjobarhituie acis,TBA)上海生化试剂二厂出品；N-1-萘乙二胺盐酸盐：上海化学试剂分装厂出品。
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2 动物
昆明种小白鼠，体重20g±2 g，雌雄各半，由安微医科大学实验动物中心提供(皖动实准O1)。
3 小鼠断头致脑缺氧模型[1]
取小白鼠50只，随机分为NS、人参皂甙(GS)对照组和TFG(25、50、100 mg.kg-1)三个剂量组，每组10只，ig受试药，1次.d-1×7d，最后一次用药2 h后，用大剪刀在小鼠双耳连线处快速断头，记录喘息持续时间。
4 夹闭气管致小鼠心脏缺氧模型[2]
小白鼠随机分组，每组10只，分为TFG25、50、100 mg.kg-1和NS；人参皂甙(GS)对照组，ig受试药，一次d-1×7d，最后一次给药2 h后，以水合氢醛麻醉(400 mg，kg-1，ip)，夹闭气管，立即记录心电图及时间，以心电消失为心脏停搏指标。
, 百拇医药
5 小鼠脑、心组织MDA和NO含量的测定
取小鼠40只，随机分为TFG25、50、100 mg.kg-1三个剂量组和NS、GS对照组。ig受试药，一次，d-1×7d，末次用药2h后，处死小鼠，快速取脑和心脏，称重后，匀浆量-20℃待测生化指标
按TBA法[3]以四氧甲基丙烷为标准在535nm处测定MDA含量；按Green法[4]测定NO含量。
实验结果
1 TFG对小鼠断头后喘气持续时间的影响
如表1所示，与NS对照组比较，TFG25、50、100 mg.kg-1各剂量组及人参皂甙(GS)阳性对照组，均可显著延长断头小鼠的张口动作持续时间，说明TFG有保护脑组织耐缺氧作用。
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表1 TFG对小鼠断头后喘气持续时间的影响(
±
，n=10) 组别
剂量
(mg.kg-1)
喘气时间
(S)
NS
—
16.8±2.3
GS
, 百拇医药
200
22.4±2.8**
TFG
25
20.9±2.1*
50
22.6±3.4**
100
25.2±3.6**
注：与NS比较：*P<0.05，**P<0.01。
2 TFG对夹闭气管小白鼠心脏缺氧的影响
, 百拇医药
如表2所示，与NS比较，TFG 25、50、100 mg.kg-1三个剂量组和GS组可显著延长小鼠夹闭气管后的心电时间，说明TFG具有保护小鼠心脏耐缺氧作用。
3 TFG对小鼠脑、心组织MDA含量的影响
如表3所示，与NS对照组比较，TFG25、50、100 mg.kg-1均可显著降低心脏组织自由基的脂质过氧化物——MDA的含量，TFG在100 mg.kg-1可显著降低脑组织MDA的含量。
表2 TFG对小鼠夹闭气管心脏缺氧的影响(±s，n=10) 组别
剂 量
, 百拇医药
(mg.kg-1)
心电时间
(min)
NS
—
8.7±1.2
GS
200
11.9±1.4**
TFG
25
10.6±1.5*
, http://www.100md.com
50
12.3±1.7**
100
13.5±1.6**
注：与NS比较：*P<0.05，**P<0.01。表3 TFG对小鼠脑、心组织MDA含量的影响(±s，n=10) 组别
剂量(mg.kg-1)
MDA含量(n mol.g-1)
脑
, http://www.100md.com
心
NS
—
272.6±56.5
1548.3±151.5
GS
200
236.2±41.2**
1065.2±69.5**
TFG
25
268.5±42.8
, http://www.100md.com
1156.9±86.6**
50
244.1±44.9*
1050.9±64.9**
100
186.2±19.1**
945.8±58.3**
注：与NS对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。
4 TFG对小鼠脑，心组织NO含量的影响，如表4所示，与NS对照组比较，TFG25、50、100 mg*kg-1均可显著降低脑，心组织NO的含量。说明TFG保护脑，心组织缺氧与NO有关。
, 百拇医药
表4 TFG对小鼠脑、心组织NO含量的影响(±s，n=10) 组别
剂量(mg.kg-1)
NO含量(u mol.g-1)
脑
心
NS
—
2.85±0.76
7.30±1.71
GS
, 百拇医药
200
1.66±0.45**
4.26±0.65**
TFG
25
1.91±0.36*
4.68±0.91**
50
1.59±0.39**
4.25±0.84**
, http://www.100md.com 100
1.27±0.43**
3.40±0.48**
注：与NS对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。讨论
心脏缺血缺氧性疾病是临床上多发疾病，积极寻找开发对心脏缺血缺氧损伤有保护作用的药物是非常必要的。
本文研究表明，在小鼠夹闭气管致心脏缺氧模型上，TFG能显著延长夹闭气管后心电活动持续时间，在25～100.kg-1范围内有一定的量效关系，提示TFG对小鼠心脏缺氧损伤有一定的保护作用。
小鼠断头致脑缺血缺氧模型是一研究筛选抗脑缺血缺氧药物的较好模型。本文发现TFG25、50、100 mg.kg-2可显著延长小鼠断头后喘气时间，这说明TFG对小鼠脑缺血缺氧损伤也有一定的保护作用。
, http://www.100md.com
目前研究资料表明[5]，自由基与心脏缺血损伤分子机制关系密切，脑缺血缺氧后，细胞膜通透性增加，Ca2+内流增多，不仅造成脑内Ca2+超负荷，直接损伤细胞，而且激活一系列酶促反应，使自由基、NO等生成增多。本研究表明，TFG100.kg-1可显著降低心、脑组织中自由基膜脂质过氧化产物——MDA的含量，尤其对心脏MDA生成抑制更为明显，在25、50 kg.mg-1时就有明显的降低作用，说明该药可显著抑制心脏组织中自由基在膜脂质过氧化作用。
NO虽能扩张血管，增加器管的血流量，但也有一个不对称电子，也属于自由基，并可与羟自由基形成细胞毒作用很强的二氧化氮自由基，在缺血缺氧操作的病理过程中占有重要地位[6]。本研究表明该药可显著降低心脏组织中NO的含量，上述结果提示，该药可能通过抵制MDA和NO生成而对心脑缺血缺氧损伤产生保护作用。
, 百拇医药
综上所述，TFG对脑、心缺血缺氧损伤有一定保护作用，其作用可能在减少自由基膜脂质过氧化及NO有关，今后的工作将对TFG抗脑、心缺血缺氧作用及机理进行进一步的研究。
参考文献
1.徐超.药理实验方法学.第2版.见徐叔云主编.北京：人民卫生出版社，1991：948
2.后德辉，李玲，王秋娟.中国药理学通报 1987；3：186
3.陈志武，宋必卫，方明.芸香甙抗氧化作用的初步研究.中国药理学通报 1995；11：75
4.greenlc,tannenbaumSR,Goldmanp.Witrate synthesis in the germfree and convertional rats.Science,1981.212:56
5.冯贵友，汤光昭，王志平.木解皮素磷酸酯钾对大鼠急性脑缺血再灌损伤的保护作用.中国药理通报 1994；1：10：204
6.田恒力.一氧化氮与脑缺血.国外医学*脑血管病分册 1995；3(2)：59, 百拇医药
单位：章家胜 陈志武 赵维中 岑德意 方明(安徽医科大学药理教研室 合肥 230032)
关键词：银杏叶总黄酮；丙二醛；一氧化氮；脑缺氧；心脏缺氧
中国中医基础医学杂志990611 摘 要 目的 研究银杏叶总黄酮对脑、心缺氧的保护作用。方法 小鼠脑、心缺氧模型分别采用断头和挟闭气管术制备，一氧化氮(NO)含量用green法测定，丙二醛(MDA)含量用TBA法测定。结果 银杏叶总黄酮25、50、100 mg.kg-2显著延长夹闭气管后小鼠心电图时间和断头喘气时间，并呈量效关系，在25-100 mg.kg-1范围内，银杏叶总黄酮显著降低脑、心组织中MDA和NO含量。结论 银杏叶总黄酮对脑、心缺氧有显著保护作用，其作用可能与抑制膜脂质过氧化及减少NO有关。
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proteive effects of TFG against cerebral
and myocardial anoxia in mice.
Zhang Jiasheng, Chen zhiwu, Zhao wei zhong et al
(Department of pharmacclogy, Anhui Medical University, Heiei, 230032)
Abstract:ATM: To study the protective effects of TFG against cerebral and myocardial anoxia. METHODS:The cerbral and myocardial anoxic models in mice wear made by means of Cutting head and clamping trachea respectively. The nitric oxide (NO) content was measured with green method. The TBA method was used to measured the malondialhyde (MDA) content. RESULTS:TFG 25, 50, 100mg.kg-1 markedly amd dose-dependently prolonged the EEG tine after clamping trachea and the grspimg tine induced by cutting head. 25-100 mg.kg-1 TFG significcantiy roduced the MDA and No contents in the myocardium and cerebrumof mice. CONCLLUSION:TFG has protective effects against myocardial and cerebral anoxia via attenuating lipid peroxidation and No.
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Key words:TFG, cerebral anoxia, myocardial anoxia, malondialdehyde, nitrio oxide.
银杏叶总黄酮为银杏叶有效成分，文献报道银杏叶对冠心病、心绞痛、脑血管疾病有较好的疗效，但其对脑、心缺血缺氧治疗作用和机制如何，尚未见报道。现将银杏叶有效成分银杏叶总黄酮对小鼠脑，心缺氧的保护作用进行研究。
材料与方法
1 材料
银杏叶总黄酮(Total flavone of ginkgoTFG)：由湖南医药工业研究所提供；四氧甲基丙烷(Tetramethyoxy,TMP):sigma公司出品；硫代巴比要酸(Thjobarhituie acis,TBA)上海生化试剂二厂出品；N-1-萘乙二胺盐酸盐：上海化学试剂分装厂出品。
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2 动物
昆明种小白鼠，体重20g±2 g，雌雄各半，由安微医科大学实验动物中心提供(皖动实准O1)。
3 小鼠断头致脑缺氧模型[1]
取小白鼠50只，随机分为NS、人参皂甙(GS)对照组和TFG(25、50、100 mg.kg-1)三个剂量组，每组10只，ig受试药，1次.d-1×7d，最后一次用药2 h后，用大剪刀在小鼠双耳连线处快速断头，记录喘息持续时间。
4 夹闭气管致小鼠心脏缺氧模型[2]
小白鼠随机分组，每组10只，分为TFG25、50、100 mg.kg-1和NS；人参皂甙(GS)对照组，ig受试药，一次d-1×7d，最后一次给药2 h后，以水合氢醛麻醉(400 mg，kg-1，ip)，夹闭气管，立即记录心电图及时间，以心电消失为心脏停搏指标。
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5 小鼠脑、心组织MDA和NO含量的测定
取小鼠40只，随机分为TFG25、50、100 mg.kg-1三个剂量组和NS、GS对照组。ig受试药，一次，d-1×7d，末次用药2h后，处死小鼠，快速取脑和心脏，称重后，匀浆量-20℃待测生化指标
按TBA法[3]以四氧甲基丙烷为标准在535nm处测定MDA含量；按Green法[4]测定NO含量。
实验结果
1 TFG对小鼠断头后喘气持续时间的影响
如表1所示，与NS对照组比较，TFG25、50、100 mg.kg-1各剂量组及人参皂甙(GS)阳性对照组，均可显著延长断头小鼠的张口动作持续时间，说明TFG有保护脑组织耐缺氧作用。
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表1 TFG对小鼠断头后喘气持续时间的影响(
±，n=10) 组别剂量
(mg.kg-1)
喘气时间
(S)
NS
—
16.8±2.3
GS
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200
22.4±2.8**
TFG
25
20.9±2.1*
50
22.6±3.4**
100
25.2±3.6**
注：与NS比较：*P<0.05，**P<0.01。
2 TFG对夹闭气管小白鼠心脏缺氧的影响
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如表2所示，与NS比较，TFG 25、50、100 mg.kg-1三个剂量组和GS组可显著延长小鼠夹闭气管后的心电时间，说明TFG具有保护小鼠心脏耐缺氧作用。
3 TFG对小鼠脑、心组织MDA含量的影响
如表3所示，与NS对照组比较，TFG25、50、100 mg.kg-1均可显著降低心脏组织自由基的脂质过氧化物——MDA的含量，TFG在100 mg.kg-1可显著降低脑组织MDA的含量。
表2 TFG对小鼠夹闭气管心脏缺氧的影响(
±s，n=10) 组别剂 量
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(mg.kg-1)
心电时间
(min)
NS
—
8.7±1.2
GS
200
11.9±1.4**
TFG
25
10.6±1.5*
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50
12.3±1.7**
100
13.5±1.6**
注：与NS比较：*P<0.05，**P<0.01。表3 TFG对小鼠脑、心组织MDA含量的影响(
±s，n=10) 组别剂量(mg.kg-1)
MDA含量(n mol.g-1)
脑
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心
NS
—
272.6±56.5
1548.3±151.5
GS
200
236.2±41.2**
1065.2±69.5**
TFG
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268.5±42.8
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1156.9±86.6**
50
244.1±44.9*
1050.9±64.9**
100
186.2±19.1**
945.8±58.3**
注：与NS对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。
4 TFG对小鼠脑，心组织NO含量的影响，如表4所示，与NS对照组比较，TFG25、50、100 mg*kg-1均可显著降低脑，心组织NO的含量。说明TFG保护脑，心组织缺氧与NO有关。
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表4 TFG对小鼠脑、心组织NO含量的影响(
±s，n=10) 组别剂量(mg.kg-1)
NO含量(u mol.g-1)
脑
心
NS
—
2.85±0.76
7.30±1.71
GS
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200
1.66±0.45**
4.26±0.65**
TFG
25
1.91±0.36*
4.68±0.91**
50
1.59±0.39**
4.25±0.84**
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1.27±0.43**
3.40±0.48**
注：与NS对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。讨论
心脏缺血缺氧性疾病是临床上多发疾病，积极寻找开发对心脏缺血缺氧损伤有保护作用的药物是非常必要的。
本文研究表明，在小鼠夹闭气管致心脏缺氧模型上，TFG能显著延长夹闭气管后心电活动持续时间，在25～100.kg-1范围内有一定的量效关系，提示TFG对小鼠心脏缺氧损伤有一定的保护作用。
小鼠断头致脑缺血缺氧模型是一研究筛选抗脑缺血缺氧药物的较好模型。本文发现TFG25、50、100 mg.kg-2可显著延长小鼠断头后喘气时间，这说明TFG对小鼠脑缺血缺氧损伤也有一定的保护作用。
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目前研究资料表明[5]，自由基与心脏缺血损伤分子机制关系密切，脑缺血缺氧后，细胞膜通透性增加，Ca2+内流增多，不仅造成脑内Ca2+超负荷，直接损伤细胞，而且激活一系列酶促反应，使自由基、NO等生成增多。本研究表明，TFG100.kg-1可显著降低心、脑组织中自由基膜脂质过氧化产物——MDA的含量，尤其对心脏MDA生成抑制更为明显，在25、50 kg.mg-1时就有明显的降低作用，说明该药可显著抑制心脏组织中自由基在膜脂质过氧化作用。
NO虽能扩张血管，增加器管的血流量，但也有一个不对称电子，也属于自由基，并可与羟自由基形成细胞毒作用很强的二氧化氮自由基，在缺血缺氧操作的病理过程中占有重要地位[6]。本研究表明该药可显著降低心脏组织中NO的含量，上述结果提示，该药可能通过抵制MDA和NO生成而对心脑缺血缺氧损伤产生保护作用。
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综上所述，TFG对脑、心缺血缺氧损伤有一定保护作用，其作用可能在减少自由基膜脂质过氧化及NO有关，今后的工作将对TFG抗脑、心缺血缺氧作用及机理进行进一步的研究。
参考文献
1.徐超.药理实验方法学.第2版.见徐叔云主编.北京：人民卫生出版社，1991：948
2.后德辉，李玲，王秋娟.中国药理学通报 1987；3：186
3.陈志武，宋必卫，方明.芸香甙抗氧化作用的初步研究.中国药理学通报 1995；11：75
4.greenlc,tannenbaumSR,Goldmanp.Witrate synthesis in the germfree and convertional rats.Science,1981.212:56
5.冯贵友，汤光昭，王志平.木解皮素磷酸酯钾对大鼠急性脑缺血再灌损伤的保护作用.中国药理通报 1994；1：10：204
6.田恒力.一氧化氮与脑缺血.国外医学*脑血管病分册 1995；3(2)：59, 百拇医药