聚合酶链反应在肺结核诊断中的临床价值
作者：岑伟平 陈银石
单位：岑伟平 陈银石 广东省恩平市人民医院(529400)
关键词：
实用医学杂志990738 1993年1月～1998年12月应用聚合酶链反应(PCR)技术与痰直接涂片进行对比检测438例肺结核患者痰中结核杆菌，现将其结果分析如下。
1 资料与方法
1.1 病例选择 438例中，男366例，女72例，年龄20～79岁，平均56±37岁。浸润型肺结核360例，慢性纤维空洞型肺结核78例。初治258例，复治180例。另选择临床诊断非结核病人60例作为对照，其中慢性支气管炎并肺气肿31例，支气管扩张症11例，肺炎6例，肺癌并咯血12例。
1.2 仪器及试剂 PCR扩增仪系美国BE 9600型DNA扩增仪，PCR结核菌检测试剂盒购自上海复星公司，该试剂盒检测灵敏度为1 pg结核杆菌总DNA或10个菌。
, http://www.100md.com
1.3 标本来源 病人早晨彻底清洁口腔后，深咳出1～2口痰液(如果咯血取脓血痰)留于加盖无菌容器内立即送检。PCR和涂片均是同一样痰液。
1.4 检测方法 PCR检测按试剂盒说明书进行操作，在紫外检测仪下观察到一条清晰橙黄色227 bp片段(与阳性对照处于同一位置)则为结核杆菌复合群感染阳性；涂片以抗酸染色在镜检100个视野有3条抗酸杆菌为阳性，镜检300个视野未见抗酸杆菌为阴性。
2 结果
438例晨痰检测PCR阳性367例，阳性率为83.8%；直接痰涂片阳性115例，阳性率为26.3%，这115例PCR检测全部阳性，PCR的阳性率明显高于直接涂片(P<0.001)。涂片阴性323例中PCR检出阳性252例。
60例非肺结核性肺脏疾病患者中PCR检出阳性6例(肺癌2例，慢性支气管炎2例，支气管扩张1例)；涂片未检出阳性者。
, 百拇医药
经常规治疗3～6个月后，PCR复查198例，阳性158例，阳性率79.8%；涂片复查115例，阳性12例，阳性率10.4%。
3 讨论
本组438例肺结核患者同一痰标本结核菌检测，PCR阳性率为83.8%(367/438)，涂片阳性率为26.3%(115/438)，两者有极显著性差异(P<0.001)；在痰涂阳病人中PCR检测全部阳性；在痰涂阴病人中，PCR检出阳性率为78%(252/323)。文献报道肺结核患者痰标本结核菌阳性率PCR明显高于涂片和培养，尤在结核早期感染时细菌量少或化疗后细菌变异死亡难于培养时更明显[1，2]。现认为痰直接涂片阳性，每 ml痰液中至少有103～104结核杆菌；培养阳性，每ml痰液中至少有102～103结核杆菌；而PCR可检出101～102结核杆菌。因此，PCR特别适合涂阳结核病的早期诊断和鉴别诊断[3]。PCR检测结核杆菌不受细菌活力和形态的影响，只要细菌DNA尚未变性，可检出痰液中死亡和非正常形态的结核杆菌，给结核病化疗后结核杆菌检测和判断疗效提供了简便方法。
, 百拇医药
本组病人经过正规的抗结核治疗3～6个月后，临床症状和胸片显示均有明显好转，但PCR复检阳性率仍为79.8%(158/198)，程绍基等[4]报道26例活动性肺结核治疗6个月后检测阳性率为88.0%(22/25)。这种治疗后PCR仍阳性的持续时间及其临床意义还不清楚，但说明PCR检测结核病患者还不能鉴别是现症感染抑或既往感染及隐性感染，也不能作为疗效考核的依据。
本组在肺癌、慢性支气管炎，支气管扩张等非结核病人中PCR检出假阳性6例，假阳性率为10%。陆强等[1]报道应用PCR检测102例非结核病痰标本中，6例肺癌、4例慢性支气管炎、3例支气管扩张者的PCR-TB-DNA阳性。考虑可能是肿瘤组织坏死时将隐性病灶中结核菌释放经PCR扩增后呈TB-DNA阳性或可能是以上患者有慢性肺部疾病，造成局部免疫力低下，使隐性感染或临床上认为已稳妥的病灶中的结核菌有机会复燃而呈PCR-TB-DNA阳性[2]。另外由于PCR具有极高灵敏性，因而在技术操作中易造成污染而呈假阳性[5]。
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4 参考文献
1 陆 强，姜启千. 聚合酶链检测痰标本中结核菌的临床应用. 新医学，1998，29(7)351～352.
2 张 斌，谭耀驹，谭守勇，等. 聚合酶链反应用于涂阳结核病早期诊断的评价. 中华结核和呼吸杂志，1998，21(1)：60.
3 程绍基，马
，潘毓萱. 聚合酶链反应在肺结核及矽肺结核诊断中应用的研究. 中华结核和呼吸杂志，1993，16(4)：221.
4 潘毓萱. PCR在结核病临床诊断中的应用及存在问题. 中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：197～198., 百拇医药
单位：岑伟平 陈银石 广东省恩平市人民医院(529400)
关键词：
实用医学杂志990738 1993年1月～1998年12月应用聚合酶链反应(PCR)技术与痰直接涂片进行对比检测438例肺结核患者痰中结核杆菌，现将其结果分析如下。
1 资料与方法
1.1 病例选择 438例中，男366例，女72例，年龄20～79岁，平均56±37岁。浸润型肺结核360例，慢性纤维空洞型肺结核78例。初治258例，复治180例。另选择临床诊断非结核病人60例作为对照，其中慢性支气管炎并肺气肿31例，支气管扩张症11例，肺炎6例，肺癌并咯血12例。
1.2 仪器及试剂 PCR扩增仪系美国BE 9600型DNA扩增仪，PCR结核菌检测试剂盒购自上海复星公司，该试剂盒检测灵敏度为1 pg结核杆菌总DNA或10个菌。
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1.3 标本来源 病人早晨彻底清洁口腔后，深咳出1～2口痰液(如果咯血取脓血痰)留于加盖无菌容器内立即送检。PCR和涂片均是同一样痰液。
1.4 检测方法 PCR检测按试剂盒说明书进行操作，在紫外检测仪下观察到一条清晰橙黄色227 bp片段(与阳性对照处于同一位置)则为结核杆菌复合群感染阳性；涂片以抗酸染色在镜检100个视野有3条抗酸杆菌为阳性，镜检300个视野未见抗酸杆菌为阴性。
2 结果
438例晨痰检测PCR阳性367例，阳性率为83.8%；直接痰涂片阳性115例，阳性率为26.3%，这115例PCR检测全部阳性，PCR的阳性率明显高于直接涂片(P<0.001)。涂片阴性323例中PCR检出阳性252例。
60例非肺结核性肺脏疾病患者中PCR检出阳性6例(肺癌2例，慢性支气管炎2例，支气管扩张1例)；涂片未检出阳性者。
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经常规治疗3～6个月后，PCR复查198例，阳性158例，阳性率79.8%；涂片复查115例，阳性12例，阳性率10.4%。
3 讨论
本组438例肺结核患者同一痰标本结核菌检测，PCR阳性率为83.8%(367/438)，涂片阳性率为26.3%(115/438)，两者有极显著性差异(P<0.001)；在痰涂阳病人中PCR检测全部阳性；在痰涂阴病人中，PCR检出阳性率为78%(252/323)。文献报道肺结核患者痰标本结核菌阳性率PCR明显高于涂片和培养，尤在结核早期感染时细菌量少或化疗后细菌变异死亡难于培养时更明显[1，2]。现认为痰直接涂片阳性，每 ml痰液中至少有103～104结核杆菌；培养阳性，每ml痰液中至少有102～103结核杆菌；而PCR可检出101～102结核杆菌。因此，PCR特别适合涂阳结核病的早期诊断和鉴别诊断[3]。PCR检测结核杆菌不受细菌活力和形态的影响，只要细菌DNA尚未变性，可检出痰液中死亡和非正常形态的结核杆菌，给结核病化疗后结核杆菌检测和判断疗效提供了简便方法。
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本组病人经过正规的抗结核治疗3～6个月后，临床症状和胸片显示均有明显好转，但PCR复检阳性率仍为79.8%(158/198)，程绍基等[4]报道26例活动性肺结核治疗6个月后检测阳性率为88.0%(22/25)。这种治疗后PCR仍阳性的持续时间及其临床意义还不清楚，但说明PCR检测结核病患者还不能鉴别是现症感染抑或既往感染及隐性感染，也不能作为疗效考核的依据。
本组在肺癌、慢性支气管炎，支气管扩张等非结核病人中PCR检出假阳性6例，假阳性率为10%。陆强等[1]报道应用PCR检测102例非结核病痰标本中，6例肺癌、4例慢性支气管炎、3例支气管扩张者的PCR-TB-DNA阳性。考虑可能是肿瘤组织坏死时将隐性病灶中结核菌释放经PCR扩增后呈TB-DNA阳性或可能是以上患者有慢性肺部疾病，造成局部免疫力低下，使隐性感染或临床上认为已稳妥的病灶中的结核菌有机会复燃而呈PCR-TB-DNA阳性[2]。另外由于PCR具有极高灵敏性，因而在技术操作中易造成污染而呈假阳性[5]。
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4 参考文献
1 陆 强，姜启千. 聚合酶链检测痰标本中结核菌的临床应用. 新医学，1998，29(7)351～352.
2 张 斌，谭耀驹，谭守勇，等. 聚合酶链反应用于涂阳结核病早期诊断的评价. 中华结核和呼吸杂志，1998，21(1)：60.
3 程绍基，马
，潘毓萱. 聚合酶链反应在肺结核及矽肺结核诊断中应用的研究. 中华结核和呼吸杂志，1993，16(4)：221.4 潘毓萱. PCR在结核病临床诊断中的应用及存在问题. 中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：197～198., 百拇医药