HPLC法测定石刁柏中的蜀葵氨酸含量
作者：刘惠文 韩振泰
单位：中国林业科学院森林环境与保护研究所 北京 100091
关键词：HPLC；蜀葵氨酸；石刁柏；柱后衍生
中草药990712 摘 要 采用Zorbaxrx-C18色谱柱，以0.05 mol/L醋酸钠-甲醇(80∶20)为流动相，邻苯二甲醛-2巯基乙醇做柱后衍生剂，利用荧光检测器的高效液相色谱法对石刁柏中的蜀葵氨酸进行了直接分离分析，方法简便、快速、重现性好，回收率为96.4%。
存在于棉花、萱草、百合等植物体内的蜀葵氨酸(altheine)在中草药物中所发挥的药学作用早已被人们所重视，这种成分在医疗上具有很显著的止咳平喘功效。石刁柏Asparagus officinalis俗称“芦笋”、“龙须菜”，属多年生宿根草本的百合科植物，实验证明，该植物体内含有较为丰富的蜀葵氨酸成分。笔者采用RP-HPLC法，邻苯二甲醛-2巯基乙醇柱后衍生，成功地进行了对石刁柏中蜀葵氨酸的分离与检测，得到回收率为96.4%，标准偏差为0.0042%的良好结果。
, 百拇医药
1 仪器与试剂
仪器：美国Waters公司高效液相色谱仪：包括M-510高压泵，M-710B自动进样器，M-470荧光检测器，M-730数据处理机，柱温控制系统。
试剂：甲醇、无水醋酸钠、硼酸、氢氧化钾为分析纯；邻苯二甲醛、2-巯基乙醇、蜀葵氨酸标准品为优级纯；水为重蒸水并经过0.45 μm滤膜过滤。
2 实验方法
2.1 样品制备：标准样品：准确称取蜀葵氨酸标准品5.2 mg于25 mL容量瓶中，用重蒸水溶解并定容，摇匀备用。样品制备：准确称取石刁柏植物样品5 g，剪碎研细后放入250 mL锥形瓶中，加入50 mL重蒸水在水浴上回流提取2 h，过滤定容于50 mL容量瓶中，滤液经0.45 μm滤膜过滤后上机检测。
2.2 色谱条件：色谱柱：Zorbaxrx-C18(0.46×25cm)，柱温：35℃，流动相：0.05 mol/L NaAc-CH3OH=80∶20，流速：0.8 mL/min，荧光检测器，λex：338 nm，λem：425 nm。
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3 实验结果
3.1 标准曲线绘制：准确吸取上述标准溶液2、4、6、8、10 mL，分别放入5个25 mL容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，摇匀。在上述色谱条件下，对以上5种浓度的标准溶液进行衍生、分离，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，同时得标准图谱见图1-A，蜀葵氨酸的线性回归方程为Y=30 165.03X+12 587.83，r=0.9842。
3.2 精密度试验：精确吸取石刁柏样品提取液5 μL，平行进样5次(n=5)，测得蜀葵氨酸的变异系数为0.94%，标准偏差为0.0042%。
3.3 回收率实验：精确称取2.8mg蜀葵氨酸标准品于已精确称量好的石刁柏样品中，重复样品制备过程，得测试液，进样10μL进行分析，计算蜀葵氨酸的回收率为96.4%。
3.4 样品测定：精确吸取样品提取液10μL进样分析，得样品分离图谱见图1-B，以外标定量法计算石刁柏提取液中蜀葵氨酸的含量，见表1。
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图1 石刁柏样品中蜀葵氨酸分离图
表1 样品中蜀葵氨酸含量 样品号
1
2
3
含量(g/100g)
0.598
0.463
0.482
4 讨论
本文根据蜀葵氨酸的分子结构确定了其在Zorbaxrx-C18反向分离柱上会有很强的保留，在对不同比例的醋酸纳/甲醇流动相进行的多次试验中，发现0.05 mol/L NaAc-CH3OH=80∶20，流速为0.8 mL/min时的分离效果最好。
, 百拇医药
由于氨基酸及其部分酰胺类物质的衍生物在荧光λex：338 nm、λem：425 nm波长处具有很强的吸收，所以本实验采用了邻苯二甲醛-2-巯基乙醇(OPA)柱后衍生，荧光检测器检测的方法进行了蜀葵氨酸的有效分离和检测，在此波长下，蜀葵氨酸的OPA衍生物具有很强的荧光吸收强度，不仅图谱清晰，峰形对称，同时还避免了许多其它物质的吸收干扰，使定量更加准确。
参考文献
1 中国林科院分析中心.现代实用仪器分析方法.北京：中国林业出版社，1994
2 Dorresteij R C.J Chromatogr，1996，A724：159
3 中国人民解放军南京军区药物研究组.中草药通讯，1972，3(4)：30
收稿日期：1998-09-28, 百拇医药
单位：中国林业科学院森林环境与保护研究所 北京 100091
关键词：HPLC；蜀葵氨酸；石刁柏；柱后衍生
中草药990712 摘 要 采用Zorbaxrx-C18色谱柱，以0.05 mol/L醋酸钠-甲醇(80∶20)为流动相，邻苯二甲醛-2巯基乙醇做柱后衍生剂，利用荧光检测器的高效液相色谱法对石刁柏中的蜀葵氨酸进行了直接分离分析，方法简便、快速、重现性好，回收率为96.4%。
存在于棉花、萱草、百合等植物体内的蜀葵氨酸(altheine)在中草药物中所发挥的药学作用早已被人们所重视，这种成分在医疗上具有很显著的止咳平喘功效。石刁柏Asparagus officinalis俗称“芦笋”、“龙须菜”，属多年生宿根草本的百合科植物，实验证明，该植物体内含有较为丰富的蜀葵氨酸成分。笔者采用RP-HPLC法，邻苯二甲醛-2巯基乙醇柱后衍生，成功地进行了对石刁柏中蜀葵氨酸的分离与检测，得到回收率为96.4%，标准偏差为0.0042%的良好结果。
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1 仪器与试剂
仪器：美国Waters公司高效液相色谱仪：包括M-510高压泵，M-710B自动进样器，M-470荧光检测器，M-730数据处理机，柱温控制系统。
试剂：甲醇、无水醋酸钠、硼酸、氢氧化钾为分析纯；邻苯二甲醛、2-巯基乙醇、蜀葵氨酸标准品为优级纯；水为重蒸水并经过0.45 μm滤膜过滤。
2 实验方法
2.1 样品制备：标准样品：准确称取蜀葵氨酸标准品5.2 mg于25 mL容量瓶中，用重蒸水溶解并定容，摇匀备用。样品制备：准确称取石刁柏植物样品5 g，剪碎研细后放入250 mL锥形瓶中，加入50 mL重蒸水在水浴上回流提取2 h，过滤定容于50 mL容量瓶中，滤液经0.45 μm滤膜过滤后上机检测。
2.2 色谱条件：色谱柱：Zorbaxrx-C18(0.46×25cm)，柱温：35℃，流动相：0.05 mol/L NaAc-CH3OH=80∶20，流速：0.8 mL/min，荧光检测器，λex：338 nm，λem：425 nm。
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3 实验结果
3.1 标准曲线绘制：准确吸取上述标准溶液2、4、6、8、10 mL，分别放入5个25 mL容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，摇匀。在上述色谱条件下，对以上5种浓度的标准溶液进行衍生、分离，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，同时得标准图谱见图1-A，蜀葵氨酸的线性回归方程为Y=30 165.03X+12 587.83，r=0.9842。
3.2 精密度试验：精确吸取石刁柏样品提取液5 μL，平行进样5次(n=5)，测得蜀葵氨酸的变异系数为0.94%，标准偏差为0.0042%。
3.3 回收率实验：精确称取2.8mg蜀葵氨酸标准品于已精确称量好的石刁柏样品中，重复样品制备过程，得测试液，进样10μL进行分析，计算蜀葵氨酸的回收率为96.4%。
3.4 样品测定：精确吸取样品提取液10μL进样分析，得样品分离图谱见图1-B，以外标定量法计算石刁柏提取液中蜀葵氨酸的含量，见表1。
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图1 石刁柏样品中蜀葵氨酸分离图
表1 样品中蜀葵氨酸含量 样品号
1
2
3
含量(g/100g)
0.598
0.463
0.482
4 讨论
本文根据蜀葵氨酸的分子结构确定了其在Zorbaxrx-C18反向分离柱上会有很强的保留，在对不同比例的醋酸纳/甲醇流动相进行的多次试验中，发现0.05 mol/L NaAc-CH3OH=80∶20，流速为0.8 mL/min时的分离效果最好。
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由于氨基酸及其部分酰胺类物质的衍生物在荧光λex：338 nm、λem：425 nm波长处具有很强的吸收，所以本实验采用了邻苯二甲醛-2-巯基乙醇(OPA)柱后衍生，荧光检测器检测的方法进行了蜀葵氨酸的有效分离和检测，在此波长下，蜀葵氨酸的OPA衍生物具有很强的荧光吸收强度，不仅图谱清晰，峰形对称，同时还避免了许多其它物质的吸收干扰，使定量更加准确。
参考文献
1 中国林科院分析中心.现代实用仪器分析方法.北京：中国林业出版社，1994
2 Dorresteij R C.J Chromatogr，1996，A724：159
3 中国人民解放军南京军区药物研究组.中草药通讯，1972，3(4)：30
收稿日期：1998-09-28, 百拇医药
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