云南琵琶甲脂溶性抗菌活性成分的研究△
作者：罗氚芸 刘 勇** 李 蕾
单位：罗氚芸 云南师范大学省农村能源工程重点实验室 昆明 650092；刘 勇** 李 蕾 云南大学省工业微生物发酵工程重点实验室
关键词：云南琵琶甲；药用昆虫；抗菌成分；4-乙基-1，3-苯二醇
中草药990803 摘 要 首次从云南琵琶甲Balaps japanensis yunnanensis Mars.的脂溶性提取物中分得5个化合物，分别鉴定为4-乙基-1，3-苯二醇(4-ethyl-1，3-benze-nediol,Ⅰ)，13-丙基二十五烷(13-propyl-pentacosane,Ⅱ)，胆甾醇(cholesterol,Ⅲ)，油酸(oleic acid,Ⅳ)和亚油酸(linoleic acid,Ⅴ)，经抗菌活性实验，结果表明化合物Ⅰ具有抗菌活性。
, 百拇医药
Studies on the Liposoluble Antibacterial Constituents of Yunnan Balaps
(Balaps japanensis yunnanenisis)
Luo Chuanyun, Liu Yong and Li Lei
(Laboratory of Countryside Energy of Yunnan Normal University, Kunming 650092)
Abstract Five compounds were isolated from Balaps japanensis yunnanensis Mars., a folk medicinal insect in Yunnan province of China. They were identified as 4-ethyl-1,3-benzenediol(Ⅰ), 13-propyl-pentacosane(Ⅱ), cholesterol(Ⅲ), oleic acid(Ⅳ)and linoleic acid (Ⅴ). Pharmacological screening showed that Ⅰ has antibacterial activity.
, 百拇医药
Key words Balaps japanensis yunnanensis Mars. 4-ethyl-1,3 benzenediol
云南琵琶甲Balaps japanensis yunnanensis Mars. 隶属鞘翅目Coeoptera拟步行虫科Tenebrionidae琵琶甲族Balaptini琵琶甲属Balaps Fab.，是云南民间长期使用的一种药用昆虫。云南民间用于治疗发烧、咳嗽、胃炎、疔疮肿痛等疑难杂症。目前国内外未见有关该虫的研究报道。经我们试验表明其脂溶性提取物具良好的抗细菌、真菌效果。本文首次报道从云南琵琶甲的脂溶性提取物中得到5个化合物的分离纯化、结构鉴定和抗菌活性测定工作。结果表明化合物Ⅰ具有抗菌活性。其余抗菌活性成分正在研究中。
1 仪器与试剂
折光率用阿贝折光仪(上海光学仪器厂)；熔点用显微熔点测定仪(温度计未校正)；IR用PE paragon-1000pc红外光谱仪；NMR用Bruker AM-400核磁共振仪测定；MS用VC Autospec 3000质谱仪测定。柱层析硅胶：100～200目，200～300目(青岛海洋化工厂产)；HPTLC(青岛海洋化工厂产)；显色剂为H2SO4(5%)-乙醇液；其它试剂均为化学纯或分析纯；云南琵琶甲收集于云南民间并由云南师范大学生科系李碧华鉴定。
, 百拇医药
2 提取与分离
0.8 kg甲虫，用乙醚提取3次，浓缩提取液得18.0 g浸膏。通过闪柱层析分离，以不同比例的石油醚-乙醚和乙醚-氯仿洗脱，分别得到单体化合物Ⅰ～Ⅴ。
3 抗菌活性实验
3.1 载药滤纸片：取定量用滤纸制成直径为10 mm的圆形纸片，放入含100×10-6被试药物的乙醚液中浸湿，吹干后备用。
3.2 抗菌活性试验：指示菌为枯草杆菌、大肠杆菌、藤黄八叠球菌和巨大芽孢杆菌。试管斜面菌种经营养肉汁培养基增菌20 h，取增菌液1 mL置平皿内，注入25 mL熔化并冷至45℃的营养肉汁琼脂培养基，摇匀，待冷却后贴上载药滤纸片，并以浸湿溶剂乙醚吹干的滤纸片为对照，于37℃(藤黄八叠球菌在28℃下)培育48 h后观察抑菌圈大小。实验结果见附表1。
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表1 抗菌活性实验结果(抑菌圈滤纸片外mm数) 化学成分
枯草杆菌
大肠杆菌
(n=3)
藤黄八
叠球菌
巨大芽
孢杆菌
Ⅰ
4
3
2
1.5
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Ⅱ
-
-
-
-
Ⅲ
-
-
-
-
Ⅳ
-
-
-
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-
Ⅴ
-
-
-
-
n为测定次数
4 结构鉴定
化合物Ⅰ：粉红色晶体，mp111.5℃～112.0℃，分子式C8H10O2。FeCl3显蓝紫色。EIMS m/z(%)：138(M+)，123，107，95，67，55。IRνKBrmaxcm-1：3 276(br,OH)，3 032,2 926,1 860,1 734,1 617,1 463,1 231,1 195,1 157,1 109, 1 051,848,720。1HNMR(CDCl3)δ：1.47(3 H，t，J=7.5 Hz，C8-H)，2.52(2 H，J=7.5 Hz，C7-H)，6.43(1 H，dd，J=3 Hz，8.5 Hz，C6-H)，6.52(1 H，d，J=2.8 Hz，C2-H)，6.57(1 H，d，J=8.5 Hz，C5-H)。13CNMR(CDCl3)δ：14.66(C8)，24.24(C7)，113.62(C6)，116.64(C5)，116.82(C2)，132.82(C4)，148.90(C3)，151.16(C1)。DEPT(CDCl3)δ：1个CH3(14.66)，1个CH2(24.24)，3个次甲基(113.82，116.64，116.82)，3个季碳(132.82，148.90，151.16)。该化合物的13CNMR谱数据表明与4-乙基-苯二醇(4-ethyl-1,3-benzenediol)的数据一致[1]，故Ⅰ的结构得到确定。
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化合物Ⅱ：白色蜡状物，mp<40℃，分子式C28H58。FABMS m/z：395(M+1)峰。EIMS m/z(%)：111，97，85，71，57(100)。IRνKBrmaxcm-1：2 957，2 850，1 463，1 377，719。1HNMR(CDCl3)δ：0.85(6 H，t，J=4 Hz，C11-CH3和C25-CH3)，1.08(3 H，m，C3′-CH3)，1.24(48 Hz，s，C2-H至C12-H，C14-H至C25-H，C1′-H和C2′-H)，1.60(1 H，m，C13-H)。13CNMR(CDCl3)δ：14.08(C1，C25)，22.67(C2，C24)，24.48(C3，C23)，27.11(C4，C22)，29.38(C5，C21)，29.72(C6，C20)，30.05(C7，C8，C18，C19)，30.39(C9，C17)，31.95(C10，C16)，36.67(C11，C15)，37.12(C12，C14)，32.78(C13)，37.45(C1′)，34.43(C2′)，19.72(C3′)。经光谱鉴定解析为13-丙基-二十五(碳)烷(13-propyl-pentacosane)。
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化合物Ⅲ：白色针晶，mp148.5℃～149.0℃，分子式C27H46O。FABMS m/z：387(M+1)，EIMS m/z：386(M+)。该化合物的IR，1H，13CNMR谱数据表明与胆甾醇的数据一致[2，3]，故Ⅲ的结构得到确定。
化合物Ⅳ：白色粉末，mp43℃～44℃，分子式C18H34O2。该化合物的FABMS、IR，1H，13CNMR数据与文献[3，4]油酸的数据一致，故Ⅳ的结构得到确定。
化合物Ⅴ：白色脂膏状物，mp<40℃，分子式C18H32O2，该化合物的FABMS，IR，1H，13CNMR数据与亚油酸的数据[4]一致，故Ⅴ的结构得到确定。
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参考文献
1 Pehk T, et al. Eestic NSV Tead,1970，19(4)：283
2 龚运淮.天然有机化合物的13C核磁共振化学位移.昆明：云南科技出版社，1986：243
3 Sadtler Research Laboratories INC. Nvciear Magnetic Rasonance Spectra. vol 16～18，1971：11902
4 沈其丰.核磁共振碳谱.北京：北京大学出版社，1988：273
收稿日期：1998-07-20, 百拇医药(罗氚芸 刘 勇** 李 蕾)
单位：罗氚芸 云南师范大学省农村能源工程重点实验室 昆明 650092；刘 勇** 李 蕾 云南大学省工业微生物发酵工程重点实验室
关键词：云南琵琶甲；药用昆虫；抗菌成分；4-乙基-1，3-苯二醇
中草药990803 摘 要 首次从云南琵琶甲Balaps japanensis yunnanensis Mars.的脂溶性提取物中分得5个化合物，分别鉴定为4-乙基-1，3-苯二醇(4-ethyl-1，3-benze-nediol,Ⅰ)，13-丙基二十五烷(13-propyl-pentacosane,Ⅱ)，胆甾醇(cholesterol,Ⅲ)，油酸(oleic acid,Ⅳ)和亚油酸(linoleic acid,Ⅴ)，经抗菌活性实验，结果表明化合物Ⅰ具有抗菌活性。
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Studies on the Liposoluble Antibacterial Constituents of Yunnan Balaps
(Balaps japanensis yunnanenisis)
Luo Chuanyun, Liu Yong and Li Lei
(Laboratory of Countryside Energy of Yunnan Normal University, Kunming 650092)
Abstract Five compounds were isolated from Balaps japanensis yunnanensis Mars., a folk medicinal insect in Yunnan province of China. They were identified as 4-ethyl-1,3-benzenediol(Ⅰ), 13-propyl-pentacosane(Ⅱ), cholesterol(Ⅲ), oleic acid(Ⅳ)and linoleic acid (Ⅴ). Pharmacological screening showed that Ⅰ has antibacterial activity.
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Key words Balaps japanensis yunnanensis Mars. 4-ethyl-1,3 benzenediol
云南琵琶甲Balaps japanensis yunnanensis Mars. 隶属鞘翅目Coeoptera拟步行虫科Tenebrionidae琵琶甲族Balaptini琵琶甲属Balaps Fab.，是云南民间长期使用的一种药用昆虫。云南民间用于治疗发烧、咳嗽、胃炎、疔疮肿痛等疑难杂症。目前国内外未见有关该虫的研究报道。经我们试验表明其脂溶性提取物具良好的抗细菌、真菌效果。本文首次报道从云南琵琶甲的脂溶性提取物中得到5个化合物的分离纯化、结构鉴定和抗菌活性测定工作。结果表明化合物Ⅰ具有抗菌活性。其余抗菌活性成分正在研究中。
1 仪器与试剂
折光率用阿贝折光仪(上海光学仪器厂)；熔点用显微熔点测定仪(温度计未校正)；IR用PE paragon-1000pc红外光谱仪；NMR用Bruker AM-400核磁共振仪测定；MS用VC Autospec 3000质谱仪测定。柱层析硅胶：100～200目，200～300目(青岛海洋化工厂产)；HPTLC(青岛海洋化工厂产)；显色剂为H2SO4(5%)-乙醇液；其它试剂均为化学纯或分析纯；云南琵琶甲收集于云南民间并由云南师范大学生科系李碧华鉴定。
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2 提取与分离
0.8 kg甲虫，用乙醚提取3次，浓缩提取液得18.0 g浸膏。通过闪柱层析分离，以不同比例的石油醚-乙醚和乙醚-氯仿洗脱，分别得到单体化合物Ⅰ～Ⅴ。
3 抗菌活性实验
3.1 载药滤纸片：取定量用滤纸制成直径为10 mm的圆形纸片，放入含100×10-6被试药物的乙醚液中浸湿，吹干后备用。
3.2 抗菌活性试验：指示菌为枯草杆菌、大肠杆菌、藤黄八叠球菌和巨大芽孢杆菌。试管斜面菌种经营养肉汁培养基增菌20 h，取增菌液1 mL置平皿内，注入25 mL熔化并冷至45℃的营养肉汁琼脂培养基，摇匀，待冷却后贴上载药滤纸片，并以浸湿溶剂乙醚吹干的滤纸片为对照，于37℃(藤黄八叠球菌在28℃下)培育48 h后观察抑菌圈大小。实验结果见附表1。
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表1 抗菌活性实验结果(抑菌圈滤纸片外mm数) 化学成分
枯草杆菌
大肠杆菌
(n=3)
藤黄八
叠球菌
巨大芽
孢杆菌
Ⅰ
4
3
2
1.5
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Ⅱ
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Ⅲ
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Ⅳ
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Ⅴ
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n为测定次数
4 结构鉴定
化合物Ⅰ：粉红色晶体，mp111.5℃～112.0℃，分子式C8H10O2。FeCl3显蓝紫色。EIMS m/z(%)：138(M+)，123，107，95，67，55。IRνKBrmaxcm-1：3 276(br,OH)，3 032,2 926,1 860,1 734,1 617,1 463,1 231,1 195,1 157,1 109, 1 051,848,720。1HNMR(CDCl3)δ：1.47(3 H，t，J=7.5 Hz，C8-H)，2.52(2 H，J=7.5 Hz，C7-H)，6.43(1 H，dd，J=3 Hz，8.5 Hz，C6-H)，6.52(1 H，d，J=2.8 Hz，C2-H)，6.57(1 H，d，J=8.5 Hz，C5-H)。13CNMR(CDCl3)δ：14.66(C8)，24.24(C7)，113.62(C6)，116.64(C5)，116.82(C2)，132.82(C4)，148.90(C3)，151.16(C1)。DEPT(CDCl3)δ：1个CH3(14.66)，1个CH2(24.24)，3个次甲基(113.82，116.64，116.82)，3个季碳(132.82，148.90，151.16)。该化合物的13CNMR谱数据表明与4-乙基-苯二醇(4-ethyl-1,3-benzenediol)的数据一致[1]，故Ⅰ的结构得到确定。
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化合物Ⅱ：白色蜡状物，mp<40℃，分子式C28H58。FABMS m/z：395(M+1)峰。EIMS m/z(%)：111，97，85，71，57(100)。IRνKBrmaxcm-1：2 957，2 850，1 463，1 377，719。1HNMR(CDCl3)δ：0.85(6 H，t，J=4 Hz，C11-CH3和C25-CH3)，1.08(3 H，m，C3′-CH3)，1.24(48 Hz，s，C2-H至C12-H，C14-H至C25-H，C1′-H和C2′-H)，1.60(1 H，m，C13-H)。13CNMR(CDCl3)δ：14.08(C1，C25)，22.67(C2，C24)，24.48(C3，C23)，27.11(C4，C22)，29.38(C5，C21)，29.72(C6，C20)，30.05(C7，C8，C18，C19)，30.39(C9，C17)，31.95(C10，C16)，36.67(C11，C15)，37.12(C12，C14)，32.78(C13)，37.45(C1′)，34.43(C2′)，19.72(C3′)。经光谱鉴定解析为13-丙基-二十五(碳)烷(13-propyl-pentacosane)。
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化合物Ⅲ：白色针晶，mp148.5℃～149.0℃，分子式C27H46O。FABMS m/z：387(M+1)，EIMS m/z：386(M+)。该化合物的IR，1H，13CNMR谱数据表明与胆甾醇的数据一致[2，3]，故Ⅲ的结构得到确定。
化合物Ⅳ：白色粉末，mp43℃～44℃，分子式C18H34O2。该化合物的FABMS、IR，1H，13CNMR数据与文献[3，4]油酸的数据一致，故Ⅳ的结构得到确定。
化合物Ⅴ：白色脂膏状物，mp<40℃，分子式C18H32O2，该化合物的FABMS，IR，1H，13CNMR数据与亚油酸的数据[4]一致，故Ⅴ的结构得到确定。
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参考文献
1 Pehk T, et al. Eestic NSV Tead,1970，19(4)：283
2 龚运淮.天然有机化合物的13C核磁共振化学位移.昆明：云南科技出版社，1986：243
3 Sadtler Research Laboratories INC. Nvciear Magnetic Rasonance Spectra. vol 16～18，1971：11902
4 沈其丰.核磁共振碳谱.北京：北京大学出版社，1988：273
收稿日期：1998-07-20, 百拇医药(罗氚芸 刘 勇** 李 蕾)