花鹿茸及马鹿茸不同部位精脒的含量测定
作者：董方言* 弥 宏 陈 颖 谷伟玲 胡 茁
单位：吉林省中医中药研究院中药研究所 长春 130021
关键词：
中草药990817 精脒属多胺类化合物，广泛分布于生物体内，在生物活跃组织中浓度较高，它对DNA、RNA和蛋白质的代谢有重要影响[1]。笔者采用732强酸型阳离子交换树脂纯化鹿茸多胺，利用高效液相色谱法对花鹿茸及马鹿茸不同部位中精脒的含量进行了测定。
1 仪器与试药
LC-6A型高效液相色谱仪，SPD-6AV型紫外检测器，C-R6A型数据处理机，732强酸型阳离子交换树脂(天津南开大学化工厂)，精脒标准品(瑞士进口分装)，1，6-己二胺(北京化工厂)，花鹿茸、马鹿茸(购自吉林省双阳鹿乡)，其它试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 色谱条件
色谱柱：C18柱，流动相：甲醇-水(6∶4)；流速1.2 mL/min；柱温25℃，紫外检测波长230 nm，灵敏度0.08AUFS，3 方法及结果
3.1 标准曲线的制备
3.1.1 内标溶液的配制：以0.1moL/L盐酸配制1，6-己二胺，0.5μmol/L的溶液。
3.1.2 精脒标准溶液的配制：以0.1mol/L盐酸配制成0.24 mol/L的溶液。
3.1.3 标准品溶液的苯甲酰化：分别吸取精脒标准品溶液0.5，1.5，2.5，3.5，4.5mL的1，6-己二胺内标溶液，以0.1mol/L盐酸定容至刻度。吸取各标准溶液1mL，苯甲酰氯5μL，充分振摇，放置20min，再分别加入饱和氯化钠溶液和乙醚各2mL，充分振摇，离心，吸取乙醚层，氮气吹干，以甲醇600μL溶解。用以上各浓度的标准品溶液，每次进样7～20μL，按上述色谱条件测定峰面积，以标准品峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，标准品浓度为横坐标，结果表明，精脒在24～216μg范围内呈良好的线性关系，标准曲线回归方程为Y=0.0749+20.304X,r=0.9992。
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3.2 样品的测定：分别称取花鹿茸、马鹿茸不同部位的粉末一定量于烧杯中，加5%三氯醋酸30 mL在40℃～50℃水浴上加热提取，重复两次，过滤，合并滤液，将滤液水浴蒸干，残渣加0.1 mol/L盐酸20mL溶解，以0.6～0.7mL/min速度通过已处理的732强酸型阳离子交换树脂，先以1 mol/L盐酸50mL洗脱杂质，再用6mol/L盐酸50mL洗脱多胺，洗脱液于水浴上浓缩至干，以0.1 mol/L盐酸少许溶解，置5mL量瓶中，加入内标溶液0.5mL，加0.1mol/L盐酸至刻度，摇匀。分别吸取各样品溶液1mL苯甲酰化，按上述高效液相色谱法测定。结果见表1。
表1 不同部位精脒含量测定结果 样品
部位
精脒含量(μmol/g)
花鹿茸
上
, http://www.100md.com
0.353
中
0.004
下
0.001
马鹿茸
上
0.403
中
0.196
下
0.073
3.3 加样回收试验：试验结果表明，精脒加样回收率为98.52%，RSD为3.24%(n=5)。
, 百拇医药
4 小结与讨论
4.1 本试验中采用苯甲酰衍生物法[2]，可使精脒等多胺类形成高消光物质以便检测。
4.2 马鹿茸和花鹿茸各部位在精脒含量上有显著差异，以此可以作为区分它们的指标之一。
参考文献
1 Wang B X,et al.Chem Pharm Bull,1998,36:2593
2 Redmone J W,et al.J Chromatogr,1979,170:479
收稿日期：1998-05-08, 百拇医药(董方言* 弥 宏 陈 颖 谷伟玲 胡 茁)
单位：吉林省中医中药研究院中药研究所 长春 130021
关键词：
中草药990817 精脒属多胺类化合物，广泛分布于生物体内，在生物活跃组织中浓度较高，它对DNA、RNA和蛋白质的代谢有重要影响[1]。笔者采用732强酸型阳离子交换树脂纯化鹿茸多胺，利用高效液相色谱法对花鹿茸及马鹿茸不同部位中精脒的含量进行了测定。
1 仪器与试药
LC-6A型高效液相色谱仪，SPD-6AV型紫外检测器，C-R6A型数据处理机，732强酸型阳离子交换树脂(天津南开大学化工厂)，精脒标准品(瑞士进口分装)，1，6-己二胺(北京化工厂)，花鹿茸、马鹿茸(购自吉林省双阳鹿乡)，其它试剂均为分析纯。
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2 色谱条件
色谱柱：C18柱，流动相：甲醇-水(6∶4)；流速1.2 mL/min；柱温25℃，紫外检测波长230 nm，灵敏度0.08AUFS，3 方法及结果
3.1 标准曲线的制备
3.1.1 内标溶液的配制：以0.1moL/L盐酸配制1，6-己二胺，0.5μmol/L的溶液。
3.1.2 精脒标准溶液的配制：以0.1mol/L盐酸配制成0.24 mol/L的溶液。
3.1.3 标准品溶液的苯甲酰化：分别吸取精脒标准品溶液0.5，1.5，2.5，3.5，4.5mL的1，6-己二胺内标溶液，以0.1mol/L盐酸定容至刻度。吸取各标准溶液1mL，苯甲酰氯5μL，充分振摇，放置20min，再分别加入饱和氯化钠溶液和乙醚各2mL，充分振摇，离心，吸取乙醚层，氮气吹干，以甲醇600μL溶解。用以上各浓度的标准品溶液，每次进样7～20μL，按上述色谱条件测定峰面积，以标准品峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，标准品浓度为横坐标，结果表明，精脒在24～216μg范围内呈良好的线性关系，标准曲线回归方程为Y=0.0749+20.304X,r=0.9992。
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3.2 样品的测定：分别称取花鹿茸、马鹿茸不同部位的粉末一定量于烧杯中，加5%三氯醋酸30 mL在40℃～50℃水浴上加热提取，重复两次，过滤，合并滤液，将滤液水浴蒸干，残渣加0.1 mol/L盐酸20mL溶解，以0.6～0.7mL/min速度通过已处理的732强酸型阳离子交换树脂，先以1 mol/L盐酸50mL洗脱杂质，再用6mol/L盐酸50mL洗脱多胺，洗脱液于水浴上浓缩至干，以0.1 mol/L盐酸少许溶解，置5mL量瓶中，加入内标溶液0.5mL，加0.1mol/L盐酸至刻度，摇匀。分别吸取各样品溶液1mL苯甲酰化，按上述高效液相色谱法测定。结果见表1。
表1 不同部位精脒含量测定结果 样品
部位
精脒含量(μmol/g)
花鹿茸
上
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0.353
中
0.004
下
0.001
马鹿茸
上
0.403
中
0.196
下
0.073
3.3 加样回收试验：试验结果表明，精脒加样回收率为98.52%，RSD为3.24%(n=5)。
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4 小结与讨论
4.1 本试验中采用苯甲酰衍生物法[2]，可使精脒等多胺类形成高消光物质以便检测。
4.2 马鹿茸和花鹿茸各部位在精脒含量上有显著差异，以此可以作为区分它们的指标之一。
参考文献
1 Wang B X,et al.Chem Pharm Bull,1998,36:2593
2 Redmone J W,et al.J Chromatogr,1979,170:479
收稿日期：1998-05-08, 百拇医药(董方言* 弥 宏 陈 颖 谷伟玲 胡 茁)