五种不同产地天仙子总生物碱的含量分析
作者：李惠芬* 卢继新 张晓梅 董志华
单位：天津医科大学药学院 300203
关键词：天仙子；生物碱；含量测定；紫外分光度度法
中草药990810 摘 要 应用紫外分光光度法，分别测定了5种不同产地(山西、宁波、辽宁、内蒙古、河北)天仙子中总生物碱的含量，其强吸收处在210 nm左右，被溶剂吸收覆盖，无法测量，加入溴甲酚绿使波长长移，可有效地排除试剂干扰，直接测定总生物碱含量。方法可靠、准确。平均回收率分别为99.67%，RSD=0.70%；97.69%，RSD=2.4%；99.55%，RSD=0.50%；100.9%，RSD=3.3%；98.77%，RSD=1.4%。
天仙子为茄科植物莨菪Hyoscyamus niger L.的干燥成熟种子，具有解痉止痛、安神定喘等作用[1]；近来被发现还具有抗癌活性[2]，但有大毒。其种子中所含生物碱主要为莨菪碱、阿托品及东莨菪碱[3]，曾用薄层扫描法对其作了测定[4]，为系统地进行方法学比较，又做了紫外光谱分析。通过显色反应，排除了试剂干扰，达到了直接测定总生物碱的目的。
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1 仪器与试剂
1.1 日本岛津UV-240分光光度计，PHS-2C酸度计；硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱标准品(中国药品生物制品检定所)；所用试剂均为分析纯。
1.2 硫酸阿托品标准溶液的配制：精密称取25 mg硫酸阿托品标准品，置25 mL容量瓶中，加水溶解，稀释至该度，摇匀。精密量取5.0 mL，置100 mL量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，为硫酸阿托品50.00 μg/mL的工作液。
1.3 标准溶液的配制：精称30 mg氢溴酸东莨菪碱标准品，置25 mL容量瓶中，加水溶解，稀至刻度，摇匀。精密量取5.0 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀至刻度，摇匀，为氢溴酸东莨菪碱60.00 μg/mL的工作液。
1.4 7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液配制：精密称取溴甲酚绿125 mg，用0.2 mol/L NaOH 12.50 mL溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2.55 g，加少量蒸馏水溶解后，转移至250 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至该度，摇匀，用pH计校正pH=4.42。
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2 试验方法
精密量取硫酸阿托品标准液置于精密加入10 mL氯仿的分液漏斗中，加入7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液3.00 mL，振摇1 min，静置1 h，取澄清的氯仿液，用1 cm比色池以试剂空白参比于417 nm处测定吸收度。
3 结果与讨论
3.1 吸收光谱：硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱及它们的混合物与溴甲酚绿形成离子对，用氯仿萃取后测定吸收光谱，在350～600 nm范围内均有一个吸收峰，峰形完全相同，最大吸收波长均为417 nm。
3.2 pH值对显色的影响：实验表明，硫酸阿托品、氢溴酸酸东莨菪碱及它们的混合物与溴甲酚绿形成的离子对在pH=3.70～4.52邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液中吸收度值稳定，当pH>4.80时吸收度值均明显下降，故选用pH=4.42缓冲溶液。
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3.3 试剂用量：7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液加入量，经试验硫酸阿托品100 μg/10 mL，加入7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液2～5 mL时，吸收度值稳定。氢溴酸东莨菪碱120 μg/10 mL，加入7.2×10-7 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲 2～5 mL时，吸收度值稳定。故选用溴甲酚绿缓冲溶液加入量3.00 mL为宜。
3.4 振摇时间：硫酸阿托品-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取时，振摇时间从1～4 min，吸收度值无变化，故振摇1 min。氢溴酸东莨菪碱-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取时，振摇时间从1～4 min，吸收度稳定，故振摇时间1 min。
3.5 萃取放置时间：硫酸阿托品-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取后，放置30～100 min，吸收度值稳定。氢溴酸东莨菪碱-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取后，放置30～100 min，吸收度值稳定。故放置时间选用60 min为宜。
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3.6 线性范围：硫酸阿托品：12.5～175 μg/10 mL，r=0.9991(n=7)；氢溴酸东莨菪碱：15～180 μg/10 mL，r=0.9961(n=5)。
3.7 稳定性：三种不同浓度标准品做稳定性实验，每隔2.5 h测定吸收度，可见硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱及其混合物在pH=4.42缓冲溶液中形成离子对8 h之内吸收度是稳定的。
3.8 加合性实验：分别测定硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱标准品，再测定与其量相同的阿、东的混合物标准品，其吸收度值相同。
3.9 方法回收率：在试样中精密加入标准阿、东混合液，按上述方法显色测定吸收度，计算回收率为99.75%。
3.10 精密度试验：用同一份样品按上述方法分别测定5 次，结果RSD为0.86%(辽宁产)，RSD为0.98%(内蒙产)，RSD为1.2%(河北产)。
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3.11 天仙子样品中总生物碱的含量测定：吸取提取液0.2 mL，置于精密加入10 mL氯仿的分液漏斗中，按试验方法显色，测定，由标准曲线计算含量，见表1。
表1 样品测定结果(n=6) 地区
含量(%)
RSD(%)
山西
0.1847
1.7
宁波
0.1369
5.2
辽宁
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0.1578
0.32
内蒙
0.1417
2.1
河北
0.1521
1.1
3.12 样品回收率测定：测定得山西、宁波、辽宁、内蒙古、河北产地的平均回收率分别为99.67%，RSD=0.70%；97.69%，RSD=2.4%；99.55%，RSD=0.50%；100.90%，RSD=3.3%；98.77%，RSD=1.4%。 参考文献
1 中华人民共和国药典.一部.1990：40
2 许欣荣，等.山东医科大学学报，1992，30(1)：82
3 江苏新医学院主编.中药大辞典.上册.上海：上海科学技术出版社，1997：322
4 李惠芬，等.第二届中日药品分析技术セミナ—，1994：130
收稿日期：1998-10-30, 百拇医药(李惠芬* 卢继新 张晓梅 董志华)
单位：天津医科大学药学院 300203
关键词：天仙子；生物碱；含量测定；紫外分光度度法
中草药990810 摘 要 应用紫外分光光度法，分别测定了5种不同产地(山西、宁波、辽宁、内蒙古、河北)天仙子中总生物碱的含量，其强吸收处在210 nm左右，被溶剂吸收覆盖，无法测量，加入溴甲酚绿使波长长移，可有效地排除试剂干扰，直接测定总生物碱含量。方法可靠、准确。平均回收率分别为99.67%，RSD=0.70%；97.69%，RSD=2.4%；99.55%，RSD=0.50%；100.9%，RSD=3.3%；98.77%，RSD=1.4%。
天仙子为茄科植物莨菪Hyoscyamus niger L.的干燥成熟种子，具有解痉止痛、安神定喘等作用[1]；近来被发现还具有抗癌活性[2]，但有大毒。其种子中所含生物碱主要为莨菪碱、阿托品及东莨菪碱[3]，曾用薄层扫描法对其作了测定[4]，为系统地进行方法学比较，又做了紫外光谱分析。通过显色反应，排除了试剂干扰，达到了直接测定总生物碱的目的。
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1 仪器与试剂
1.1 日本岛津UV-240分光光度计，PHS-2C酸度计；硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱标准品(中国药品生物制品检定所)；所用试剂均为分析纯。
1.2 硫酸阿托品标准溶液的配制：精密称取25 mg硫酸阿托品标准品，置25 mL容量瓶中，加水溶解，稀释至该度，摇匀。精密量取5.0 mL，置100 mL量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，为硫酸阿托品50.00 μg/mL的工作液。
1.3 标准溶液的配制：精称30 mg氢溴酸东莨菪碱标准品，置25 mL容量瓶中，加水溶解，稀至刻度，摇匀。精密量取5.0 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀至刻度，摇匀，为氢溴酸东莨菪碱60.00 μg/mL的工作液。
1.4 7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液配制：精密称取溴甲酚绿125 mg，用0.2 mol/L NaOH 12.50 mL溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2.55 g，加少量蒸馏水溶解后，转移至250 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至该度，摇匀，用pH计校正pH=4.42。
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2 试验方法
精密量取硫酸阿托品标准液置于精密加入10 mL氯仿的分液漏斗中，加入7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液3.00 mL，振摇1 min，静置1 h，取澄清的氯仿液，用1 cm比色池以试剂空白参比于417 nm处测定吸收度。
3 结果与讨论
3.1 吸收光谱：硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱及它们的混合物与溴甲酚绿形成离子对，用氯仿萃取后测定吸收光谱，在350～600 nm范围内均有一个吸收峰，峰形完全相同，最大吸收波长均为417 nm。
3.2 pH值对显色的影响：实验表明，硫酸阿托品、氢溴酸酸东莨菪碱及它们的混合物与溴甲酚绿形成的离子对在pH=3.70～4.52邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液中吸收度值稳定，当pH>4.80时吸收度值均明显下降，故选用pH=4.42缓冲溶液。
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3.3 试剂用量：7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液加入量，经试验硫酸阿托品100 μg/10 mL，加入7.2×10-4 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液2～5 mL时，吸收度值稳定。氢溴酸东莨菪碱120 μg/10 mL，加入7.2×10-7 mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲 2～5 mL时，吸收度值稳定。故选用溴甲酚绿缓冲溶液加入量3.00 mL为宜。
3.4 振摇时间：硫酸阿托品-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取时，振摇时间从1～4 min，吸收度值无变化，故振摇1 min。氢溴酸东莨菪碱-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取时，振摇时间从1～4 min，吸收度稳定，故振摇时间1 min。
3.5 萃取放置时间：硫酸阿托品-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取后，放置30～100 min，吸收度值稳定。氢溴酸东莨菪碱-溴甲酚绿离子对用氯仿萃取后，放置30～100 min，吸收度值稳定。故放置时间选用60 min为宜。
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3.6 线性范围：硫酸阿托品：12.5～175 μg/10 mL，r=0.9991(n=7)；氢溴酸东莨菪碱：15～180 μg/10 mL，r=0.9961(n=5)。
3.7 稳定性：三种不同浓度标准品做稳定性实验，每隔2.5 h测定吸收度，可见硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱及其混合物在pH=4.42缓冲溶液中形成离子对8 h之内吸收度是稳定的。
3.8 加合性实验：分别测定硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱标准品，再测定与其量相同的阿、东的混合物标准品，其吸收度值相同。
3.9 方法回收率：在试样中精密加入标准阿、东混合液，按上述方法显色测定吸收度，计算回收率为99.75%。
3.10 精密度试验：用同一份样品按上述方法分别测定5 次，结果RSD为0.86%(辽宁产)，RSD为0.98%(内蒙产)，RSD为1.2%(河北产)。
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3.11 天仙子样品中总生物碱的含量测定：吸取提取液0.2 mL，置于精密加入10 mL氯仿的分液漏斗中，按试验方法显色，测定，由标准曲线计算含量，见表1。
表1 样品测定结果(n=6) 地区
含量(%)
RSD(%)
山西
0.1847
1.7
宁波
0.1369
5.2
辽宁
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0.1578
0.32
内蒙
0.1417
2.1
河北
0.1521
1.1
3.12 样品回收率测定：测定得山西、宁波、辽宁、内蒙古、河北产地的平均回收率分别为99.67%，RSD=0.70%；97.69%，RSD=2.4%；99.55%，RSD=0.50%；100.90%，RSD=3.3%；98.77%，RSD=1.4%。 参考文献
1 中华人民共和国药典.一部.1990：40
2 许欣荣，等.山东医科大学学报，1992，30(1)：82
3 江苏新医学院主编.中药大辞典.上册.上海：上海科学技术出版社，1997：322
4 李惠芬，等.第二届中日药品分析技术セミナ—，1994：130
收稿日期：1998-10-30, 百拇医药(李惠芬* 卢继新 张晓梅 董志华)
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