难免流产患者蜕膜内淋巴细胞增殖活性及亚群的改变
作者：黄立萍 周龙书 蒋继娟
单位：广州军区广州总医院妇产科(510010)
关键词：难免流产；蜕膜；淋巴细胞增殖活性；T淋巴细胞亚群
广东医学990803 【摘要】 目的 了解难免流产患者蜕膜内淋巴细胞增殖活性及亚群的改变，探讨其局部免疫状况的变化。方法 采用同位素掺入法及OKT单克隆抗体，检测患者蜕膜内淋巴细胞增殖活性及T淋巴细胞亚群，并采用正常早孕妇女蜕膜作对照。结果 难免流产患者组蜕膜组织内淋巴细胞增殖活性显著高于正常早孕组蜕膜组织(P<0.05)，且OKT4细胞增多(P<0.05)，OKT8细胞减少 (P<0.05)，OKT4/OKT8比值增大(P<0.05)。结论 难免流产患者子宫蜕膜内局部的免疫功能是亢进的，与流产关系密切。
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Alterations of lymphoproliferation activity and T-lymphocyte subset in decidua tissue of the patients with inevitable abortion
Huang Liping, Z hou Longshu, Jiang Jijuan.
General Hospital of Guangzhou Command of PLA , Guangz hou 510010
【Abstract】 Objective To study the alterations of lymphopro liferation activity and T-lymphocyte subset in decidua tissue of the patients wi th inevitable abortion, and to reaserch the patients′ local immune function.Methods To test lymphoproliferation activity and T-lymphocyte s ubs et in decidua tissue of the patients with inevitable abortion. The decidua tissu e of normal pregnancy women were chosen as controls. Results Lymphoproliferation activity in the decidua tissue from the patients with inevitable abortion was higher (P<0.05), and OKT4 c ells were more (P<0.05), OKT8 cells were less (P<0.05), OKT4/OKT8 was more (P<0.05).Conclusion Local immune function of the patients with inevitable abortion is sthenic, ant it is relativ e to the abortion.
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【Key words】 Inevitable abortion Decidua tissue Lymphopr oliferation activity T-lymphocyte subset
在妊娠过程中，蜕膜是母体与胎儿滋养细胞接触最密切的组织，故蜕膜内淋巴细胞增殖活性及亚群的改变，对作为半同种移植物胚胎的免疫调节作用，是非常重要的。本研究采用放射性同位素掺入法及OKT单克隆抗体，分别检测难免流产患者子宫蜕膜内淋巴细胞增殖活性(PHA试验)及T淋巴细胞亚群的改变，并采用正常早孕妇女子宫蜕膜作对照，旨在了解难免流产患者子宫局部免疫状况的改变。
1 资料与方法
1.1 研究对象 1998年9～12月因难免流产在我院行刮宫术患者18 例，孕6～8周，年龄19～35岁；均经确诊为妊娠后出现无任何诱因的阴道多量流血，超过正常月经量，并有血块排出，伴阵发性下腹部疼痛，妇科检查发现子宫颈口已开大，个别病例可见胚胎组织堵塞于子宫口。20例正常妊娠要求人流者作为对照组，孕6～8周，年龄21～37岁，无急、慢性疾病。
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1.2 方法
1.2.1 标本收集 分别收集难免流产患者刮宫后的蜕膜组织，及正常妊娠人流后的蜕膜组织，洗去血液。
1.2.2 蜕膜内淋巴细胞的分离 将收集的蜕膜组织分别用PBS液洗涤3 次，经剪切、过滤后，加入淋巴细胞分离液，离心(2 000 r/min,20 min)，分别收集淋巴细胞，调至细胞含量为5×105 mL备用。
1.2.3 淋巴细胞增殖试验(PHA试验) 分别将已制备的淋巴细胞与植物凝结素(PHA)、3H-胸腺嘧啶(中科院上海核研究所提供)及10%小牛血清0.1 mL混合，置5 %CO2孵箱，37℃，72 h后，分别收集各孔淋巴细胞，经液闪计数器测定淋巴细胞增殖时摄入细胞内的3H-胸腺嘧啶的每分钟脉冲数(cpm)，以此观察难免流产及正常蜕膜组织内淋巴细胞增殖的情况。
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1.2.4 T淋巴细胞亚群的检测 将制备的淋巴细胞分装于3支试管内，分别加入T3，T4和T8吸附于绵羊红细胞表面的抗人T细胞单克隆抗体(武汉生物制品研究所提供)，加入梅格染液染色及姬姆萨液复染后镜检。观察标准：以3个以上绵羊红细胞吸附的T细胞为阳性细胞，以阳性细胞占200个细胞的百分数表示，以OKT系列定名。
1.2.5 统计方法 t检验及方差分析。
2 结果
2.1 淋巴细胞增殖活性 难免流产组及正常早孕组蜕膜内淋巴细胞增殖活性(cpm)分别为4866±611/min及3367±588/min，两组之间差异有显著性(P<0.0 5)。
2.2 淋巴细胞亚群 难免流产组及正常早孕组蜕膜内OKT4细胞分别为 (50.38±10.99)%及(38.67±9.10)%，OKT8细胞分别为(26.37±7.85)%及(39.11±9.80)%，OKT4/OKT8比值分别为1.91±0.39及1.02±0.34。各组之间差异均有显著性(P<0.05)。表明难免流产患者蜕膜内OKT4细胞增多，OKT8细胞减少，OKT4/OKT8比值增大。
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3 讨论
3.1 淋巴细胞与妊娠的关系 在正常的早孕蜕膜中可见T淋巴细胞[1]，在非孕期子宫内膜淋巴细胞中，T淋巴细胞占46%～50%。在孕期T细胞数量减少至仅占20%[2]，T细胞对妊娠可有两种作用，一种为免疫营养作用，如Th2免疫及其相关细胞因子，如IL-6和IL-10等有利于妊娠及正常胚胎生长发育；另一种为免疫杀伤作用，主要通过Th1免疫及其有关细胞因子，如IL-2和IFN-γ和IFN-α等影响生殖功能，并使胚胎受到损害。本研究结果表明，难免流产患者蜕膜内淋巴细胞增殖活性增强，提示其局部免疫活性增强。
3.2 淋巴细胞亚群与妊娠的关系 OKT4细胞主要为具有杀伤作用的T细胞，OKT8细胞主要为抑制作用的T细胞，机体的免疫状况取决于T 淋巴细胞各亚群的相对分布及比例。只有在OKT4与OKT8保持正常比例时，才能发挥正常的免疫作用，故检测OKT4、OKT8及OKT4/OKT8是评价患者免疫功能状况的一种较准确的方法[3]。本研究结果表明难免流产患者蜕膜内OKT 4细胞增多，OKT8细胞减少，OKT4/OKT8比值增大，提示难免流产患者蜕膜内免疫功能增强。
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3.3 子宫局部免疫与流产的关系 本研究显示，难免流产患者蜕膜组织内淋巴细胞增殖活性显著高于正常早孕蜕膜组织，且OKT4细胞增多，OKT8细胞减少，OKT4/OKT8比值增大，提示难免流产患者子宫局部免疫功能显著增强，从而影响生殖功能，使胚胎受致损害。正常妊娠时，淋巴细胞对胚胎的双重作用处于一种平衡状态，这种平衡倾向于使子宫免疫微环境有利于胚胎的免疫营养作用，任何因素破坏了这种平衡，均可激发子宫局部T淋巴细胞的活性，导致流产的发生。
参考文献
1 Ferry BL, Sargent IL, Starkey PM, et al. Cytotoxic activity against tropholblast and choriocarcinoma cells of large granular lymphocytes fro m human early pregnency decidua. Cell Immunol, 1991, 132:140
2 林其德.生殖免疫学进展.中华妇产科杂志，1998，33(1)：4
3 梁连铸，顾美皎.卵巢恶性肿瘤患者细胞免疫状态的研究及临床价值.中华肿瘤杂志，1990，12(6)：410, http://www.100md.com
单位：广州军区广州总医院妇产科(510010)
关键词：难免流产；蜕膜；淋巴细胞增殖活性；T淋巴细胞亚群
广东医学990803 【摘要】 目的 了解难免流产患者蜕膜内淋巴细胞增殖活性及亚群的改变，探讨其局部免疫状况的变化。方法 采用同位素掺入法及OKT单克隆抗体，检测患者蜕膜内淋巴细胞增殖活性及T淋巴细胞亚群，并采用正常早孕妇女蜕膜作对照。结果 难免流产患者组蜕膜组织内淋巴细胞增殖活性显著高于正常早孕组蜕膜组织(P<0.05)，且OKT4细胞增多(P<0.05)，OKT8细胞减少 (P<0.05)，OKT4/OKT8比值增大(P<0.05)。结论 难免流产患者子宫蜕膜内局部的免疫功能是亢进的，与流产关系密切。
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Alterations of lymphoproliferation activity and T-lymphocyte subset in decidua tissue of the patients with inevitable abortion
Huang Liping, Z hou Longshu, Jiang Jijuan.
General Hospital of Guangzhou Command of PLA , Guangz hou 510010
【Abstract】 Objective To study the alterations of lymphopro liferation activity and T-lymphocyte subset in decidua tissue of the patients wi th inevitable abortion, and to reaserch the patients′ local immune function.Methods To test lymphoproliferation activity and T-lymphocyte s ubs et in decidua tissue of the patients with inevitable abortion. The decidua tissu e of normal pregnancy women were chosen as controls. Results Lymphoproliferation activity in the decidua tissue from the patients with inevitable abortion was higher (P<0.05), and OKT4 c ells were more (P<0.05), OKT8 cells were less (P<0.05), OKT4/OKT8 was more (P<0.05).Conclusion Local immune function of the patients with inevitable abortion is sthenic, ant it is relativ e to the abortion.
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【Key words】 Inevitable abortion Decidua tissue Lymphopr oliferation activity T-lymphocyte subset
在妊娠过程中，蜕膜是母体与胎儿滋养细胞接触最密切的组织，故蜕膜内淋巴细胞增殖活性及亚群的改变，对作为半同种移植物胚胎的免疫调节作用，是非常重要的。本研究采用放射性同位素掺入法及OKT单克隆抗体，分别检测难免流产患者子宫蜕膜内淋巴细胞增殖活性(PHA试验)及T淋巴细胞亚群的改变，并采用正常早孕妇女子宫蜕膜作对照，旨在了解难免流产患者子宫局部免疫状况的改变。
1 资料与方法
1.1 研究对象 1998年9～12月因难免流产在我院行刮宫术患者18 例，孕6～8周，年龄19～35岁；均经确诊为妊娠后出现无任何诱因的阴道多量流血，超过正常月经量，并有血块排出，伴阵发性下腹部疼痛，妇科检查发现子宫颈口已开大，个别病例可见胚胎组织堵塞于子宫口。20例正常妊娠要求人流者作为对照组，孕6～8周，年龄21～37岁，无急、慢性疾病。
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1.2 方法
1.2.1 标本收集 分别收集难免流产患者刮宫后的蜕膜组织，及正常妊娠人流后的蜕膜组织，洗去血液。
1.2.2 蜕膜内淋巴细胞的分离 将收集的蜕膜组织分别用PBS液洗涤3 次，经剪切、过滤后，加入淋巴细胞分离液，离心(2 000 r/min,20 min)，分别收集淋巴细胞，调至细胞含量为5×105 mL备用。
1.2.3 淋巴细胞增殖试验(PHA试验) 分别将已制备的淋巴细胞与植物凝结素(PHA)、3H-胸腺嘧啶(中科院上海核研究所提供)及10%小牛血清0.1 mL混合，置5 %CO2孵箱，37℃，72 h后，分别收集各孔淋巴细胞，经液闪计数器测定淋巴细胞增殖时摄入细胞内的3H-胸腺嘧啶的每分钟脉冲数(cpm)，以此观察难免流产及正常蜕膜组织内淋巴细胞增殖的情况。
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1.2.4 T淋巴细胞亚群的检测 将制备的淋巴细胞分装于3支试管内，分别加入T3，T4和T8吸附于绵羊红细胞表面的抗人T细胞单克隆抗体(武汉生物制品研究所提供)，加入梅格染液染色及姬姆萨液复染后镜检。观察标准：以3个以上绵羊红细胞吸附的T细胞为阳性细胞，以阳性细胞占200个细胞的百分数表示，以OKT系列定名。
1.2.5 统计方法 t检验及方差分析。
2 结果
2.1 淋巴细胞增殖活性 难免流产组及正常早孕组蜕膜内淋巴细胞增殖活性(cpm)分别为4866±611/min及3367±588/min，两组之间差异有显著性(P<0.0 5)。
2.2 淋巴细胞亚群 难免流产组及正常早孕组蜕膜内OKT4细胞分别为 (50.38±10.99)%及(38.67±9.10)%，OKT8细胞分别为(26.37±7.85)%及(39.11±9.80)%，OKT4/OKT8比值分别为1.91±0.39及1.02±0.34。各组之间差异均有显著性(P<0.05)。表明难免流产患者蜕膜内OKT4细胞增多，OKT8细胞减少，OKT4/OKT8比值增大。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 淋巴细胞与妊娠的关系 在正常的早孕蜕膜中可见T淋巴细胞[1]，在非孕期子宫内膜淋巴细胞中，T淋巴细胞占46%～50%。在孕期T细胞数量减少至仅占20%[2]，T细胞对妊娠可有两种作用，一种为免疫营养作用，如Th2免疫及其相关细胞因子，如IL-6和IL-10等有利于妊娠及正常胚胎生长发育；另一种为免疫杀伤作用，主要通过Th1免疫及其有关细胞因子，如IL-2和IFN-γ和IFN-α等影响生殖功能，并使胚胎受到损害。本研究结果表明，难免流产患者蜕膜内淋巴细胞增殖活性增强，提示其局部免疫活性增强。
3.2 淋巴细胞亚群与妊娠的关系 OKT4细胞主要为具有杀伤作用的T细胞，OKT8细胞主要为抑制作用的T细胞，机体的免疫状况取决于T 淋巴细胞各亚群的相对分布及比例。只有在OKT4与OKT8保持正常比例时，才能发挥正常的免疫作用，故检测OKT4、OKT8及OKT4/OKT8是评价患者免疫功能状况的一种较准确的方法[3]。本研究结果表明难免流产患者蜕膜内OKT 4细胞增多，OKT8细胞减少，OKT4/OKT8比值增大，提示难免流产患者蜕膜内免疫功能增强。
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3.3 子宫局部免疫与流产的关系 本研究显示，难免流产患者蜕膜组织内淋巴细胞增殖活性显著高于正常早孕蜕膜组织，且OKT4细胞增多，OKT8细胞减少，OKT4/OKT8比值增大，提示难免流产患者子宫局部免疫功能显著增强，从而影响生殖功能，使胚胎受致损害。正常妊娠时，淋巴细胞对胚胎的双重作用处于一种平衡状态，这种平衡倾向于使子宫免疫微环境有利于胚胎的免疫营养作用，任何因素破坏了这种平衡，均可激发子宫局部T淋巴细胞的活性，导致流产的发生。
参考文献
1 Ferry BL, Sargent IL, Starkey PM, et al. Cytotoxic activity against tropholblast and choriocarcinoma cells of large granular lymphocytes fro m human early pregnency decidua. Cell Immunol, 1991, 132:140
2 林其德.生殖免疫学进展.中华妇产科杂志，1998，33(1)：4
3 梁连铸，顾美皎.卵巢恶性肿瘤患者细胞免疫状态的研究及临床价值.中华肿瘤杂志，1990，12(6)：410, http://www.100md.com