HPLC法测定黄连上清丸中黄芩苷含量
作者：姚仲青 金 芳
单位：南京市中医院 210001
关键词：
中草药990816 黄连上清丸为传统的中药制剂，收载于中国药典1995年版。但其质量控制标准仍不完善，文献报道亦仅对其中的小檗碱、蒽醌类作过定性或定量分析[1，2]，而对方中主药之一黄芩所含的主要活性成分黄芩苷的含量测定方法尚无报道。因此，我们对黄连上清丸中黄芩苷含量进行了测定。
1 仪器与试药
日本岛津LC-6AV高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，SCL-6A系统控制器，C-R3A色谱数据处理器，RHEO DY NE 7125进样阀，CTO-6A柱温箱。Spherisorb C18(4.6mm×300mm, 5μ)色谱柱，大连依利特公司；TS 0.5/20超声提取仪。
, 百拇医药
黄芩苷标准品，中国药品生物制品检定所；黄连上清丸，市售，为同一药厂生产，产地河南。
甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 实验方法及结果
2.1 色谱条件：Spherisorb C18柱(4.6mm×300mm 5μ)；流动相：甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.2)，流速0.7mL/min；检测波长：280nm；纸速1mm/min；灵敏度：0.08AUFS；柱温：30℃。黄芩苷标准品在此条件下的保留时间为13.1min。标品及样品的理论塔板数为3 800，样品分离度为2。
2.2 标准曲线的制备：精密称取黄芩苷标准品(60℃减压干燥4 h)12.8mg,置100mL量瓶内，50%乙醇溶解，并定容。精密吸取此溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置10mL量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度。分别吸取10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以黄芩苷量(μg)为纵坐标，峰面积为横坐标，回归方程为Y=(0.6356X-6.719)×10-4，r=0.9999，线性范围为0.256～1.28μg。
, 百拇医药
2.3 样品中黄芩苷含量测定：取黄连上清丸，研细，取粉末0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加50%乙醇40mL，超声提取20 min，再加50%乙醇至刻度，摇匀，静置。取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后直接进样测定。进样量10μL。以外标两点法计算含量，结果3批分别为0.551%，RSD=0.81%;0.563%,RSD=1.01%;0.526%,RSD=1.38%。
2.4 精密度试验：试验结果标准品RSD=0.89%，样品为RSD=1.11%(n=5)。
2.5 加样回收率的测定：试验结果黄芩苷的平均加样回收率为99.32%，RSD=0.87%(n=5)。
2.6 提取时间对样品中黄芩苷提出率的影响：取批号980401样品粉末0.5g，共4份，精密称定，按样品测定项下处理，提取时间及测定结果见表1(末按干燥计)。由表1可知，当样品经超声提取20 min后，即可将其中的黄芩苷较为完全地提出。
, 百拇医药
表1 提取时间与样品中黄芩苷提出率 提取时间
(min)
含量
(%)
P*
10
0.4959
<0.001
15
0.5185
<0.1
20
, http://www.100md.com
0.5316
>0.1
25
0.5320
*与25min组的比较 t检验
3 讨论
黄芩为方中主药之一，从所测三批样品数据可知，基本能达到药黄芩项下黄芩苷的含量要求。故建议黄连上清丸质量标准项下，应增订黄芩苷的含量测定项，并规定下限为0.54%。
参考文献
1 薛玉梅.中成药，1995，17(10)：17
2 王达妹，等.中成药，1995，17(2)：16
收稿日期：1998-06-05, 百拇医药
单位：南京市中医院 210001
关键词：
中草药990816 黄连上清丸为传统的中药制剂，收载于中国药典1995年版。但其质量控制标准仍不完善，文献报道亦仅对其中的小檗碱、蒽醌类作过定性或定量分析[1，2]，而对方中主药之一黄芩所含的主要活性成分黄芩苷的含量测定方法尚无报道。因此，我们对黄连上清丸中黄芩苷含量进行了测定。
1 仪器与试药
日本岛津LC-6AV高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，SCL-6A系统控制器，C-R3A色谱数据处理器，RHEO DY NE 7125进样阀，CTO-6A柱温箱。Spherisorb C18(4.6mm×300mm, 5μ)色谱柱，大连依利特公司；TS 0.5/20超声提取仪。
, 百拇医药
黄芩苷标准品，中国药品生物制品检定所；黄连上清丸，市售，为同一药厂生产，产地河南。
甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 实验方法及结果
2.1 色谱条件：Spherisorb C18柱(4.6mm×300mm 5μ)；流动相：甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.2)，流速0.7mL/min；检测波长：280nm；纸速1mm/min；灵敏度：0.08AUFS；柱温：30℃。黄芩苷标准品在此条件下的保留时间为13.1min。标品及样品的理论塔板数为3 800，样品分离度为2。
2.2 标准曲线的制备：精密称取黄芩苷标准品(60℃减压干燥4 h)12.8mg,置100mL量瓶内，50%乙醇溶解，并定容。精密吸取此溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置10mL量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度。分别吸取10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以黄芩苷量(μg)为纵坐标，峰面积为横坐标，回归方程为Y=(0.6356X-6.719)×10-4，r=0.9999，线性范围为0.256～1.28μg。
, 百拇医药
2.3 样品中黄芩苷含量测定：取黄连上清丸，研细，取粉末0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加50%乙醇40mL，超声提取20 min，再加50%乙醇至刻度，摇匀，静置。取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后直接进样测定。进样量10μL。以外标两点法计算含量，结果3批分别为0.551%，RSD=0.81%;0.563%,RSD=1.01%;0.526%,RSD=1.38%。
2.4 精密度试验：试验结果标准品RSD=0.89%，样品为RSD=1.11%(n=5)。
2.5 加样回收率的测定：试验结果黄芩苷的平均加样回收率为99.32%，RSD=0.87%(n=5)。
2.6 提取时间对样品中黄芩苷提出率的影响：取批号980401样品粉末0.5g，共4份，精密称定，按样品测定项下处理，提取时间及测定结果见表1(末按干燥计)。由表1可知，当样品经超声提取20 min后，即可将其中的黄芩苷较为完全地提出。
, 百拇医药
表1 提取时间与样品中黄芩苷提出率 提取时间
(min)
含量
(%)
P*
10
0.4959
<0.001
15
0.5185
<0.1
20
, http://www.100md.com
0.5316
>0.1
25
0.5320
*与25min组的比较 t检验
3 讨论
黄芩为方中主药之一，从所测三批样品数据可知，基本能达到药黄芩项下黄芩苷的含量要求。故建议黄连上清丸质量标准项下，应增订黄芩苷的含量测定项，并规定下限为0.54%。
参考文献
1 薛玉梅.中成药，1995，17(10)：17
2 王达妹，等.中成药，1995，17(2)：16
收稿日期：1998-06-05, 百拇医药