肿瘤坏死因子对正常和Graves病甲状腺细胞生长的调节△
作者：刘 超 段 宇 覃又文 刘翠萍 蒋须勤 张忠邦
单位：南京医科大学第一附属医院内分泌科 邮政编码：210029
关键词：甲状腺 肿瘤坏死因子 生长 细胞培养
江苏医药990901 摘要 目的：研究肿瘤坏死因子(TNF-α)在正常和Graves病(GD)甲状腺生长调节中的作用。方法：采用GD和甲状腺腺瘤旁正常组织，以细胞单层培养及非同位素标记的细胞增殖分析法，检测不同浓度TNF-α对甲状腺细胞生长功能的影响。结果：TNF-α对基础状态下正常甲状腺细胞的生长无明显调节作用，但剂量依赖性地抑制TSH对此类细胞增殖的刺激效应。在10-2～102ng/ml的浓度区间，TNF-α不影响GD甲状腺细胞基础及TSH诱导的生长功能。结论：TNF-α在甲状腺稳态和甲状腺肿大的发病机理中发挥重要作用。
, 百拇医药
Effect of Tumor Necrosis Factor-alpha on Growth of Human Normal
and Hyperfunctioning Thyroid Cells in Monolayer Culture
Liu Chao et al
Department of Endocrinolgy, First Affiliated Hospital,Nanjing Medical University, Nanjing
Abstract Objective: To investigate the effect of tumor necrosis factor-alpha(TNF-α) on the growth of normal and Graves' thyroid glands. Methods: Thyroid cells obtained from Graves' disease(GD) and paraadenomatous tissue of thyroid adenomas were cultured in a monolayer system. Non-radioactive proliferation assay were used to detect the growth function of thyrocytes. Results: TNF-α did not affect the proliferation of normal thyrocytes under basal conditions, while it inhibited TSH-induced thyroid cell growth in a dose-dependent manner. However, this cytokine of 10-2～102ng/ml exerted no effect on both basal and TSH-stimulated thyrocyte proliferation. Conclusion: TNF-α plays important roles in thyroid haemostasis and in the pathogenesis of goiter.
, 百拇医药
Key words Thyroid Growth Cell culture Tumor necrosis factor
TNF-α是主要由巨噬细胞和活化淋巴细胞产生的一类免疫活性多肽，有抗肿瘤、抗病毒及免疫调节作用。近年的研究表明，TNF-α可降低血清TSH和甲状腺激素水平，减少甲状腺摄碘率，并影响甲状腺球蛋白(Tg)等的合成与分泌[1～3]。但是，关于TNF-α对甲状腺细胞生长功能的调节作用仍存在不同观点[2，3]，其对正常与Graves病组织调控的差异尚未见报道。本文采用细胞培养方法，研究TNF-α对两类甲状腺细胞增殖功能的影响，以探讨其在机体稳态及自身免疫性甲状腺疾病(AITD)发病机理中的作用与地位。
材料与方法
一、甲状腺细胞培养
甲状腺取材于GD和甲状腺腺瘤旁正常组织。细胞培养采取我室建立的单层培养法[4，5]。96孔板中加入100μl含5mu/ml牛TSH(Sigma)的细胞悬液，细胞数为2×104/孔。
, http://www.100md.com
二、细胞增殖试验
细胞培养24小时后，换取含不同浓度TNF-α(Gibco)的试验液，继续孵育72小时，采用非同位素标记的细胞增殖分析法(Cell Titer 96TM non-radioactive proliferation ass ay)检测细胞生长功能。实验按厂家推荐的方法操作(Promega)，即于培养结束时，加入15μl染色液(Dye solution)，37℃孵育4小时，加入100μl中止液(solubilization/stop solution)，培养板于室温下放置过夜，次日由自动酶标仪于波长570nm测定吸光值。
三、统计学处理
所有实验均设8复孔。文中资料以均数±标准差表示。显著性差异采用F检验。
结 果
一、TNF-α对正常甲状腺细胞生长的调节
, 百拇医药
在无TSH刺激的基础状态下，TNF-α对正常甲状腺细胞的增殖无明显影响。但此因子能够剂量依赖性地抑制TSH对细胞生长的刺激效应(见附图)。
附图 TNF-α对正常甲状腺细胞生长的影响与对照组比较*P<0.05，**P<0.01
二、TNF-α对GD甲状腺细胞生长的调节
在10-2～102ng/ml的浓度区间，TNF-α不影响GD细胞基础及TSH诱导的增殖作用。
讨 论
众所周知，TSH和碘是调节甲状腺功能的主要因素。随着免疫学及细胞、分子生物学的进展，越来越多的资料表明，细胞因子也是一类十分重要的甲状腺生物调节剂[1～3，6～8]。TNF-α作为细胞因子网络中的重要成员，其在甲状腺稳态与AITD发生发展中的作用日益受到人们的关注。
, 百拇医药
本文结果显示，TNF-α显著抑制TSH对正常甲状腺细胞生长的刺激效应。由于甲状腺滤泡细胞能够表达TNF-α分子及其mRNA，细胞表面尚含有TNF-α受体[9]，结合本研究资料，我们认为，由淋巴细胞和/或甲状腺细胞产生的TNF-α可以通过自分泌和旁分泌等方式，由TNF-α受体介导，有效地调节甲状腺细胞的生长与分化功能。
GD是一种常见的甲状腺疾病，其发病机理涉及到细胞免疫和体液免疫的异常。我们曾证实，GD及桥本氏病患者血循环中TNF-α的含量明显高于正常对照组[10]。此外，我们还发现GD组织对TNF-α的反应模式有别于正常甲状腺[7]，提示TNF-α与AITD之间存在必然联系。本研究中，TNF-α并不影响GD甲状腺细胞的生长功能，进一步证明GD组织对TNF-α的反应性发生了变化，这可能是GD患者甲状腺肿大的原因之一。
尽管如此，由于甲状腺受多种调节因子的影响，而AITD的发病机理也错综复杂，故体外研究结果能否完全反映机体本身的实际状况尚待进一步探讨。
, http://www.100md.com
(致谢：衷心感谢德国Ruhr大学临床医院?Derwahl.M教授对本研究的支持与协助。)
△ 本课题受江苏省自然科学基金资助(BK 95080311)
参考文献
?[1] 蔡东升，等.国外医学内分泌分册 1997；17(1)：7.
?[2] Patwardhan NA, et al. Surgery 1991；110：972.
?[3] Zakarija M, et al. Endocrinol 1989；125：1260.
?[4] 刘超，等.中华医学杂志 1993；73(1)：45.
?[5] 刘超，等.中华内分泌代谢杂志 1993；9(3)：163.
, http://www.100md.com
?[6] 刘超，等.放射免疫学杂志 1994；7(3)：129.
?[7] 覃又文，等.放射免疫学杂志 1998；11(1)：6.
?[8] 刘超，等.中华内分泌代谢杂志 1998；14(2)：126.
?[9] Zheng RQ, et al. Immunol 1992；75(3)：456.
?[10] 刘超，等.江苏医药 1996；21(3)：295.
(1998年10月4日收稿 1999年3月29日修回), http://www.100md.com
单位：南京医科大学第一附属医院内分泌科 邮政编码：210029
关键词：甲状腺 肿瘤坏死因子 生长 细胞培养
江苏医药990901 摘要 目的：研究肿瘤坏死因子(TNF-α)在正常和Graves病(GD)甲状腺生长调节中的作用。方法：采用GD和甲状腺腺瘤旁正常组织，以细胞单层培养及非同位素标记的细胞增殖分析法，检测不同浓度TNF-α对甲状腺细胞生长功能的影响。结果：TNF-α对基础状态下正常甲状腺细胞的生长无明显调节作用，但剂量依赖性地抑制TSH对此类细胞增殖的刺激效应。在10-2～102ng/ml的浓度区间，TNF-α不影响GD甲状腺细胞基础及TSH诱导的生长功能。结论：TNF-α在甲状腺稳态和甲状腺肿大的发病机理中发挥重要作用。
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Effect of Tumor Necrosis Factor-alpha on Growth of Human Normal
and Hyperfunctioning Thyroid Cells in Monolayer Culture
Liu Chao et al
Department of Endocrinolgy, First Affiliated Hospital,Nanjing Medical University, Nanjing
Abstract Objective: To investigate the effect of tumor necrosis factor-alpha(TNF-α) on the growth of normal and Graves' thyroid glands. Methods: Thyroid cells obtained from Graves' disease(GD) and paraadenomatous tissue of thyroid adenomas were cultured in a monolayer system. Non-radioactive proliferation assay were used to detect the growth function of thyrocytes. Results: TNF-α did not affect the proliferation of normal thyrocytes under basal conditions, while it inhibited TSH-induced thyroid cell growth in a dose-dependent manner. However, this cytokine of 10-2～102ng/ml exerted no effect on both basal and TSH-stimulated thyrocyte proliferation. Conclusion: TNF-α plays important roles in thyroid haemostasis and in the pathogenesis of goiter.
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Key words Thyroid Growth Cell culture Tumor necrosis factor
TNF-α是主要由巨噬细胞和活化淋巴细胞产生的一类免疫活性多肽，有抗肿瘤、抗病毒及免疫调节作用。近年的研究表明，TNF-α可降低血清TSH和甲状腺激素水平，减少甲状腺摄碘率，并影响甲状腺球蛋白(Tg)等的合成与分泌[1～3]。但是，关于TNF-α对甲状腺细胞生长功能的调节作用仍存在不同观点[2，3]，其对正常与Graves病组织调控的差异尚未见报道。本文采用细胞培养方法，研究TNF-α对两类甲状腺细胞增殖功能的影响，以探讨其在机体稳态及自身免疫性甲状腺疾病(AITD)发病机理中的作用与地位。
材料与方法
一、甲状腺细胞培养
甲状腺取材于GD和甲状腺腺瘤旁正常组织。细胞培养采取我室建立的单层培养法[4，5]。96孔板中加入100μl含5mu/ml牛TSH(Sigma)的细胞悬液，细胞数为2×104/孔。
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二、细胞增殖试验
细胞培养24小时后，换取含不同浓度TNF-α(Gibco)的试验液，继续孵育72小时，采用非同位素标记的细胞增殖分析法(Cell Titer 96TM non-radioactive proliferation ass ay)检测细胞生长功能。实验按厂家推荐的方法操作(Promega)，即于培养结束时，加入15μl染色液(Dye solution)，37℃孵育4小时，加入100μl中止液(solubilization/stop solution)，培养板于室温下放置过夜，次日由自动酶标仪于波长570nm测定吸光值。
三、统计学处理
所有实验均设8复孔。文中资料以均数±标准差表示。显著性差异采用F检验。
结 果
一、TNF-α对正常甲状腺细胞生长的调节
, 百拇医药
在无TSH刺激的基础状态下，TNF-α对正常甲状腺细胞的增殖无明显影响。但此因子能够剂量依赖性地抑制TSH对细胞生长的刺激效应(见附图)。
附图 TNF-α对正常甲状腺细胞生长的影响与对照组比较*P<0.05，**P<0.01
二、TNF-α对GD甲状腺细胞生长的调节
在10-2～102ng/ml的浓度区间，TNF-α不影响GD细胞基础及TSH诱导的增殖作用。
讨 论
众所周知，TSH和碘是调节甲状腺功能的主要因素。随着免疫学及细胞、分子生物学的进展，越来越多的资料表明，细胞因子也是一类十分重要的甲状腺生物调节剂[1～3，6～8]。TNF-α作为细胞因子网络中的重要成员，其在甲状腺稳态与AITD发生发展中的作用日益受到人们的关注。
, 百拇医药
本文结果显示，TNF-α显著抑制TSH对正常甲状腺细胞生长的刺激效应。由于甲状腺滤泡细胞能够表达TNF-α分子及其mRNA，细胞表面尚含有TNF-α受体[9]，结合本研究资料，我们认为，由淋巴细胞和/或甲状腺细胞产生的TNF-α可以通过自分泌和旁分泌等方式，由TNF-α受体介导，有效地调节甲状腺细胞的生长与分化功能。
GD是一种常见的甲状腺疾病，其发病机理涉及到细胞免疫和体液免疫的异常。我们曾证实，GD及桥本氏病患者血循环中TNF-α的含量明显高于正常对照组[10]。此外，我们还发现GD组织对TNF-α的反应模式有别于正常甲状腺[7]，提示TNF-α与AITD之间存在必然联系。本研究中，TNF-α并不影响GD甲状腺细胞的生长功能，进一步证明GD组织对TNF-α的反应性发生了变化，这可能是GD患者甲状腺肿大的原因之一。
尽管如此，由于甲状腺受多种调节因子的影响，而AITD的发病机理也错综复杂，故体外研究结果能否完全反映机体本身的实际状况尚待进一步探讨。
, http://www.100md.com
(致谢：衷心感谢德国Ruhr大学临床医院?Derwahl.M教授对本研究的支持与协助。)
△ 本课题受江苏省自然科学基金资助(BK 95080311)
参考文献
?[1] 蔡东升，等.国外医学内分泌分册 1997；17(1)：7.
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?[10] 刘超，等.江苏医药 1996；21(3)：295.
(1998年10月4日收稿 1999年3月29日修回), http://www.100md.com