干扰能及联合化疗药物对人肺腺癌细胞A549生长的影响
作者：毛 山 孙丽华 陶 臻 乔 岩
单位：南京医科大学附属南京第一医院呼吸科(210006)
关键词：
江苏医药990932 1997年6月～1998年6月我院采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法，首次体外观察了干扰能及联合化疗药物对人肺腺癌细胞A549生长的影响，旨在为肺癌的治疗提供有价值的实验依据。
材料和方法
一、实验分组：设空白对照组(加培养基200μl)，细胞对照组(单细胞悬液100μl+培养液100μl)，实验组(单细胞悬液100μl+实验用药100μl)。每组设5个平行孔。
二、细胞培养：人肺腺癌A549细胞(购于中科院上海细胞生物研究所)培养于37℃5%CO2孵箱中，2～3代后同0.25%胰蛋白酶消化传代。培养基RPMI-1640(含15%小牛血清，青、链霉素各100μg/ml)，L-谷氨酰胺200?mg/L，用NaHCO3调节pH为7.2。
, 百拇医药
三、MTT法：将消化计数的单细胞悬液(计数为3×105/ml)加入96孔培养板中每孔100μl，药物100μl置37℃，5%CO2孵箱培养72小时后，每孔加入20μlMTT液(5mg/ml)。4小时后，弃上清液，加入二甲基亚砜100μl/孔，振荡15分钟，使MTT还原产物甲替完全溶解，用DG-3022A型酶联免疫检测仪测每孔OD值，波长570nm。根据OD值计算抑制率：
血药峰值浓度(PPC)：丝裂霉素(MMC)3.0mg/L，顺铂(DDP)3.0mg/L，阿霉素(ADM)0.4mg/L。以上药物实验前均用?RPMI-1640配制，实验时取其1/10峰值浓度量。
四、统计学处理：用t检验或方差分析。
, 百拇医药
结 果
一、不同浓度干扰能对人肺腺癌A549生长的影响：
不同浓度干扰能以剂量依赖方式显著增加对人肺癌细胞A549生长的抑制作用。其中1000u/ml(抑制率41%)、500u/ml(抑制率25%)、100u/ml(抑制率22%)显著高于50?u/ml(抑制率17%)，P<0.01。
二、不同化疗药物对人肺癌细胞A549生长的抑制作用：
加用不同浓度的干扰能(化疗药+干扰能50?u/ml和化疗药+干扰能100?1u/ml)后，三种化疗药物(MMC、DDP、ADM)较之单用药物对人肺腺癌细胞A549生长的抑制率显著增加：分别为单用MMC29%、MMC+干扰能50?u/ml100%，MMC+干扰能100?u/ml100%，P<0.01；单用DDP10%、DDP+干扰能50?u/ml30%、DDP+干扰能100?u/ml146%，P<0.05；单用ADM28%、ADM+干扰能50?u/ml40%、ADM+干扰能100?u/ml63%，P<0.05。单用三种化疗药物之间，化疗药(MMC、DDP、ADM)+干扰能50?u/ml及化疗药(MMC、DDP、ADM)+干扰能100?u/ml之间的抑制率比较显示：MMC>ADM>DDP(P<0.05)。
讨 论
近年来，干扰能在抗肿瘤中的作用受到广泛的重视。本研究结果显示干扰能以剂量依赖的方式显著增加对人肺腺癌细胞A549生长的抑制作用。
研究中我们还发现加用不同浓度的干扰能后，三种化疗药物较之单用化疗药对人肺癌细胞A549的敏感性显著增加，表明上述三种化疗药物与干扰能联用具有协同作用。
在相同剂量的峰值药物浓度及干扰能浓度下，三种化疗药物中丝裂霉素加用干扰能似有更强的肿瘤细胞杀伤力，提示对于人肺腺癌，丝裂霉素加用干扰能可能具有更好的疗效，有必要在临床上作进一步的验证。, http://www.100md.com
单位：南京医科大学附属南京第一医院呼吸科(210006)
关键词：
江苏医药990932 1997年6月～1998年6月我院采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法，首次体外观察了干扰能及联合化疗药物对人肺腺癌细胞A549生长的影响，旨在为肺癌的治疗提供有价值的实验依据。
材料和方法
一、实验分组：设空白对照组(加培养基200μl)，细胞对照组(单细胞悬液100μl+培养液100μl)，实验组(单细胞悬液100μl+实验用药100μl)。每组设5个平行孔。
二、细胞培养：人肺腺癌A549细胞(购于中科院上海细胞生物研究所)培养于37℃5%CO2孵箱中，2～3代后同0.25%胰蛋白酶消化传代。培养基RPMI-1640(含15%小牛血清，青、链霉素各100μg/ml)，L-谷氨酰胺200?mg/L，用NaHCO3调节pH为7.2。
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三、MTT法：将消化计数的单细胞悬液(计数为3×105/ml)加入96孔培养板中每孔100μl，药物100μl置37℃，5%CO2孵箱培养72小时后，每孔加入20μlMTT液(5mg/ml)。4小时后，弃上清液，加入二甲基亚砜100μl/孔，振荡15分钟，使MTT还原产物甲替完全溶解，用DG-3022A型酶联免疫检测仪测每孔OD值，波长570nm。根据OD值计算抑制率：
血药峰值浓度(PPC)：丝裂霉素(MMC)3.0mg/L，顺铂(DDP)3.0mg/L，阿霉素(ADM)0.4mg/L。以上药物实验前均用?RPMI-1640配制，实验时取其1/10峰值浓度量。
四、统计学处理：用t检验或方差分析。
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结 果
一、不同浓度干扰能对人肺腺癌A549生长的影响：
不同浓度干扰能以剂量依赖方式显著增加对人肺癌细胞A549生长的抑制作用。其中1000u/ml(抑制率41%)、500u/ml(抑制率25%)、100u/ml(抑制率22%)显著高于50?u/ml(抑制率17%)，P<0.01。
二、不同化疗药物对人肺癌细胞A549生长的抑制作用：
加用不同浓度的干扰能(化疗药+干扰能50?u/ml和化疗药+干扰能100?1u/ml)后，三种化疗药物(MMC、DDP、ADM)较之单用药物对人肺腺癌细胞A549生长的抑制率显著增加：分别为单用MMC29%、MMC+干扰能50?u/ml100%，MMC+干扰能100?u/ml100%，P<0.01；单用DDP10%、DDP+干扰能50?u/ml30%、DDP+干扰能100?u/ml146%，P<0.05；单用ADM28%、ADM+干扰能50?u/ml40%、ADM+干扰能100?u/ml63%，P<0.05。单用三种化疗药物之间，化疗药(MMC、DDP、ADM)+干扰能50?u/ml及化疗药(MMC、DDP、ADM)+干扰能100?u/ml之间的抑制率比较显示：MMC>ADM>DDP(P<0.05)。
讨 论
近年来，干扰能在抗肿瘤中的作用受到广泛的重视。本研究结果显示干扰能以剂量依赖的方式显著增加对人肺腺癌细胞A549生长的抑制作用。
研究中我们还发现加用不同浓度的干扰能后，三种化疗药物较之单用化疗药对人肺癌细胞A549的敏感性显著增加，表明上述三种化疗药物与干扰能联用具有协同作用。
在相同剂量的峰值药物浓度及干扰能浓度下，三种化疗药物中丝裂霉素加用干扰能似有更强的肿瘤细胞杀伤力，提示对于人肺腺癌，丝裂霉素加用干扰能可能具有更好的疗效，有必要在临床上作进一步的验证。, http://www.100md.com