反相离子对HPLC法测定情安喘定片中微量盐酸克仑特罗
作者：杨珊瑛*
单位：厦门中药厂 361009
关键词：反相离子对；HPLC法；情安喘定片；盐酸克仑特罗。
中草药990915 摘 要 用反相离子对HPLC法测定情安喘定片中微量盐酸克仑特罗的分析条件和测定方法。试验证明：本方法线性范围在4～26 μg之间，r=0.9998,平均回收率为92.78%，精密度RSD(n=5)为0.80%。
情安喘定片系治疗喘症中热痰阻肺证的国家基本药物，具有平喘、镇咳、祛痰作用，现有标准未收载含量测定方法，方中盐酸克仑特罗(clenbuterol hydrochloride)是一种拟肾上腺能药[1，2]。国内文献报道的测定方法有比色法、薄层扫描法、滴定法；而HPLC法测定中成药中微量盐酸克仑特罗的方法未见报道。笔者利用离子对缓冲液[3，4]，建立一种专属性好、灵敏度高、结果准确可靠的测定制剂中微量盐酸克仑特罗的方法。
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1 仪器与试药
高效液相色谱仪(美国SP8800)，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯，盐酸克仑特罗对照品(上海申隆制药厂)，情安喘定片为我厂产品。
2 实验方法
2.1 色谱条件：色谱柱为YWG C18(10μm)柱250mm×4.6mm(中国科学院大连化学物理研究所)，流动相：乙腈-离子对缓冲液(含0.025mol/L SDS+0.02mol/L冰醋酸，1mol/L氢氧化钠调pH=3.5)为45∶55，检测波长为245 nm，柱温为室温，流速为1.0mL/min。
2.2 线性关系：精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸克仑特罗对照品适量，置50 mL量瓶中，加适量1%盐酸使溶解，并加1%盐酸至刻度，配制成200 μg/mL的溶液作为盐酸克仑特罗的标准溶液。精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL置10 mL量瓶中，加1%盐酸稀释至刻度，摇匀。将上述溶液10 μL注入色谱系统中，照上述色谱条件分析。结果盐酸克仑特罗峰面积积分值Y与浓度X(μg/mL)呈良好的线性关系，回归方程为：Y=7631.67-1349.20X,r=0.9998,线性范围为4～26μg/mL。
, 百拇医药
2.3 精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样5次，测得盐酸克仑特罗峰面积积分值，RSD(n=5)为0.80%。
2.4 样品测定：精密称取样品粉末5 g，置具塞锥形瓶中，加30 mL乙醇，超声处理1h，静置，过滤，残渣用少量乙醇洗涤并入滤纸中，用乙醇20 mL洗涤，水层用40%氢氧化钠溶液调节pH=9～10，用氯仿提取4次(25，15，15，15 mL)，氯仿提取液置水液上蒸干，放冷；残渣用少量1%盐酸溶解，移入5 mL量瓶中，用1%盐酸稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，滤液为供试品溶液。
分别吸取供试品溶液与对照品溶液10 μL进样分析，依盐酸克仑特罗色谱峰面积，按外标法计算其含量。结果见表1。
表1 样品测定 批号
盐酸克仑特
, 百拇医药 罗含量(μg/g)
批号
盐酸克仑特
罗含量(μg/g)
970501
8.0553
980802
8.1905
970601
7.7851
980804
7.8689
, 百拇医药 970602
8.2300
980806
10.1135
另取空白样品，同法制备空白溶液，按上述方法测定。供试品、盐酸克仑特罗对照品及空白样品色谱图见图1。从色谱图上可以看出空白液对盐酸克仑特罗的测定无干扰。
图1 样品色谱图
2.5 重现性试验：按样品测定法对同批样品测定5次，结果RSD=3.5%。
2.6 回收率试验：采用加样回收法。精密称取已知盐酸克仑特罗含量的样品粉末5 g，再精密添加一定量的盐酸克仑特罗对照品；同样品测定法处理，测定盐酸克仑特罗的含量。结果平均回收率为92.79%，RSD(n=5)为2.10%。
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3 讨论
盐酸克仑特罗作为一种成盐胺类药物，利用其分子中的特性部位，采用高效液相色谱中二次化学平衡原理，通过pH和离子对技术进行离子化控制，形成离子对化合物(RMH3+，RSO4-)，增加盐酸克仑特罗在固定相中保留值，从而达到色谱分离的最佳化。这就是本实验新建立的高效液相色谱分析系统-反相离子对色谱。它具有专属性好，选择性高，灵敏度好的优点，适用于制剂中微量盐酸克仑特罗的检测。
参考文献
1 Qureshi G A, et al. J Chromatogr,1988,441(1):197
2 Biondi P A, et al. J Chromatogr Sci,1991,29(5):190
3 Signoretti E C, et al. J Chromatogr,1989,473(1):301
4 Courtheyn D, et al. J Chromatogr,1991,564(2):537
收稿日期：1999-1-12, http://www.100md.com(杨珊瑛*)
单位：厦门中药厂 361009
关键词：反相离子对；HPLC法；情安喘定片；盐酸克仑特罗。
中草药990915 摘 要 用反相离子对HPLC法测定情安喘定片中微量盐酸克仑特罗的分析条件和测定方法。试验证明：本方法线性范围在4～26 μg之间，r=0.9998,平均回收率为92.78%，精密度RSD(n=5)为0.80%。
情安喘定片系治疗喘症中热痰阻肺证的国家基本药物，具有平喘、镇咳、祛痰作用，现有标准未收载含量测定方法，方中盐酸克仑特罗(clenbuterol hydrochloride)是一种拟肾上腺能药[1，2]。国内文献报道的测定方法有比色法、薄层扫描法、滴定法；而HPLC法测定中成药中微量盐酸克仑特罗的方法未见报道。笔者利用离子对缓冲液[3，4]，建立一种专属性好、灵敏度高、结果准确可靠的测定制剂中微量盐酸克仑特罗的方法。
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1 仪器与试药
高效液相色谱仪(美国SP8800)，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯，盐酸克仑特罗对照品(上海申隆制药厂)，情安喘定片为我厂产品。
2 实验方法
2.1 色谱条件：色谱柱为YWG C18(10μm)柱250mm×4.6mm(中国科学院大连化学物理研究所)，流动相：乙腈-离子对缓冲液(含0.025mol/L SDS+0.02mol/L冰醋酸，1mol/L氢氧化钠调pH=3.5)为45∶55，检测波长为245 nm，柱温为室温，流速为1.0mL/min。
2.2 线性关系：精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸克仑特罗对照品适量，置50 mL量瓶中，加适量1%盐酸使溶解，并加1%盐酸至刻度，配制成200 μg/mL的溶液作为盐酸克仑特罗的标准溶液。精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL置10 mL量瓶中，加1%盐酸稀释至刻度，摇匀。将上述溶液10 μL注入色谱系统中，照上述色谱条件分析。结果盐酸克仑特罗峰面积积分值Y与浓度X(μg/mL)呈良好的线性关系，回归方程为：Y=7631.67-1349.20X,r=0.9998,线性范围为4～26μg/mL。
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2.3 精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样5次，测得盐酸克仑特罗峰面积积分值，RSD(n=5)为0.80%。
2.4 样品测定：精密称取样品粉末5 g，置具塞锥形瓶中，加30 mL乙醇，超声处理1h，静置，过滤，残渣用少量乙醇洗涤并入滤纸中，用乙醇20 mL洗涤，水层用40%氢氧化钠溶液调节pH=9～10，用氯仿提取4次(25，15，15，15 mL)，氯仿提取液置水液上蒸干，放冷；残渣用少量1%盐酸溶解，移入5 mL量瓶中，用1%盐酸稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，滤液为供试品溶液。
分别吸取供试品溶液与对照品溶液10 μL进样分析，依盐酸克仑特罗色谱峰面积，按外标法计算其含量。结果见表1。
表1 样品测定 批号
盐酸克仑特
, 百拇医药 罗含量(μg/g)
批号
盐酸克仑特
罗含量(μg/g)
970501
8.0553
980802
8.1905
970601
7.7851
980804
7.8689
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8.2300
980806
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另取空白样品，同法制备空白溶液，按上述方法测定。供试品、盐酸克仑特罗对照品及空白样品色谱图见图1。从色谱图上可以看出空白液对盐酸克仑特罗的测定无干扰。
图1 样品色谱图
2.5 重现性试验：按样品测定法对同批样品测定5次，结果RSD=3.5%。
2.6 回收率试验：采用加样回收法。精密称取已知盐酸克仑特罗含量的样品粉末5 g，再精密添加一定量的盐酸克仑特罗对照品；同样品测定法处理，测定盐酸克仑特罗的含量。结果平均回收率为92.79%，RSD(n=5)为2.10%。
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3 讨论
盐酸克仑特罗作为一种成盐胺类药物，利用其分子中的特性部位，采用高效液相色谱中二次化学平衡原理，通过pH和离子对技术进行离子化控制，形成离子对化合物(RMH3+，RSO4-)，增加盐酸克仑特罗在固定相中保留值，从而达到色谱分离的最佳化。这就是本实验新建立的高效液相色谱分析系统-反相离子对色谱。它具有专属性好，选择性高，灵敏度好的优点，适用于制剂中微量盐酸克仑特罗的检测。
参考文献
1 Qureshi G A, et al. J Chromatogr,1988,441(1):197
2 Biondi P A, et al. J Chromatogr Sci,1991,29(5):190
3 Signoretti E C, et al. J Chromatogr,1989,473(1):301
4 Courtheyn D, et al. J Chromatogr,1991,564(2):537
收稿日期：1999-1-12, http://www.100md.com(杨珊瑛*)