大肠癌组织nm23/NDPK及p53表达的意义
作者：申兴斌 张旭晨 梅立新 赵晓明 胡建功
单位：申兴斌 赵晓明 胡建功 承德医学院 附属医院病理科 河北省承德市 067000；张旭晨 梅立新 承德医学院 病理教研室 河北省承德市 067000
关键词：结直肠肿瘤；p53基因；免疫组织化学
世界华人消化杂志990934 中国图书馆分类号 R 735.34
Subject headings colorectal neoplasms; nm23/ NDPK; p53 gene; immunohistochemistry
研究表明，nm23基因的表达与多种实验性肿瘤[1，2]及人类恶性肿瘤[3-5]的转移潜能密切负相关，提示它是一种能抑制肿瘤转移表型的转移抑制基因. p53在多种肿瘤中均有过度表达，并与肿瘤分化、转移和预后有关. 我们应用免疫组织化学方法检测了大肠癌中nm23/ NDPK和p53的表达情况，以分析其与大肠癌的病理特征和临床意义的关系.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 外科手术切除大肠癌标本48例，其中结肠癌21例，直肠癌27例，组织病理学分型为高分化腺癌21例，中分化腺癌18例，低分化腺癌9例. 组织经中性福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，分别作常规HE染色、nm23/ NDPK和p53免疫组织化学染色.
1.2 方法 鼠抗人nm23/ NDPK和鼠抗人p53 mAb均购自Santa cruze公司，通用型生物素化第2抗体为我实验室研制，第3抗体链霉亲合素过氧化物酶复合物购自Zymed公司. 染色主要步骤：切片常规脱蜡入水，30 mL/ L H2O2作用5min，非免疫血清阻断10min，依次加入第1抗体(nm23/ NDPK或p53，孵育50min)、第2抗体(孵育15min)、第3抗体(孵育15min)，期间用PBS缓冲液冲洗，最后于DAB/ H2O2液显色后，苏木素复染，逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片 染色时，均设立阴性对照(以PBS液替代第1抗体)和阳性对照.
, 百拇医药
判断标准：nm23/ NDPK阳性情况分为3级：阳性细胞数<5%为-，5%-2/ 3为+，>2/ 3为++. p53染色阳性细胞核数<10%为阴性(-)，≥10%为阳性(+).
2 结果
2.1 大肠癌nm23/ NDPK及p53的表达 48例大肠癌中，nm23/ NDPK表达阳性率为70.8%(34/ 48)，棕黄色阳性物质弥漫分布于细胞浆内，p53表达阳性率为54.2%(26/ 48)，棕黄色阳性物质呈颗粒状或团块状分布在细胞核内.
2.2 大肠癌nm23/ NDPK及p53表达与浸润程度 癌细胞浸润深度超过肌层时，其nm23/ NDPK阳性表达率明显低于未超过肌层时，p53阳性表达明显高于未超过肌层时(P<0.05，表1).
表1 大肠癌nm23/NDPK及p53表达与大肠癌浸润深度淋巴结转移及分化的关系
, http://www.100md.com
nm23/ NDPK表达
p53表达
-
+
++
阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
浸润深度
<肌层
1
7
, 百拇医药
5
92.3
9
4
30.8
≥肌层
13
16
6
62.9a
13
22
62.9a
, http://www.100md.com
淋巴结转移
有
13
14
4
58.0
10
21
67.7
无
1
3
13
94.1d
, http://www.100md.com
12
5
29.4c
分化程度
高
1
9
11
92.5
13
8
30.1
中
, http://www.100md.com
5
7
6
72.2f
7
11
61.1e
低
8
1
0
11.1f
2
, http://www.100md.com
7
77.8e
aP<0.05，bP<0.01；cP<0.05，dP<0.01；eP<0.05；fP<0.01.2.3 大肠癌nm23/ NDPK及p53表达与淋巴结转移 有淋巴结转移的大肠癌其nm23/ NDPK阳性表达率明显低于无淋巴结转移者(P<0.01)，p53阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P<0.05，表1).
2.4 大肠癌nm23/ NDPK及p53表达与大肠癌分化程度 高分化大肠癌者nm23/ NDPK阳性表达率明显高于低分化及中分化大肠癌(P<0.01)；高分化大肠癌p53阳性表达率明显低于低分化及中分化大肠癌(P<0.05). 统计学处理，nm23/ NDPK及p53阳性表达情况与患者的年龄、性别和病变部位无明显关系.
, 百拇医药
3 讨论
近年的研究发现，多种啮齿动物实验性肿瘤的转移能力与nm23基因的表达密切负相关[1，2]；在人类恶性肿瘤方面，nm23高表达的乳腺癌腋窝淋巴结转移率低，预后较好[3]；nm23低表达的恶性黑素瘤[4]或肝癌[5]较易发生术后复发或远处转移. 一系列的研究结果表明nm23基因是一种肿瘤转移抑制基因，关于nm23与大肠癌的关系，Cohn et al[6] 发现结直肠癌术后远处转移的发生与癌组织中nm23等位基因缺失相关；Yamaguchi et al[7]亦报道，大肠癌肝转移的发生与原发癌灶中nm23基因表达水平呈负相关. Wang et al[8]，发现50%有转移的结肠癌中可检出nm23基因的突变，而另一组无转移的结肠癌中，无1例检出，认为nm23基因改变可能在结肠癌转移中起重要作用. 而Royds et al[9]则发现，nm23表达与大肠癌的淋巴结转移无关. p53基因是人类肿瘤中最常见的产生突变的基因尤其频繁发生在大肠癌[10]. Bell et al[11]研究了100例大肠癌，显示p53表达越高则分化越差，p53与大肠癌复发率及死亡率呈正相关.
, 百拇医药
我们应用免疫组织化学方法对48例大肠癌的研究结果显示，nm23/ NDPK及p53基因在大肠癌中的阳性表达率分别为70.8%和54.2%，nm23/ NDPK表达水平与大肠癌浸润肠壁深度、淋巴结转移密切负相关，与大肠癌分化程度呈正相关；p53基因表达水平与大肠癌浸润肠壁深度、淋巴结转移呈正相关，与大肠癌分化程度呈负相关，nm23/ NDPK及p53基因表达水平与患者年龄、性别、病变部位无关. 以上结果提示，nm23基因在大肠癌的浸润和淋巴结转移过程中起负性调控作用，并与大肠癌的分化程度有关；p53基因阳性表达率预示大肠癌具有较差的病理生物学行为. 因此，检测nm23/ NDPK及p53基因的表达状况，不但有助于进一步了解大肠癌的生物学行为，并可作为判断患者预后的有价值的指标.
通讯作者 申兴斌
4 参考文献
1 Steeg PS, Bevilacqua G, Kopper L, Thorgeirsson UP, Talmadg JE, Liotta LA, Sobel ME. Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential. J Natl Cancer Inst, 1988;80:200-204
, 百拇医药
2 Leone A, Flatow U, King CR, Sandeen MA, Margulies IM, Liotta LA, Steeg PS. Reduced tumor incidence, metastatic potential, and cytokine responsiveness of nm23-transfected melanoma cells. Cell 1991;65:25-35
3 Chen TY, Yuan XP, Lu CHQ, Shi DR, Tan M, Lu HF. c-erbB-2. nm23和Bcl-2蛋白在乳腺癌中的意义及其相关性的探讨. Zhonghua Binglixue Zazhi, 1998;27:376-377
4 Flrenes VA, Aamdal S, Myklebost O, Maelandsmo GM, Bruland OS, Fodstad O. Levels of nm23 messenger RNA in metastatic malignant melanomas: inverse correlation to disease progression. Cancer Res, 1992;52:6088-6091
, 百拇医药
5 Nakayama T, Ohtsuru A, Nakao K, Shima M, Nakata K, Watanabe K, Ishii N, Kimura N, Nagataki S. Expression in human hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase, a homologue of the nm23. J Natl Cancer Inst, 1992;84:1349-1354
6 Cohn KH, Wang FS, Desoto Lapaix F, Solomon WB, Patterson LG, Alnold MR, Weimar J, Feldman JG, Levy AT, Leone A. Association of nm23-Hl allelic deletions with distant metastases in colorectal carcinoma. Lancet, 1991;338:722-724
, 百拇医药
7 Yamaguchi A, Urano T, Fushida S, Furukawa K, Nishimura G, Yonemura Y, Miyazaki I, Nakagawara G. Inverse association of nm23-Hl expression by colorectal cancer with liver metastasis. Br J Cancer, 1993;68:1020-1024
8 Wang L, Patel U , Ghosh L, Chen HC, Banerjee S. Mutation in the nm23 gene is associated with metastasis in colorectal cancer, Cancer Res, 1993;53:3652
9 Royds JA, Cross SS, Silcocks PB, Scholefield JH, Rees RC, Stephenson TJ. nm23'anti-metastatic' gene product expression in colorectal carcinoma. J Pathol, 1994;172:261-266
, 百拇医药
10 Levine AJ, Perry ME, Chang A, Silver A, Dittmer D, Wu M, Welsh D. The role of the p53 tumor-suppressor gene in tumorigenesis. Br J Cancer, 1994;69:409-416
11 Bell SM, Scott N, Cross D, Sagar P, Lewis FA, Blair GE, Taylor GR, Dixon MF, Quirke P. Prognostic value of p53 overexpression and c-Ki-ras gene mutations in colorectal cancer. Gastroenterology, 1993;104:57-64
收稿日期 1999-04-07 修回日期 1999-06-03, http://www.100md.com
单位：申兴斌 赵晓明 胡建功 承德医学院 附属医院病理科 河北省承德市 067000；张旭晨 梅立新 承德医学院 病理教研室 河北省承德市 067000
关键词：结直肠肿瘤；p53基因；免疫组织化学
世界华人消化杂志990934 中国图书馆分类号 R 735.34
Subject headings colorectal neoplasms; nm23/ NDPK; p53 gene; immunohistochemistry
研究表明，nm23基因的表达与多种实验性肿瘤[1，2]及人类恶性肿瘤[3-5]的转移潜能密切负相关，提示它是一种能抑制肿瘤转移表型的转移抑制基因. p53在多种肿瘤中均有过度表达，并与肿瘤分化、转移和预后有关. 我们应用免疫组织化学方法检测了大肠癌中nm23/ NDPK和p53的表达情况，以分析其与大肠癌的病理特征和临床意义的关系.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 外科手术切除大肠癌标本48例，其中结肠癌21例，直肠癌27例，组织病理学分型为高分化腺癌21例，中分化腺癌18例，低分化腺癌9例. 组织经中性福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，分别作常规HE染色、nm23/ NDPK和p53免疫组织化学染色.
1.2 方法 鼠抗人nm23/ NDPK和鼠抗人p53 mAb均购自Santa cruze公司，通用型生物素化第2抗体为我实验室研制，第3抗体链霉亲合素过氧化物酶复合物购自Zymed公司. 染色主要步骤：切片常规脱蜡入水，30 mL/ L H2O2作用5min，非免疫血清阻断10min，依次加入第1抗体(nm23/ NDPK或p53，孵育50min)、第2抗体(孵育15min)、第3抗体(孵育15min)，期间用PBS缓冲液冲洗，最后于DAB/ H2O2液显色后，苏木素复染，逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片 染色时，均设立阴性对照(以PBS液替代第1抗体)和阳性对照.
, 百拇医药
判断标准：nm23/ NDPK阳性情况分为3级：阳性细胞数<5%为-，5%-2/ 3为+，>2/ 3为++. p53染色阳性细胞核数<10%为阴性(-)，≥10%为阳性(+).
2 结果
2.1 大肠癌nm23/ NDPK及p53的表达 48例大肠癌中，nm23/ NDPK表达阳性率为70.8%(34/ 48)，棕黄色阳性物质弥漫分布于细胞浆内，p53表达阳性率为54.2%(26/ 48)，棕黄色阳性物质呈颗粒状或团块状分布在细胞核内.
2.2 大肠癌nm23/ NDPK及p53表达与浸润程度 癌细胞浸润深度超过肌层时，其nm23/ NDPK阳性表达率明显低于未超过肌层时，p53阳性表达明显高于未超过肌层时(P<0.05，表1).
表1 大肠癌nm23/NDPK及p53表达与大肠癌浸润深度淋巴结转移及分化的关系
, http://www.100md.com
nm23/ NDPK表达
p53表达
-
+
++
阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
浸润深度
<肌层
1
7
, 百拇医药
5
92.3
9
4
30.8
≥肌层
13
16
6
62.9a
13
22
62.9a
, http://www.100md.com
淋巴结转移
有
13
14
4
58.0
10
21
67.7
无
1
3
13
94.1d
, http://www.100md.com
12
5
29.4c
分化程度
高
1
9
11
92.5
13
8
30.1
中
, http://www.100md.com
5
7
6
72.2f
7
11
61.1e
低
8
1
0
11.1f
2
, http://www.100md.com
7
77.8e
aP<0.05，bP<0.01；cP<0.05，dP<0.01；eP<0.05；fP<0.01.2.3 大肠癌nm23/ NDPK及p53表达与淋巴结转移 有淋巴结转移的大肠癌其nm23/ NDPK阳性表达率明显低于无淋巴结转移者(P<0.01)，p53阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P<0.05，表1).
2.4 大肠癌nm23/ NDPK及p53表达与大肠癌分化程度 高分化大肠癌者nm23/ NDPK阳性表达率明显高于低分化及中分化大肠癌(P<0.01)；高分化大肠癌p53阳性表达率明显低于低分化及中分化大肠癌(P<0.05). 统计学处理，nm23/ NDPK及p53阳性表达情况与患者的年龄、性别和病变部位无明显关系.
, 百拇医药
3 讨论
近年的研究发现，多种啮齿动物实验性肿瘤的转移能力与nm23基因的表达密切负相关[1，2]；在人类恶性肿瘤方面，nm23高表达的乳腺癌腋窝淋巴结转移率低，预后较好[3]；nm23低表达的恶性黑素瘤[4]或肝癌[5]较易发生术后复发或远处转移. 一系列的研究结果表明nm23基因是一种肿瘤转移抑制基因，关于nm23与大肠癌的关系，Cohn et al[6] 发现结直肠癌术后远处转移的发生与癌组织中nm23等位基因缺失相关；Yamaguchi et al[7]亦报道，大肠癌肝转移的发生与原发癌灶中nm23基因表达水平呈负相关. Wang et al[8]，发现50%有转移的结肠癌中可检出nm23基因的突变，而另一组无转移的结肠癌中，无1例检出，认为nm23基因改变可能在结肠癌转移中起重要作用. 而Royds et al[9]则发现，nm23表达与大肠癌的淋巴结转移无关. p53基因是人类肿瘤中最常见的产生突变的基因尤其频繁发生在大肠癌[10]. Bell et al[11]研究了100例大肠癌，显示p53表达越高则分化越差，p53与大肠癌复发率及死亡率呈正相关.
, 百拇医药
我们应用免疫组织化学方法对48例大肠癌的研究结果显示，nm23/ NDPK及p53基因在大肠癌中的阳性表达率分别为70.8%和54.2%，nm23/ NDPK表达水平与大肠癌浸润肠壁深度、淋巴结转移密切负相关，与大肠癌分化程度呈正相关；p53基因表达水平与大肠癌浸润肠壁深度、淋巴结转移呈正相关，与大肠癌分化程度呈负相关，nm23/ NDPK及p53基因表达水平与患者年龄、性别、病变部位无关. 以上结果提示，nm23基因在大肠癌的浸润和淋巴结转移过程中起负性调控作用，并与大肠癌的分化程度有关；p53基因阳性表达率预示大肠癌具有较差的病理生物学行为. 因此，检测nm23/ NDPK及p53基因的表达状况，不但有助于进一步了解大肠癌的生物学行为，并可作为判断患者预后的有价值的指标.
通讯作者 申兴斌
4 参考文献
1 Steeg PS, Bevilacqua G, Kopper L, Thorgeirsson UP, Talmadg JE, Liotta LA, Sobel ME. Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential. J Natl Cancer Inst, 1988;80:200-204
, 百拇医药
2 Leone A, Flatow U, King CR, Sandeen MA, Margulies IM, Liotta LA, Steeg PS. Reduced tumor incidence, metastatic potential, and cytokine responsiveness of nm23-transfected melanoma cells. Cell 1991;65:25-35
3 Chen TY, Yuan XP, Lu CHQ, Shi DR, Tan M, Lu HF. c-erbB-2. nm23和Bcl-2蛋白在乳腺癌中的意义及其相关性的探讨. Zhonghua Binglixue Zazhi, 1998;27:376-377
4 Flrenes VA, Aamdal S, Myklebost O, Maelandsmo GM, Bruland OS, Fodstad O. Levels of nm23 messenger RNA in metastatic malignant melanomas: inverse correlation to disease progression. Cancer Res, 1992;52:6088-6091
, 百拇医药
5 Nakayama T, Ohtsuru A, Nakao K, Shima M, Nakata K, Watanabe K, Ishii N, Kimura N, Nagataki S. Expression in human hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase, a homologue of the nm23. J Natl Cancer Inst, 1992;84:1349-1354
6 Cohn KH, Wang FS, Desoto Lapaix F, Solomon WB, Patterson LG, Alnold MR, Weimar J, Feldman JG, Levy AT, Leone A. Association of nm23-Hl allelic deletions with distant metastases in colorectal carcinoma. Lancet, 1991;338:722-724
, 百拇医药
7 Yamaguchi A, Urano T, Fushida S, Furukawa K, Nishimura G, Yonemura Y, Miyazaki I, Nakagawara G. Inverse association of nm23-Hl expression by colorectal cancer with liver metastasis. Br J Cancer, 1993;68:1020-1024
8 Wang L, Patel U , Ghosh L, Chen HC, Banerjee S. Mutation in the nm23 gene is associated with metastasis in colorectal cancer, Cancer Res, 1993;53:3652
9 Royds JA, Cross SS, Silcocks PB, Scholefield JH, Rees RC, Stephenson TJ. nm23'anti-metastatic' gene product expression in colorectal carcinoma. J Pathol, 1994;172:261-266
, 百拇医药
10 Levine AJ, Perry ME, Chang A, Silver A, Dittmer D, Wu M, Welsh D. The role of the p53 tumor-suppressor gene in tumorigenesis. Br J Cancer, 1994;69:409-416
11 Bell SM, Scott N, Cross D, Sagar P, Lewis FA, Blair GE, Taylor GR, Dixon MF, Quirke P. Prognostic value of p53 overexpression and c-Ki-ras gene mutations in colorectal cancer. Gastroenterology, 1993;104:57-64
收稿日期 1999-04-07 修回日期 1999-06-03, http://www.100md.com