胃癌组织若干癌相关基因的表达与淋巴转移的关系
作者：王 耕 杨道华 孙 勤 代全武 惠 震 陈立新 易建华 朱礼国
单位：王耕 孙勤 代全武 惠震 陈立新 郧阳医学院附属太和医院 普外科 湖北省十堰市 442000；杨道华 易建华 朱礼国 郧阳医学院附属太和医院 病理科 湖北省十堰市 442000
关键词：胃肿瘤；基因，肿瘤；基因表达；淋巴转移；免疫组织化学
世界华人消化杂志990929 国图书馆分类号 R 735.2
Subject headings stomach neoplasms; gene, neoplasm; gene expression; lymphatic metastasis; immunohistochemistry
淋巴转移(LNM)是胃癌治疗失败的主要原因之一. 手术中外科医师对LNM的判断仅靠临床经验，使胃癌的根治性切除具有一定的盲目性和不确定性. 因此，如何在术前正确预测胃癌淋巴转移的范围，制定合理手术方式及切除范围，已成为胃癌研究的重要课题之一. 我们对41例胃癌手术标本进行CD44v6，nm23/ NDPK,P53蛋白，ras/ P21及PCNA的联合检测，探讨其与胃癌淋巴转移间的关系，寻求术前预测胃癌淋巴转移的方法，进一步指导临床实践.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 胃癌手术标本41例选自郧阳医学院附属太和医院外科1994/ 1996年的手术患者. 男31例，女10例，年龄30岁～70岁，平均50岁±12岁. 病理类型：乳头状腺癌3例，管状腺癌23例，粘液腺癌6例，粘液细胞癌9例；其中高分化者6例，中分化者12例，低分化者23例. 根据1989年国际UICC的TNM分期标准，Ⅰ、Ⅱ期13例，Ⅲ、Ⅳ期28例.
1.2 方法 标本经10 mL/ L福尔马林固定、石蜡包埋，行层厚为4 μm的连续切片后，采用S-P法免疫组织化学染色，按试剂盒说明书提供方法操作. 抗原修复采用微波修复法. PBS缓冲液代替第一抗体做阴性对照. 所有试剂均购自福州迈新公司. 参照文献[1-3]，染色阳性细胞均呈棕黄色颗粒，连续观察6个～8个高倍镜视野 . CD44v6主要集中在细胞膜上，阳性率大于20%定为CD44v6染色阳性. nm23产物NDPK定位在胞质，阳性率>20%定为nm23/ NDPK染色阳性. P53蛋白定位于细胞核，阳性率>10%为P53阳性染色. ras产物P21主要定位在胞质，部分可见于胞核，阳性率>10%为ras/ P21染色阳性. PCNA定位于细胞核，阳性率>10%为PCNA染色阳性.
, 百拇医药
统计学处理 率的比较及相关性分析采用χ2检验，检测水准0.05.
2 结果
所选5种指标(CD44v6、nm23/ NDPK、P53、ras/ P21及PCNA)预测胃癌淋巴转移情况时，单指标的灵敏性均较低，特异性均较差(表1～3). 但其中任三种指标联合出现时，对预测胃癌LNM的灵敏性及特异性可分别达97%和70%.
表1 31例胃癌、LNM灶及癌旁组织中CD44v6，nm23/NDPK，P53蛋白、ras/P21及PCNA的表达 (%) 项目
CD44v6
nm23/ NDPK
P53蛋白
, http://www.100md.com
ras/ P21
PCNA
癌
64b
29b
80b
64b
80b
癌旁
3
64
0
, http://www.100md.com
16
19
LNM
54b
16b
67b
61b
61b
bP<0.01.表2 癌组织CD44v6，nm23/NDPK，P53、ras/P21及PCNA的表达与临床病理学的关系 (%) 项目
n
, http://www.100md.com
CD44v6
nm23/ NDPK
P53蛋白
ras/ P21
PCNA
LNM+
31b
65b
29b
80b
70b
, 百拇医药 80b
LNM-
10
20
70
40
30
30
有浆膜累及
29b
66b
33b
, 百拇医药 82b
65
68
无浆膜累及
12
25
41
42
50
67
Ⅰ，Ⅱ期
13
62
, http://www.100md.com
46
69
61
62
Ⅲ，Ⅳ期
28
50
36
71
61
71
bP<0.01表3 相关指标预测胃癌淋巴转移的灵敏性与特异性
项目
, 百拇医药
LNM+(n=31)
LNM-(n=10)
灵敏性(%)
特异性(%)
CD44v6+
20
2
65
80
nm23/ NDPK-
22
3
71
, 百拇医药
70
P53蛋白+
25
4
81
60
ras/ P21+
22
3
71
70
PCNA+
25
, 百拇医药
3
81
70
任二者
30
8
97
20
任三者
30
3
97
70
任四者
, http://www.100md.com
18
2
58
80
全部同时
1
0
10
100
3 讨论
大量研究表明，CD44不仅在淋巴细胞功能及细胞间质的相互作用中，而且在肿瘤生长与转移过程中起重要作用[4]. 这可能与作为透明质酸受体的CD44分子作用于细胞外基质，调节了肿瘤细胞的运动与形态有关. CD44v6是含外显子6的变异体. 本研究显示，CD44v6在胃癌组织及LNM中的表达均高于癌旁组织(P<0.01)，且有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者(P<0.05). 提示CD44v6与胃癌的淋巴转移密切相关. nm23低表达与多种恶性肿瘤的侵袭与转移密切相关[5]. 本研究发现，与癌旁组织相比nm23在癌与转移淋巴结中均呈低表达(P<0.01)；淋巴转移组的nm23表达明显低于无淋巴转移组(P<0.05). 表明胃癌组织nm23/ NDPK的积聚与淋巴转移呈负相关.
, http://www.100md.com
本研究还发现，胃癌组织及淋巴转移灶P53蛋白的积聚分别高达81%(25/ 31)和67.74%(21/ 31)，明显高于癌旁组织(P<0.05)，淋巴转移组明显高于无淋巴转移组(P<0.05)，伴浆膜累及者也明显高于无浆膜累及者(P<0.01). 此结果与已有理论基本一致. 说明p53基因的高表达与胃癌侵袭及淋巴转移关系密切. P21位于细胞膜内侧，具有GTP酶活性，能将GTP迅速水解成GDP. 突变后的P21不能迅速水解GTP，但可使靶细胞持续增殖. 对细胞转染试验和肿瘤转移模型的研究发现，ras基因的激活在癌细胞转移潜能中起主要作用. Kim et al[6]的资料表明P21的表达与胃癌淋巴转移或远处转移呈正相关. 本研究的结论与Kim的结论相似. Yonemira et al[7]发现PCNA指数与胃癌癌肿大小呈正相关，在有浆膜累及及淋巴转移的患者中表达率明显增高. Meda et al[8]认为PCNA指数与肿瘤分期、淋巴转移和远处转移有关. 本研究也发现其在胃癌组织及淋巴转移灶中呈高表达，淋巴转移组P21积聚明显高于无淋巴转移组(P<0.05). 说明PCNA可能也是与胃癌淋巴转移有关的指标之一. 但本研究未发现CD44v6，nm23/ NDPK，p53，ras/ P21及PCNA的表达与胃癌分期间的关系. 用于淋巴转移预测的灵敏性与特异性均不尽人意(表3)，但任意3种指标检测结果同时出现对淋巴转移预测的灵敏性达97%，特异性为70%. 具有较高的应用价值. 说明该5种指标的联合检测对胃癌淋巴转移的预测具有重要的意义.
, http://www.100md.com
致谢 本文受北京医科大学临床肿瘤学院胸外科陈克能博士的修改，在此表示感谢.通讯作者 王耕
4 参考文献
1 Toshiki H, Tatsuo F, Hironobu N. Expression of CD44 variant exon 6 in stage non-small cell lung carcinoma as a prognostic factor. Cancer Res, 1998;58:1108
2 李学莉，邹建湘，陈玉龙. 在原发性胃癌中的联合表达研究. 中国肿瘤临床，1997；24：6 54
3 龚志军，朱慰祺，施达仁. 增殖性细胞核抗原在胃癌临床中的意义. 肿瘤，1998；18：45
4 Tarin D, Mastsumura Y. Recent advance in the study of tumor invasion and metastasis. J Clin Pathol, 1994;47:385
, http://www.100md.com
5 Lizula N, Oka M, Noma T. Nm23-H1 and H2 messenger RNA abndance in human hepatocellular. Cancer Res， 1995;55:651
6 Kim YJ, Chu HD, Kim DY. Expression of cellular oncogenes in human gastric carcinoma: c-myc, c-erbB2 and c-ras. J Surg Oncl, 1993;54:167
7 Yonemira Y, Kimura H, Fushida S. Analysis of proliferative activety using antiproliferating cell nuclear antibody in gastric cancer tissue specimens obtained by endoscopic biopsy. Cancer, 1993;71:2448
8 Meda K, Chung YS, Onoda N. Proliferating cell nuclear antigen labelling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis. Cancer, 1994；73：528
收稿日期 1999-04-08 修回日期 1999-06-23, http://www.100md.com
单位：王耕 孙勤 代全武 惠震 陈立新 郧阳医学院附属太和医院 普外科 湖北省十堰市 442000；杨道华 易建华 朱礼国 郧阳医学院附属太和医院 病理科 湖北省十堰市 442000
关键词：胃肿瘤；基因，肿瘤；基因表达；淋巴转移；免疫组织化学
世界华人消化杂志990929 国图书馆分类号 R 735.2
Subject headings stomach neoplasms; gene, neoplasm; gene expression; lymphatic metastasis; immunohistochemistry
淋巴转移(LNM)是胃癌治疗失败的主要原因之一. 手术中外科医师对LNM的判断仅靠临床经验，使胃癌的根治性切除具有一定的盲目性和不确定性. 因此，如何在术前正确预测胃癌淋巴转移的范围，制定合理手术方式及切除范围，已成为胃癌研究的重要课题之一. 我们对41例胃癌手术标本进行CD44v6，nm23/ NDPK,P53蛋白，ras/ P21及PCNA的联合检测，探讨其与胃癌淋巴转移间的关系，寻求术前预测胃癌淋巴转移的方法，进一步指导临床实践.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 胃癌手术标本41例选自郧阳医学院附属太和医院外科1994/ 1996年的手术患者. 男31例，女10例，年龄30岁～70岁，平均50岁±12岁. 病理类型：乳头状腺癌3例，管状腺癌23例，粘液腺癌6例，粘液细胞癌9例；其中高分化者6例，中分化者12例，低分化者23例. 根据1989年国际UICC的TNM分期标准，Ⅰ、Ⅱ期13例，Ⅲ、Ⅳ期28例.
1.2 方法 标本经10 mL/ L福尔马林固定、石蜡包埋，行层厚为4 μm的连续切片后，采用S-P法免疫组织化学染色，按试剂盒说明书提供方法操作. 抗原修复采用微波修复法. PBS缓冲液代替第一抗体做阴性对照. 所有试剂均购自福州迈新公司. 参照文献[1-3]，染色阳性细胞均呈棕黄色颗粒，连续观察6个～8个高倍镜视野 . CD44v6主要集中在细胞膜上，阳性率大于20%定为CD44v6染色阳性. nm23产物NDPK定位在胞质，阳性率>20%定为nm23/ NDPK染色阳性. P53蛋白定位于细胞核，阳性率>10%为P53阳性染色. ras产物P21主要定位在胞质，部分可见于胞核，阳性率>10%为ras/ P21染色阳性. PCNA定位于细胞核，阳性率>10%为PCNA染色阳性.
, 百拇医药
统计学处理 率的比较及相关性分析采用χ2检验，检测水准0.05.
2 结果
所选5种指标(CD44v6、nm23/ NDPK、P53、ras/ P21及PCNA)预测胃癌淋巴转移情况时，单指标的灵敏性均较低，特异性均较差(表1～3). 但其中任三种指标联合出现时，对预测胃癌LNM的灵敏性及特异性可分别达97%和70%.
表1 31例胃癌、LNM灶及癌旁组织中CD44v6，nm23/NDPK，P53蛋白、ras/P21及PCNA的表达 (%) 项目
CD44v6
nm23/ NDPK
P53蛋白
, http://www.100md.com
ras/ P21
PCNA
癌
64b
29b
80b
64b
80b
癌旁
3
64
0
, http://www.100md.com
16
19
LNM
54b
16b
67b
61b
61b
bP<0.01.表2 癌组织CD44v6，nm23/NDPK，P53、ras/P21及PCNA的表达与临床病理学的关系 (%) 项目
n
, http://www.100md.com
CD44v6
nm23/ NDPK
P53蛋白
ras/ P21
PCNA
LNM+
31b
65b
29b
80b
70b
, 百拇医药 80b
LNM-
10
20
70
40
30
30
有浆膜累及
29b
66b
33b
, 百拇医药 82b
65
68
无浆膜累及
12
25
41
42
50
67
Ⅰ，Ⅱ期
13
62
, http://www.100md.com
46
69
61
62
Ⅲ，Ⅳ期
28
50
36
71
61
71
bP<0.01表3 相关指标预测胃癌淋巴转移的灵敏性与特异性
项目
, 百拇医药
LNM+(n=31)
LNM-(n=10)
灵敏性(%)
特异性(%)
CD44v6+
20
2
65
80
nm23/ NDPK-
22
3
71
, 百拇医药
70
P53蛋白+
25
4
81
60
ras/ P21+
22
3
71
70
PCNA+
25
, 百拇医药
3
81
70
任二者
30
8
97
20
任三者
30
3
97
70
任四者
, http://www.100md.com
18
2
58
80
全部同时
1
0
10
100
3 讨论
大量研究表明，CD44不仅在淋巴细胞功能及细胞间质的相互作用中，而且在肿瘤生长与转移过程中起重要作用[4]. 这可能与作为透明质酸受体的CD44分子作用于细胞外基质，调节了肿瘤细胞的运动与形态有关. CD44v6是含外显子6的变异体. 本研究显示，CD44v6在胃癌组织及LNM中的表达均高于癌旁组织(P<0.01)，且有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者(P<0.05). 提示CD44v6与胃癌的淋巴转移密切相关. nm23低表达与多种恶性肿瘤的侵袭与转移密切相关[5]. 本研究发现，与癌旁组织相比nm23在癌与转移淋巴结中均呈低表达(P<0.01)；淋巴转移组的nm23表达明显低于无淋巴转移组(P<0.05). 表明胃癌组织nm23/ NDPK的积聚与淋巴转移呈负相关.
, http://www.100md.com
本研究还发现，胃癌组织及淋巴转移灶P53蛋白的积聚分别高达81%(25/ 31)和67.74%(21/ 31)，明显高于癌旁组织(P<0.05)，淋巴转移组明显高于无淋巴转移组(P<0.05)，伴浆膜累及者也明显高于无浆膜累及者(P<0.01). 此结果与已有理论基本一致. 说明p53基因的高表达与胃癌侵袭及淋巴转移关系密切. P21位于细胞膜内侧，具有GTP酶活性，能将GTP迅速水解成GDP. 突变后的P21不能迅速水解GTP，但可使靶细胞持续增殖. 对细胞转染试验和肿瘤转移模型的研究发现，ras基因的激活在癌细胞转移潜能中起主要作用. Kim et al[6]的资料表明P21的表达与胃癌淋巴转移或远处转移呈正相关. 本研究的结论与Kim的结论相似. Yonemira et al[7]发现PCNA指数与胃癌癌肿大小呈正相关，在有浆膜累及及淋巴转移的患者中表达率明显增高. Meda et al[8]认为PCNA指数与肿瘤分期、淋巴转移和远处转移有关. 本研究也发现其在胃癌组织及淋巴转移灶中呈高表达，淋巴转移组P21积聚明显高于无淋巴转移组(P<0.05). 说明PCNA可能也是与胃癌淋巴转移有关的指标之一. 但本研究未发现CD44v6，nm23/ NDPK，p53，ras/ P21及PCNA的表达与胃癌分期间的关系. 用于淋巴转移预测的灵敏性与特异性均不尽人意(表3)，但任意3种指标检测结果同时出现对淋巴转移预测的灵敏性达97%，特异性为70%. 具有较高的应用价值. 说明该5种指标的联合检测对胃癌淋巴转移的预测具有重要的意义.
, http://www.100md.com
致谢 本文受北京医科大学临床肿瘤学院胸外科陈克能博士的修改，在此表示感谢.通讯作者 王耕
4 参考文献
1 Toshiki H, Tatsuo F, Hironobu N. Expression of CD44 variant exon 6 in stage non-small cell lung carcinoma as a prognostic factor. Cancer Res, 1998;58:1108
2 李学莉，邹建湘，陈玉龙. 在原发性胃癌中的联合表达研究. 中国肿瘤临床，1997；24：6 54
3 龚志军，朱慰祺，施达仁. 增殖性细胞核抗原在胃癌临床中的意义. 肿瘤，1998；18：45
4 Tarin D, Mastsumura Y. Recent advance in the study of tumor invasion and metastasis. J Clin Pathol, 1994;47:385
, http://www.100md.com
5 Lizula N, Oka M, Noma T. Nm23-H1 and H2 messenger RNA abndance in human hepatocellular. Cancer Res， 1995;55:651
6 Kim YJ, Chu HD, Kim DY. Expression of cellular oncogenes in human gastric carcinoma: c-myc, c-erbB2 and c-ras. J Surg Oncl, 1993;54:167
7 Yonemira Y, Kimura H, Fushida S. Analysis of proliferative activety using antiproliferating cell nuclear antibody in gastric cancer tissue specimens obtained by endoscopic biopsy. Cancer, 1993;71:2448
8 Meda K, Chung YS, Onoda N. Proliferating cell nuclear antigen labelling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis. Cancer, 1994；73：528
收稿日期 1999-04-08 修回日期 1999-06-23, http://www.100md.com