Cx32在胃癌中的表达
作者：刘 洋 张熙纯 沈守荣 邹益友 彭重恩
单位：湖南医科大学附属湘雅医院消化内科 湖南省长沙市 410008
关键词：胃肿瘤；Cx32基因；基因表达
世界华人消化杂志990925 中国图书馆分类号 R 735.2
Subject headings headings; stomach neoplasms; Cx32 gene; gene expression
连接蛋白基因(Connexin gene)是一个多基因家族，目前研究较多的有Cx32, Cx43, Cx37等. 我们采用RT-PCR及Southern杂交技术研究Cx32基因在胃癌中的表达.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 30例未经过放疗或化疗确诊为胃癌的手术标本及配对癌旁组织，正常组织，冻存于液氮中，其中24例为低分化腺癌，4例印戒细胞癌，2例高分化腺癌. Cx32基因PCR引物及内对照GAPDH引物由中科院上海细胞生物学研究所合成. Cx32，PCR引物：正义链：5＇-AACTGGACAGGTCTATACAC-3＇，反义链：5＇-TTGCGGGAGGGCGGATTGGA-3＇.
1.2 方法 质粒的抽提、酶切及总RNA抽提按要求进行. Cx32基因表达用RT-PCR检测，先用无RNase的DNaseⅠ处理所提取RNA样品，以去除其中痕量DNA，然后根据Promega公司RT试剂盒说明，先将mRNA转录成cDNA，再取cDNA进行PCR反应，然后用Southern杂交检测RT-PCR. 将RT-PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳分离，经碱变性、中和、纸巾法轻至尼龙膜上后紫外线交联固定，以α-32P-dCTP为标记物，用随机引物标记法标记探针. 同一张膜先后与Cx32探针及GAPDH探针杂交. 洗膜，-70℃曝光，放射自显影.
, http://www.100md.com
2 结果
30例配对组织中，27例(27/ 30)胃正常组织扩增出了一条699 bp的强目的带，20例(20/ 30)癌旁组织扩增出了一条699 bp的弱目的带，而所有癌组织及MGC-803细胞株均未见扩增带. RT-PCR产物进行Southern杂交后，见正常胃上皮细胞有强杂交信号，癌旁组织中有弱杂交信号.
3 讨论
Cx基因在各种组织中的表达既有交叉性，又有组织特异性. 据文献报导[1]，哺乳动物胃正常上皮细胞表达Cx26,Cx32,Cx37,Cx43. Uchida et al[2]观察到人胃组织的冰冻切片中，正常胃粘膜细胞有很多荧光点，而胃溃疡的粘膜细胞荧光点减少，胃癌组织标本中，根本没有荧光点出现. 表明人胃上皮细胞表达Cx32蛋白，胃癌细胞不表达. 我们采用RT-PCR及Southern杂交分析，发现人胃上皮细胞有Cx32 mRNA高水平表达，而胃癌细胞中无Cx32转录活性. 这一结果与文献报导的Cx32蛋白质表达水平相符，表明Cx32可能是正常人胃上皮细胞间隙连接的主要成分，是人胃上皮细胞的特异表达的Cx基因，其表达对人胃上皮细胞的通道功能具有重要作用，它的表达缺失是致胃癌GJIC障碍的主要原因.
, http://www.100md.com
Cx基因是一类新近发现的与细胞增殖、分化和发育密切相关的基因. 研究Cx基因在胃粘膜上皮不同分化窗口的表达规律，这对于阐明Cx基因对细胞分化和增殖的作用，了解Cx基因表达与细胞分化的关系是一个极好的研究模型. 我们的本研究表明，Cx32 mRNA在胃正常组织、边缘组织、癌组织中的表达呈一个逐渐由高水平到低水平表达直至无表达的梯度分布，这表明Cx32的表达与胃粘膜上皮细胞分化程度相关. 此外，胃癌组织和MGC-803细胞株Cx32表达丧失，也表明了体内体外癌细胞的恶性生物学特征是相似的.
注：本课题为国家自然科学基金资助项目，No.39670344.
通讯作者 刘洋
4 参考文献
1 Willecke K, Hennemann H, Enuresis N, Dahl E. The diversity of connexin genes encoding gap junctional proteins. Eur J Cell Biol, 1991;56:1-7
2 Uchida Y, Matsuda K, Sasahara K, Kauabata H, Nishioka M. Immunohistochemistry of gap junctions in normal and diseased gastric mucosa of humans. Gastroenterology, 1995;109:1492-1496
收稿日期 1998-11-26 修回日期 1999-04-12, http://www.100md.com
单位：湖南医科大学附属湘雅医院消化内科 湖南省长沙市 410008
关键词：胃肿瘤；Cx32基因；基因表达
世界华人消化杂志990925 中国图书馆分类号 R 735.2
Subject headings headings; stomach neoplasms; Cx32 gene; gene expression
连接蛋白基因(Connexin gene)是一个多基因家族，目前研究较多的有Cx32, Cx43, Cx37等. 我们采用RT-PCR及Southern杂交技术研究Cx32基因在胃癌中的表达.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 30例未经过放疗或化疗确诊为胃癌的手术标本及配对癌旁组织，正常组织，冻存于液氮中，其中24例为低分化腺癌，4例印戒细胞癌，2例高分化腺癌. Cx32基因PCR引物及内对照GAPDH引物由中科院上海细胞生物学研究所合成. Cx32，PCR引物：正义链：5＇-AACTGGACAGGTCTATACAC-3＇，反义链：5＇-TTGCGGGAGGGCGGATTGGA-3＇.
1.2 方法 质粒的抽提、酶切及总RNA抽提按要求进行. Cx32基因表达用RT-PCR检测，先用无RNase的DNaseⅠ处理所提取RNA样品，以去除其中痕量DNA，然后根据Promega公司RT试剂盒说明，先将mRNA转录成cDNA，再取cDNA进行PCR反应，然后用Southern杂交检测RT-PCR. 将RT-PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳分离，经碱变性、中和、纸巾法轻至尼龙膜上后紫外线交联固定，以α-32P-dCTP为标记物，用随机引物标记法标记探针. 同一张膜先后与Cx32探针及GAPDH探针杂交. 洗膜，-70℃曝光，放射自显影.
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2 结果
30例配对组织中，27例(27/ 30)胃正常组织扩增出了一条699 bp的强目的带，20例(20/ 30)癌旁组织扩增出了一条699 bp的弱目的带，而所有癌组织及MGC-803细胞株均未见扩增带. RT-PCR产物进行Southern杂交后，见正常胃上皮细胞有强杂交信号，癌旁组织中有弱杂交信号.
3 讨论
Cx基因在各种组织中的表达既有交叉性，又有组织特异性. 据文献报导[1]，哺乳动物胃正常上皮细胞表达Cx26,Cx32,Cx37,Cx43. Uchida et al[2]观察到人胃组织的冰冻切片中，正常胃粘膜细胞有很多荧光点，而胃溃疡的粘膜细胞荧光点减少，胃癌组织标本中，根本没有荧光点出现. 表明人胃上皮细胞表达Cx32蛋白，胃癌细胞不表达. 我们采用RT-PCR及Southern杂交分析，发现人胃上皮细胞有Cx32 mRNA高水平表达，而胃癌细胞中无Cx32转录活性. 这一结果与文献报导的Cx32蛋白质表达水平相符，表明Cx32可能是正常人胃上皮细胞间隙连接的主要成分，是人胃上皮细胞的特异表达的Cx基因，其表达对人胃上皮细胞的通道功能具有重要作用，它的表达缺失是致胃癌GJIC障碍的主要原因.
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Cx基因是一类新近发现的与细胞增殖、分化和发育密切相关的基因. 研究Cx基因在胃粘膜上皮不同分化窗口的表达规律，这对于阐明Cx基因对细胞分化和增殖的作用，了解Cx基因表达与细胞分化的关系是一个极好的研究模型. 我们的本研究表明，Cx32 mRNA在胃正常组织、边缘组织、癌组织中的表达呈一个逐渐由高水平到低水平表达直至无表达的梯度分布，这表明Cx32的表达与胃粘膜上皮细胞分化程度相关. 此外，胃癌组织和MGC-803细胞株Cx32表达丧失，也表明了体内体外癌细胞的恶性生物学特征是相似的.
注：本课题为国家自然科学基金资助项目，No.39670344.
通讯作者 刘洋
4 参考文献
1 Willecke K, Hennemann H, Enuresis N, Dahl E. The diversity of connexin genes encoding gap junctional proteins. Eur J Cell Biol, 1991;56:1-7
2 Uchida Y, Matsuda K, Sasahara K, Kauabata H, Nishioka M. Immunohistochemistry of gap junctions in normal and diseased gastric mucosa of humans. Gastroenterology, 1995;109:1492-1496
收稿日期 1998-11-26 修回日期 1999-04-12, http://www.100md.com