血浆同型半胱氨酸水平与Ⅱ型糖尿病的关系探讨
作者：廖瑛 梁奕铨 肖亦斌 智喜梅 廖志红
单位：中山医科大学附属第一医院内分泌研究室(510080)
关键词：Ⅱ型糖尿病；同型半胱氨酸；高效液相色谱
广东医学990914 【摘要】 目的 探讨血浆总同型半胱氨酸(Hcy)水平与Ⅱ型糖尿病的关系。 方法 应用高效液相色谱仪和荧光检测器测定69例Ⅱ型糖尿病患者和47例正常人的血浆总Hcy水平。结果 对照组(n=47)血浆总Hcy水平12.10±1.86 μmol/L；Ⅱ型糖尿病组(n=69)血浆总Hcy水平15.09±6.04 μmol/L，其中有肾病变组血浆总Hcy水平为17.19±8.06 μmol/L，无肾病变组血浆总Hcy水平为13.86±3.99 μmol/L。Ⅱ型糖尿病组(不论是有肾病变组还是无肾病变组)血浆总Hcy水平明显高于对照组(P<0.001)，高Hcy血症组的糖尿病合并肾病变发生率高于非高Hcy血症组(P<0.05)。结论 Ⅱ型糖尿病患者血浆总Hcy水平高于正常人，高Hcy血症可能与Ⅱ型糖尿病患者合并有肾病变发生有关。
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血浆中同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)水平升高是动脉粥样硬化、脑动脉闭塞性疾病、周围动脉闭塞性疾病、深静脉栓塞等血管疾病的一种独立危险因素[1]。近年来，国外学者对高Hcy血症与糖尿病血管病变的关系进行了研究[2，3]。为此，我们运用高效液相色谱仪和荧光检测器测定正常人和 Ⅱ 型糖尿病患者的血浆总Hcy，以研究血浆Hcy水平与 Ⅱ 型糖尿病的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象 Ⅱ型糖尿病组：Ⅱ型糖尿病患者来源为本院专科门诊或住院患者，均符合1985年WHO诊断标准，共69例。其中，男性29例，平均年龄58.66±13.15岁；女性40例，平均年龄61.60±10.07岁，同时按24 h尿白蛋白排泄率(AER)≥15 μg/min又分为有肾病变组26例，平均年龄62.65±11.13岁，小于15 μg/min为无肾病变组43例，平均年龄58.98±11.57岁，所有患者无合并肝功能、甲状腺机能异常，2周内无急性代谢紊乱，未使用维生素B1、维生素B6及叶酸等影响Hcy代谢的药物。健康对照组：经体检与实验室检查(心电图、X线胸片检查和临床生化指标)均正常，并排除心、肝、肾、甲状腺机能异常等疾患的正常人47例。其中，男性27例，平均年龄58.85±10.26岁；女性20例，平均年龄61.00±7.21岁，与糖尿病组患者年龄、性别构成和体重指数(BMI)差异无显著性。
, 百拇医药
1.2 研究方法 测定各受检者过夜禁食12 h空腹采静脉血2 mL加入预冷的EDTA抗凝管中，在4℃分离血浆置-70℃保存。待标本收集全后测定Hcy。参照Jacobsen DW等[4]报道的方法进行改良，测定血浆总Hcy，采用Waters公司Baseline 810数据处理系统，Waters 470荧光检测器，激发波长为365 nm,荧光检测为475 nm；分析色谱柱：ODS C 185 μm反相分析柱(150.0 mm×4.6 mm ID)，流动相A为3%的甲醇-水含0.25%醋酸；B为甲醇，流动相梯度洗脱，流速为1.0 mL/min。空腹血糖(FBG)采用葡萄糖氧化酶法，GHbA1C色谱法，甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)采用自动生化仪器分析法，维生素B12、叶酸、AER测定用放射免疫法，血标本均同时收集。
1.3 高Hcy血症(hyperhomocystinemia)的诊断标准 以本正常对照组血浆总Hcy均值加两个标准差(
±2s)为95%可信上限，高于此值者为高Hcy血症。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 计量资料以±s和百分率表示，正态分布资料组间比较采用t检验、非正态分布资料组间比较采用秩和检验，组间率的比较应用χ2检验，应用Logistic回归分析筛选早期糖尿病肾病的危险因素，上述统计分析均用SPSS 8.0软件进行计算，以P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有高度显著性。
2 结果
2.1 各组患者Hcy水平比较 见表1。糖尿病患者血浆Hcy水平与年龄、性别、BMI，FBG，GHbA1C，TG,TC，VitB12及叶酸水平无相关。
表1 各组患者Hcy水平比较 (μmol/L) 组别
总水平
, 百拇医药
男(n=29)
女(n=40)
Ⅱ型糖尿病组
15.09±6.04*
14.10±4.55*
15.81±6.88*
有肾病变组(n=26)
17.19±8.06*△
无肾病变组(n=43)
13.86±4.00
, http://www.100md.com 对照组
12.10±1.86
12.36±1.74
11.75±2.00
与对照组比较 *P<0.001，与无肾病变组比较 △ P<0.05
2.2 糖尿病组AER及糖尿病肾病发生率 以Hcy≥15.82 μmol/L作为高Hcy血症的诊断标准，将 Ⅱ 型糖尿病组分为高Hcy血症组和无高Hcy组。高Hcy组的AER(23.74±13.59 μg/min)明显高于无高Hcy组(13.68±4.38 μg/min)(P<0.005)，高Hcy组的糖尿病肾病发生率比无高Hcy组明显增高(52.0% vs 27.2%, P<0.05)。
2.3 早期糖尿病肾病危险因素分析 以有无早期糖尿病肾病为因变量，以年龄、性别、BMI，FBG，GHbA1C,TG，TC和Hcy为自变量作Logistic回归分析，结果表明Hcy和GHbA1c,TG与早期糖尿病肾病的发生有关，见表2。表2 早期糖尿病肾病的危险因素 自变量
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回归系数
(R)
回归系数
标准误(SE)
P值
(Sig)
相对危险度
Exp(B)
GHbA1c
0.4364
0.1978
0.0274
, 百拇医药 1.5471
Hcy
0.2775
0.1119
0.0132
1.3199
TG
0.2422
0.4163
0.0476
0.4761
3 讨论
糖尿病是由遗传和环境因素引起胰岛素绝对或相对缺乏的代谢性疾病，与非糖尿病人群相比，糖尿病人群中大血管病变的发生率高、发病年龄较轻、病死率高。普遍认为，糖尿病人群较易合并血管疾病的易患因素(肥胖、高血压、脂质及脂蛋白代谢异常)、高胰岛素血症以及血小板功能异常参与了其大血管病变的发生发展机制。近年来大量研究证实了高Hcy血症是动脉粥样硬化的独立危险因子，高Hcy血症也参与糖尿病大血管合并症的发生[2]；Hoogeveen等[5]的研究提示高Hcy血症同样是Ⅱ型糖尿病心血管疾病的强危险因子。微血管病变是糖尿病所特有的血管合并症，其发病机制未完全明确，近年来国外研究提示高Hcy血症与糖尿病肾脏病变有关[3，6，7]。
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本研究应用HPLC荧光检测法对69例糖尿病患者与47例正常人的血浆Hcy水平进行了检测。结果表明糖尿病组血浆Hcy水平较正常对照组增高(15.09±6.04 μmol/L vs 12.10±1.86 μmol/L,P<0.01),正常对照组高Hcy血症的发生率为2.1%，糖尿病组高Hcy血症的发生率为37.3%。为了探讨影响Hcy水平的原因，对糖尿病患者血浆Hcy水平与年龄、BMI，FBG，GHbA1C,TG，TC作相关分析，结果显示均无相关关系，提示高血糖不影响Hcy的代谢，Hcy与其他致血管疾病的危险因子无关，与国外文献报道一致[3]。
糖尿病肾病是重要的微血管病变之一，其发病机制尚未完全阐明。主要分5期：肾增大期、正常白蛋白尿期、微白蛋白尿期、大量蛋白尿期、肾功能不全期，其中微白蛋白尿期又称早期糖尿病肾病。国外研究表明，高Hcy血症不仅是糖尿病动脉粥样硬化的独立危险因子，而且与糖尿病肾病有关，并且是微白蛋白尿的危险因子。本课题通过69例Ⅱ型糖尿病患者和47例正常人进行了高Hcy血症和糖尿病早期肾脏病变关系的探讨，结果表明早期肾脏病变组血浆Hcy水平较无肾脏病变组增高(17.19±8.06 μmol/L vs 13.86±3.99 μmol/L, P<0.05)；高Hcy组较正常Hcy组有着明显增高的早期糖尿病肾病发生率(52% vs 27.2%,P<0.05)，提示早期糖尿病肾病与高Hcy血症有关，这一结论与Lanfredini等[6]及Chico等[7]的研究结果一致。为了探讨Hcy是否参与早期糖尿病肾病的发生，本研究应用了Logistic回归分析，以有无早期糖尿病肾病为因变量，年龄、性别、FBG，GHbA1C,TG,TC和Hcy为自变量，结果表明Hcy及TG与早期糖尿病肾病的发生有关。由于Hcy水平的升高并非继发于高血糖、高血压及血脂异常，因此Hcy可能是糖尿病肾病的独立危险因素之一。进一步的证实尚需进行前瞻性研究及大样本的临床试验研究。
, 百拇医药
4 参考文献
1 Stampfer MJ, Malinow MR. Can lowering homocysteine levels reduce cardiovascular risk? NEJM, 1995, 332:328
2 Munshi MN, Stone A, Fink L, et al. Hyperhomocystinemia following a methionine load in patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus and macrovascular disease. Metabolism, 1996, 45:133
3 Hofmann MA, Amiral J, Kohl B, et al. Hyperhomocystinemia and endothelia dysfuntion in IDDM. Diabetes Care, 1997, 20:1880
, http://www.100md.com
4 Jacobsen DW, Gatautis VJ, Green R. Determination of plasma homocysteine by high-performace liquid chromatography with fluorescence detection. Anal Boichem, 1989, 178:208
5 Hoogeveen EK, Kostense PJ, Beks PJ, et al. Hyperhomocystinemia is associated with an increased risk of cardiovascular disease, esoecially in non-insulin-dependent diabetes mellitus. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 1998, 18:133
6 Lanfredini M, Fiorina P, Peca MG, et al. Fasting and post-methionine load homocyst(e)ine values are correlated with microalbuminuria and could contribute to worsening vascular damage in non-insulin-dependent diabetses mellitus patients. Metabolism, 1998, 47(8):915
7 Chico A, Perez A, Cordoba A, et al. Plasma homocystene in related to albumin excretion rate in patients with diabetes mellitus:a new link between diabetic nephropathy and cardiovascular disease? Diabetologia, 1998, 41(6):684, 百拇医药
单位：中山医科大学附属第一医院内分泌研究室(510080)
关键词：Ⅱ型糖尿病；同型半胱氨酸；高效液相色谱
广东医学990914 【摘要】 目的 探讨血浆总同型半胱氨酸(Hcy)水平与Ⅱ型糖尿病的关系。 方法 应用高效液相色谱仪和荧光检测器测定69例Ⅱ型糖尿病患者和47例正常人的血浆总Hcy水平。结果 对照组(n=47)血浆总Hcy水平12.10±1.86 μmol/L；Ⅱ型糖尿病组(n=69)血浆总Hcy水平15.09±6.04 μmol/L，其中有肾病变组血浆总Hcy水平为17.19±8.06 μmol/L，无肾病变组血浆总Hcy水平为13.86±3.99 μmol/L。Ⅱ型糖尿病组(不论是有肾病变组还是无肾病变组)血浆总Hcy水平明显高于对照组(P<0.001)，高Hcy血症组的糖尿病合并肾病变发生率高于非高Hcy血症组(P<0.05)。结论 Ⅱ型糖尿病患者血浆总Hcy水平高于正常人，高Hcy血症可能与Ⅱ型糖尿病患者合并有肾病变发生有关。
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血浆中同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)水平升高是动脉粥样硬化、脑动脉闭塞性疾病、周围动脉闭塞性疾病、深静脉栓塞等血管疾病的一种独立危险因素[1]。近年来，国外学者对高Hcy血症与糖尿病血管病变的关系进行了研究[2，3]。为此，我们运用高效液相色谱仪和荧光检测器测定正常人和 Ⅱ 型糖尿病患者的血浆总Hcy，以研究血浆Hcy水平与 Ⅱ 型糖尿病的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象 Ⅱ型糖尿病组：Ⅱ型糖尿病患者来源为本院专科门诊或住院患者，均符合1985年WHO诊断标准，共69例。其中，男性29例，平均年龄58.66±13.15岁；女性40例，平均年龄61.60±10.07岁，同时按24 h尿白蛋白排泄率(AER)≥15 μg/min又分为有肾病变组26例，平均年龄62.65±11.13岁，小于15 μg/min为无肾病变组43例，平均年龄58.98±11.57岁，所有患者无合并肝功能、甲状腺机能异常，2周内无急性代谢紊乱，未使用维生素B1、维生素B6及叶酸等影响Hcy代谢的药物。健康对照组：经体检与实验室检查(心电图、X线胸片检查和临床生化指标)均正常，并排除心、肝、肾、甲状腺机能异常等疾患的正常人47例。其中，男性27例，平均年龄58.85±10.26岁；女性20例，平均年龄61.00±7.21岁，与糖尿病组患者年龄、性别构成和体重指数(BMI)差异无显著性。
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1.2 研究方法 测定各受检者过夜禁食12 h空腹采静脉血2 mL加入预冷的EDTA抗凝管中，在4℃分离血浆置-70℃保存。待标本收集全后测定Hcy。参照Jacobsen DW等[4]报道的方法进行改良，测定血浆总Hcy，采用Waters公司Baseline 810数据处理系统，Waters 470荧光检测器，激发波长为365 nm,荧光检测为475 nm；分析色谱柱：ODS C 185 μm反相分析柱(150.0 mm×4.6 mm ID)，流动相A为3%的甲醇-水含0.25%醋酸；B为甲醇，流动相梯度洗脱，流速为1.0 mL/min。空腹血糖(FBG)采用葡萄糖氧化酶法，GHbA1C色谱法，甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)采用自动生化仪器分析法，维生素B12、叶酸、AER测定用放射免疫法，血标本均同时收集。
1.3 高Hcy血症(hyperhomocystinemia)的诊断标准 以本正常对照组血浆总Hcy均值加两个标准差(
±2s)为95%可信上限，高于此值者为高Hcy血症。, 百拇医药
1.4 统计学处理 计量资料以
±s和百分率表示，正态分布资料组间比较采用t检验、非正态分布资料组间比较采用秩和检验，组间率的比较应用χ2检验，应用Logistic回归分析筛选早期糖尿病肾病的危险因素，上述统计分析均用SPSS 8.0软件进行计算，以P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有高度显著性。2 结果
2.1 各组患者Hcy水平比较 见表1。糖尿病患者血浆Hcy水平与年龄、性别、BMI，FBG，GHbA1C，TG,TC，VitB12及叶酸水平无相关。
表1 各组患者Hcy水平比较 (μmol/L) 组别
总水平
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男(n=29)
女(n=40)
Ⅱ型糖尿病组
15.09±6.04*
14.10±4.55*
15.81±6.88*
有肾病变组(n=26)
17.19±8.06*△
无肾病变组(n=43)
13.86±4.00
, http://www.100md.com 对照组
12.10±1.86
12.36±1.74
11.75±2.00
与对照组比较 *P<0.001，与无肾病变组比较 △ P<0.05
2.2 糖尿病组AER及糖尿病肾病发生率 以Hcy≥15.82 μmol/L作为高Hcy血症的诊断标准，将 Ⅱ 型糖尿病组分为高Hcy血症组和无高Hcy组。高Hcy组的AER(23.74±13.59 μg/min)明显高于无高Hcy组(13.68±4.38 μg/min)(P<0.005)，高Hcy组的糖尿病肾病发生率比无高Hcy组明显增高(52.0% vs 27.2%, P<0.05)。
2.3 早期糖尿病肾病危险因素分析 以有无早期糖尿病肾病为因变量，以年龄、性别、BMI，FBG，GHbA1C,TG，TC和Hcy为自变量作Logistic回归分析，结果表明Hcy和GHbA1c,TG与早期糖尿病肾病的发生有关，见表2。表2 早期糖尿病肾病的危险因素 自变量
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回归系数
(R)
回归系数
标准误(SE)
P值
(Sig)
相对危险度
Exp(B)
GHbA1c
0.4364
0.1978
0.0274
, 百拇医药 1.5471
Hcy
0.2775
0.1119
0.0132
1.3199
TG
0.2422
0.4163
0.0476
0.4761
3 讨论
糖尿病是由遗传和环境因素引起胰岛素绝对或相对缺乏的代谢性疾病，与非糖尿病人群相比，糖尿病人群中大血管病变的发生率高、发病年龄较轻、病死率高。普遍认为，糖尿病人群较易合并血管疾病的易患因素(肥胖、高血压、脂质及脂蛋白代谢异常)、高胰岛素血症以及血小板功能异常参与了其大血管病变的发生发展机制。近年来大量研究证实了高Hcy血症是动脉粥样硬化的独立危险因子，高Hcy血症也参与糖尿病大血管合并症的发生[2]；Hoogeveen等[5]的研究提示高Hcy血症同样是Ⅱ型糖尿病心血管疾病的强危险因子。微血管病变是糖尿病所特有的血管合并症，其发病机制未完全明确，近年来国外研究提示高Hcy血症与糖尿病肾脏病变有关[3，6，7]。
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本研究应用HPLC荧光检测法对69例糖尿病患者与47例正常人的血浆Hcy水平进行了检测。结果表明糖尿病组血浆Hcy水平较正常对照组增高(15.09±6.04 μmol/L vs 12.10±1.86 μmol/L,P<0.01),正常对照组高Hcy血症的发生率为2.1%，糖尿病组高Hcy血症的发生率为37.3%。为了探讨影响Hcy水平的原因，对糖尿病患者血浆Hcy水平与年龄、BMI，FBG，GHbA1C,TG，TC作相关分析，结果显示均无相关关系，提示高血糖不影响Hcy的代谢，Hcy与其他致血管疾病的危险因子无关，与国外文献报道一致[3]。
糖尿病肾病是重要的微血管病变之一，其发病机制尚未完全阐明。主要分5期：肾增大期、正常白蛋白尿期、微白蛋白尿期、大量蛋白尿期、肾功能不全期，其中微白蛋白尿期又称早期糖尿病肾病。国外研究表明，高Hcy血症不仅是糖尿病动脉粥样硬化的独立危险因子，而且与糖尿病肾病有关，并且是微白蛋白尿的危险因子。本课题通过69例Ⅱ型糖尿病患者和47例正常人进行了高Hcy血症和糖尿病早期肾脏病变关系的探讨，结果表明早期肾脏病变组血浆Hcy水平较无肾脏病变组增高(17.19±8.06 μmol/L vs 13.86±3.99 μmol/L, P<0.05)；高Hcy组较正常Hcy组有着明显增高的早期糖尿病肾病发生率(52% vs 27.2%,P<0.05)，提示早期糖尿病肾病与高Hcy血症有关，这一结论与Lanfredini等[6]及Chico等[7]的研究结果一致。为了探讨Hcy是否参与早期糖尿病肾病的发生，本研究应用了Logistic回归分析，以有无早期糖尿病肾病为因变量，年龄、性别、FBG，GHbA1C,TG,TC和Hcy为自变量，结果表明Hcy及TG与早期糖尿病肾病的发生有关。由于Hcy水平的升高并非继发于高血糖、高血压及血脂异常，因此Hcy可能是糖尿病肾病的独立危险因素之一。进一步的证实尚需进行前瞻性研究及大样本的临床试验研究。
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4 参考文献
1 Stampfer MJ, Malinow MR. Can lowering homocysteine levels reduce cardiovascular risk? NEJM, 1995, 332:328
2 Munshi MN, Stone A, Fink L, et al. Hyperhomocystinemia following a methionine load in patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus and macrovascular disease. Metabolism, 1996, 45:133
3 Hofmann MA, Amiral J, Kohl B, et al. Hyperhomocystinemia and endothelia dysfuntion in IDDM. Diabetes Care, 1997, 20:1880
, http://www.100md.com
4 Jacobsen DW, Gatautis VJ, Green R. Determination of plasma homocysteine by high-performace liquid chromatography with fluorescence detection. Anal Boichem, 1989, 178:208
5 Hoogeveen EK, Kostense PJ, Beks PJ, et al. Hyperhomocystinemia is associated with an increased risk of cardiovascular disease, esoecially in non-insulin-dependent diabetes mellitus. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 1998, 18:133
6 Lanfredini M, Fiorina P, Peca MG, et al. Fasting and post-methionine load homocyst(e)ine values are correlated with microalbuminuria and could contribute to worsening vascular damage in non-insulin-dependent diabetses mellitus patients. Metabolism, 1998, 47(8):915
7 Chico A, Perez A, Cordoba A, et al. Plasma homocystene in related to albumin excretion rate in patients with diabetes mellitus:a new link between diabetic nephropathy and cardiovascular disease? Diabetologia, 1998, 41(6):684, 百拇医药