乳腺癌腋窝阴性淋巴结内微小转移的免疫组化检测和临床意义
作者：姜汉国 姜汉芳
单位：姜汉国 宁夏银川市第一医院，宁夏 银川 750001；姜汉芳 山东青岛市李沧区医院，山东 青岛
关键词：乳腺肿瘤；淋巴转移；免疫组织化学
宁夏医学杂志990906 摘要 目的 探讨应用免疫组化方法检测乳腺癌腋窝常规检测阴性淋巴结内微小转移灶。方法 应用单克隆抗细胞角蛋白(AE1/AE3)和抗上皮膜(EMA)抗体，采用ABC免疫组化染色，观察淋巴结内阳性表达。结果 67例患者的阴性淋巴结473枚中，有16例(23.9%)共37枚淋巴结中发现微小转移灶，其阳性和阴性病人的癌复发，转移和预后差异性均有显著意义(P<0.05)。结论 免疫组化技术对乳腺癌腋窝阴性淋巴结的检测具有十分重要意义。
中国分类号 R737.9 文献标识码 A
, http://www.100md.com Immunohistochemical detection of micrometastases in axillary lymphnodes of node-negative breast cancer patients
and its clinical significance
JINANG Han-guo，JIANG Han-fang
Dept.of Pathology，Ningxia Yinchuan First Hosp.750001，China
Abstract Objectives Detection of micrometastases in resected lymphnodes of node-negative breast cancer.Methods Monoclonal antibodies against cytokeratin (AE1/AE3) and anti EMA were as probs，using ABC immunohistochemistry technique to detect positive expression.Results Occult nodal metastases was observed in 16 of 67 cancer patients (23.9%)，and in 37 of 473 lymph nodes examined.Follow up of breast cancer patients showed that the prognosis，local recourrence and distant metastases of patients with positive group were significant difference (P<0.05).Conclusions The data suggested that the immunohistochemistry technique is important to detect micrometastases in axillary lymphnodes of node-negative breast cancer patients
, 百拇医药
Key words Breast neoplasms；Lymphatic metastasis；Immunohisochemistry
乳腺癌腋窝淋巴结是否转移及淋巴结受累数目是对患者准确分期、治疗方案选择及预后判断最重要的客观指标。在常规的组织病理学检查中，因取材和切片所限，致使部分微小转移灶漏诊。利用免疫组化法检测阴性淋巴结有无上皮源性抗原表达，以此提高识别微小灶转移的能力。我们对67例共473枚原病理诊断无转移淋巴结全部重新行常规和免疫组化检测，同时对病人进行随访。通过分析这些资料，探讨和论证免疫组化法对发现微小转移的优点和对病人预后的意义。
1 材料与方法
1.1 资料来源：抽取本院1985～1992年行乳腺癌根治及改良根治术病人蜡块和临床资料完整的病例共67例。患者均为女性，年龄在26～87岁，平均52.6岁。根据WHO分期T1期26例，T2期34例，T3期7例，选取共473枚原HE诊断无转移的淋巴结。
, http://www.100md.com
1.2 组织切片：把所有的淋巴结蜡块按50μm共5个水平面切片，5μm厚连续切10张，从每个水平面中选取连续的4张切片分别进行免疫组化和HE染色。
1.3 免疫组化染色：5μm切片经56℃烘烤，脱蜡及水化后按ABC法程序进行[1]。单克隆抗细胞角蛋白(AE1/AE3)抗EMA、Ⅱ、Ⅲ抗体及正常血清由Dako和Zymcd公司提供，其浓度、操作程序参考文献[2]。
1.4 随访资料和统计学分析：对所有病人进行探视或信件随访，统计学分析用卡方检验，(P<0.05)差异有显著性。
2 结果
淋巴结内转移的癌细胞对两种抗体均有不同程度的阳性反应，微小的转移癌细胞以小灶或单个存在，多分布于淋巴结被膜下窦。67例乳腺癌共473枚淋巴结，其中16例37枚中查到有微小转移灶，5例连续HE染色的切片中，也发现了微小转移灶，此5例免疫组化染色均为阳性。
, 百拇医药
对67例乳腺癌术后随访5年，淋巴结内有转移灶16例，术后5年内有6例发生复发或远处转移(37.5%)，淋巴结阴性者，术后5年内发生复发和远处转移的5例(9.9%)，两组有显著性差异(P<0.05)见附表。
乳腺癌原发灶大小的不同，其微小灶转移率也不同，在转移的16例中，T1期转移是11.5%(3/26)，T2期20.6%(7/34)，T3期则为85.7%(6/7)。
附表 乳腺癌腋窝淋巴结微小转移情况及术后随访 术后(年)
阳性淋巴结患者
n 复发 转移
阴性淋巴结患者
n 复发 转移
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1
5
0
0
15
0
0
2
4
1
2
12
0
0
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3
2
1
1
9
1
2
4
3
0
1
8
0
1
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5
2
0
0
7
0
1
合计
16
2
4
51
1
4
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3 讨论
众所周知，乳腺癌腋窝淋巴结是否转移对其分期、治疗及预后是一个最重要的参数，在常规的HE染色中，因临床工作量限制，一般一个淋巴结只能制片一张，而Fisher[3]和Wilkinsong[4]等早已研究证实，连续切片检查腋窝阴性淋巴结不同层面，可使淋巴结转移的检出率提高14%～24%。在本组研究中，我们也从连续的HE切片中发现转移灶5例(7.5%)。
利用上述细胞标记分子的特异性抗体进行免疫组化染色，可以提高乳腺癌腋窝淋巴结微小转移的发现率，本组微小转移率为23.4%(16/67)，介于国内外报道的14%～29%之间[5，1]，通过免疫组化，提高了腋窝淋巴结癌转移的阳性率。本组研究和其它作者的报道[6～8]表明了其意义为：①淋巴结内有微小转移者，其术后复发、转移及预后均较阴性者差；②作为单克隆抗体的AE1/AE3及抗EMA非常稳定，ABC技术也已成熟，可以在临床上推广；③免疫组化技术对乳腺癌腋窝阴性淋巴结检测结果阳性率较高，且效果也令人满意。因此，应用免疫组化技术方法对乳腺癌腋窝阴性淋巴结行常规的检测 ，对临床上具有重要价值，值得推广。
, 百拇医药
4 参考文献
[1] Chen Zhaolun，Wen DR，Watter F Coulson.et al.Occult metastases in the lymph nodes of patients with breast cancer node negative by clinical and histologic examinalion and conventiond histology[J].Disease Markers，1991，9：239
[2] Chen Zhaolun，Perez S，Holmes EC，et al.Frequency and distrbution of occult micrometastases in lymph nodcs of patients with non-small ccll lung carcinoma[J].J Natl cancer Inst，1993，85：493
, 百拇医药
[3] Fisher ER，Swamicoss S，Lee C Ⅱ，et al.Detection and significance of occult axillarynode metastases in patients with invasive breast cancer[J].Cancer，1978，42：2025
[4] Wilkinson EJ，Hause LL，Kuzma JF，Occult axillary lymph node metastases in patients with invasive breast carcinoma[J].Lab Invest，1981，44：83
[5] Trojiani M，Demascard I，Boniclion F.Micrometastases to axiliary lymph nodes from carcinoma of the breast：detection by immunohistochemistry and prognostic significance[J].Br J cancer，1987，55：303
, http://www.100md.com
[6] 陈朝伦，卢晓梅，黄绒，等.Ⅰ期癌症患者切除淋巴结内隐匿性微小转移癌灶的检查及其临床病理意义[J].中华肿瘤学杂志，1997，19：69
[7] Richard J Cote，Darid P，Houchens，et al.Intraoperative detection of ccult colon cancer micromctastasos using 125 I-radiolabeled monoclonal antibody cc49[J].Cancer，1996，72：613
[8] Sedmak DD，Meineke TA，knechtges DS，et al.Prognostic singnificance of cytoeratin-positive breast cancer metastases[J].Mod Pathol，1989，2：516
收搞：1999—01—08, 百拇医药
单位：姜汉国 宁夏银川市第一医院，宁夏 银川 750001；姜汉芳 山东青岛市李沧区医院，山东 青岛
关键词：乳腺肿瘤；淋巴转移；免疫组织化学
宁夏医学杂志990906 摘要 目的 探讨应用免疫组化方法检测乳腺癌腋窝常规检测阴性淋巴结内微小转移灶。方法 应用单克隆抗细胞角蛋白(AE1/AE3)和抗上皮膜(EMA)抗体，采用ABC免疫组化染色，观察淋巴结内阳性表达。结果 67例患者的阴性淋巴结473枚中，有16例(23.9%)共37枚淋巴结中发现微小转移灶，其阳性和阴性病人的癌复发，转移和预后差异性均有显著意义(P<0.05)。结论 免疫组化技术对乳腺癌腋窝阴性淋巴结的检测具有十分重要意义。
中国分类号 R737.9 文献标识码 A
, http://www.100md.com Immunohistochemical detection of micrometastases in axillary lymphnodes of node-negative breast cancer patients
and its clinical significance
JINANG Han-guo，JIANG Han-fang
Dept.of Pathology，Ningxia Yinchuan First Hosp.750001，China
Abstract Objectives Detection of micrometastases in resected lymphnodes of node-negative breast cancer.Methods Monoclonal antibodies against cytokeratin (AE1/AE3) and anti EMA were as probs，using ABC immunohistochemistry technique to detect positive expression.Results Occult nodal metastases was observed in 16 of 67 cancer patients (23.9%)，and in 37 of 473 lymph nodes examined.Follow up of breast cancer patients showed that the prognosis，local recourrence and distant metastases of patients with positive group were significant difference (P<0.05).Conclusions The data suggested that the immunohistochemistry technique is important to detect micrometastases in axillary lymphnodes of node-negative breast cancer patients
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Key words Breast neoplasms；Lymphatic metastasis；Immunohisochemistry
乳腺癌腋窝淋巴结是否转移及淋巴结受累数目是对患者准确分期、治疗方案选择及预后判断最重要的客观指标。在常规的组织病理学检查中，因取材和切片所限，致使部分微小转移灶漏诊。利用免疫组化法检测阴性淋巴结有无上皮源性抗原表达，以此提高识别微小灶转移的能力。我们对67例共473枚原病理诊断无转移淋巴结全部重新行常规和免疫组化检测，同时对病人进行随访。通过分析这些资料，探讨和论证免疫组化法对发现微小转移的优点和对病人预后的意义。
1 材料与方法
1.1 资料来源：抽取本院1985～1992年行乳腺癌根治及改良根治术病人蜡块和临床资料完整的病例共67例。患者均为女性，年龄在26～87岁，平均52.6岁。根据WHO分期T1期26例，T2期34例，T3期7例，选取共473枚原HE诊断无转移的淋巴结。
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1.2 组织切片：把所有的淋巴结蜡块按50μm共5个水平面切片，5μm厚连续切10张，从每个水平面中选取连续的4张切片分别进行免疫组化和HE染色。
1.3 免疫组化染色：5μm切片经56℃烘烤，脱蜡及水化后按ABC法程序进行[1]。单克隆抗细胞角蛋白(AE1/AE3)抗EMA、Ⅱ、Ⅲ抗体及正常血清由Dako和Zymcd公司提供，其浓度、操作程序参考文献[2]。
1.4 随访资料和统计学分析：对所有病人进行探视或信件随访，统计学分析用卡方检验，(P<0.05)差异有显著性。
2 结果
淋巴结内转移的癌细胞对两种抗体均有不同程度的阳性反应，微小的转移癌细胞以小灶或单个存在，多分布于淋巴结被膜下窦。67例乳腺癌共473枚淋巴结，其中16例37枚中查到有微小转移灶，5例连续HE染色的切片中，也发现了微小转移灶，此5例免疫组化染色均为阳性。
, 百拇医药
对67例乳腺癌术后随访5年，淋巴结内有转移灶16例，术后5年内有6例发生复发或远处转移(37.5%)，淋巴结阴性者，术后5年内发生复发和远处转移的5例(9.9%)，两组有显著性差异(P<0.05)见附表。
乳腺癌原发灶大小的不同，其微小灶转移率也不同，在转移的16例中，T1期转移是11.5%(3/26)，T2期20.6%(7/34)，T3期则为85.7%(6/7)。
附表 乳腺癌腋窝淋巴结微小转移情况及术后随访 术后(年)
阳性淋巴结患者
n 复发 转移
阴性淋巴结患者
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3 讨论
众所周知，乳腺癌腋窝淋巴结是否转移对其分期、治疗及预后是一个最重要的参数，在常规的HE染色中，因临床工作量限制，一般一个淋巴结只能制片一张，而Fisher[3]和Wilkinsong[4]等早已研究证实，连续切片检查腋窝阴性淋巴结不同层面，可使淋巴结转移的检出率提高14%～24%。在本组研究中，我们也从连续的HE切片中发现转移灶5例(7.5%)。
利用上述细胞标记分子的特异性抗体进行免疫组化染色，可以提高乳腺癌腋窝淋巴结微小转移的发现率，本组微小转移率为23.4%(16/67)，介于国内外报道的14%～29%之间[5，1]，通过免疫组化，提高了腋窝淋巴结癌转移的阳性率。本组研究和其它作者的报道[6～8]表明了其意义为：①淋巴结内有微小转移者，其术后复发、转移及预后均较阴性者差；②作为单克隆抗体的AE1/AE3及抗EMA非常稳定，ABC技术也已成熟，可以在临床上推广；③免疫组化技术对乳腺癌腋窝阴性淋巴结检测结果阳性率较高，且效果也令人满意。因此，应用免疫组化技术方法对乳腺癌腋窝阴性淋巴结行常规的检测 ，对临床上具有重要价值，值得推广。
, 百拇医药
4 参考文献
[1] Chen Zhaolun，Wen DR，Watter F Coulson.et al.Occult metastases in the lymph nodes of patients with breast cancer node negative by clinical and histologic examinalion and conventiond histology[J].Disease Markers，1991，9：239
[2] Chen Zhaolun，Perez S，Holmes EC，et al.Frequency and distrbution of occult micrometastases in lymph nodcs of patients with non-small ccll lung carcinoma[J].J Natl cancer Inst，1993，85：493
, 百拇医药
[3] Fisher ER，Swamicoss S，Lee C Ⅱ，et al.Detection and significance of occult axillarynode metastases in patients with invasive breast cancer[J].Cancer，1978，42：2025
[4] Wilkinson EJ，Hause LL，Kuzma JF，Occult axillary lymph node metastases in patients with invasive breast carcinoma[J].Lab Invest，1981，44：83
[5] Trojiani M，Demascard I，Boniclion F.Micrometastases to axiliary lymph nodes from carcinoma of the breast：detection by immunohistochemistry and prognostic significance[J].Br J cancer，1987，55：303
, http://www.100md.com
[6] 陈朝伦，卢晓梅，黄绒，等.Ⅰ期癌症患者切除淋巴结内隐匿性微小转移癌灶的检查及其临床病理意义[J].中华肿瘤学杂志，1997，19：69
[7] Richard J Cote，Darid P，Houchens，et al.Intraoperative detection of ccult colon cancer micromctastasos using 125 I-radiolabeled monoclonal antibody cc49[J].Cancer，1996，72：613
[8] Sedmak DD，Meineke TA，knechtges DS，et al.Prognostic singnificance of cytoeratin-positive breast cancer metastases[J].Mod Pathol，1989，2：516
收搞：1999—01—08, 百拇医药