脑络通对急性脑缺血再灌注大鼠TXB2、PGI2及TNF含量的影响
作者：李 净，王 键，许冠荪
单位：安徽中医学院，安徽 合肥 230038
关键词：脑络通；急性脑缺血再灌注；血栓素B2；前列环素；肿瘤坏死因子
中国中医基础医学杂志990908 摘 要 目的 探讨中药复方制剂脑络通抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法 采用急性全脑缺血再灌注模型鼠，观察脑络通对局部脑组织血流量、脑含水量、血中血栓素B2(TXB2)、前列环素(PGI2)、肿瘤坏死因子(TNF)含量的影响。结果 脑络通可明显改善脑缺血后局部脑组织血流量(rCBF)，脑组织含水量亦较病理组显著减少(P<0.05)，TXB2/PGI2、TNF的异常升高得到明显改善(P<0.01)。结论 脑络通对急性脑缺血再灌注损伤有显著保护作用。
, 百拇医药
Effect of Naoluotong on The Content of TXB2、PGI2 and
TNF in The Process of Cerebral ischemia reperfusion in Rats
LI Jing WANG Jian XUN Guan-sun
(Anhui College of Traditional Chinese Medicine,Hefei,230038)
Abstract: Objective:To investigate the effect and mechanism of Naoluotong in treating cerebral ischemia reperfusion in rats.Method:The cerebral ischemia reperfusion models were used.The regional cerebral blood flow,the content of the cerebral water,the Thuomboxane B2 (TXB2),6-keto-Prostaglandin F1α and Tumor necrosis factor (TNF) contents of blood were observed.Results:Naoluotong could obviously alleviate the regional cerebral ischemia,remarkably decrease the content of cerebral water and alleviate the abnormal raise of TXB2/PGI2 and TNF in blood.Conclude:Naoluotory have the protective function on the cerebral ischemia.
, 百拇医药
KEY WORDS:Naoluotong; Cerebral ischemia reperfusion; Thuomboxane B2/6-keto-Prostaglandin F1α;Tumor necrosis factor;regional cerebral blood flow.
脑络通是根据王乐FDB3教授临床验方研制的中药复方制剂，主要由黄芪、三七、川芎、蜈蚣等药物组成，具有益气活血、熄风通络等功效。临床上用于治疗缺血性脑血管病，收到良好的效果。我们已做的实验研究，从生化和超微结构等方面论证了其药效学机理。[1～3]本研究选用大鼠急性脑缺血再灌注模型，进一步探讨脑络通在凝血机制和细胞因子方面抗急性脑缺血再灌注损伤的作用机理。
材料与方法
1 药物与试剂
, http://www.100md.com
脑络通由安徽中医学院制剂教研室制备，供腹腔注射用；川芎嗪注射液由无锡市第七制药厂生产，批号950406；血栓素B2放免药盒，6-酮-前列腺素F1α放免药盒和肿瘤坏死因子放免药盒均由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。
2 动物与分组
健康Wistar大鼠，雌雄不拘32只，由安徽中医学院实验动物中心供应，体重180g～220g，随机分为①正常对照组，正常饲养；②病理组，造模；③脑络通组，造模同病理组，于造模前0.5h腹腔注射脑络通12g/kg；④川芎嗪组，造模同病理组，于造模前0.5h腹腔注射川芎嗪33.3mg/kg。
3 脑缺血再灌注模型复制[4]
用氨基甲酸乙酯(1.0g/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰卧固定，逐层分离两侧颈总动脉，从第一颈椎横突孔热凝闭双侧椎动脉，用动脉夹夹闭双侧颈总动脉，夹闭时间为缺血期，松开动脉夹为再灌注期。
, http://www.100md.com
4 样品处理
实验动物于脑缺血再灌注后1h，眼球采血，放入加有10%EDTA.Na2试管中，分离出血浆后，放入-20℃保存。并断头取出全脑，取后部脑组织的1/2，供测脑含水量。
5 观察指标与方法
局部脑组织血流量(rCBF)，采用氢清除法；[5]脑含水量按Gotch[6]法略加修改，依公式(湿重——干重)/湿重×100%计算。血浆TXB2、PGI2、TNF含量，均采用放射免疫均相竞争法，严格遵药盒说明书步骤进行。
6 统计学处理
所有资料用
±s表示，组间比较采用方差处理。
, 百拇医药
结果
1 脑络通对局部脑组织血流量和含水量的影响
表1 脑络通对局部脑组织血流量和含水量的变化(±s) 组 别
n
rCBF(ml/min 100g)
脑含水量(%)
缺血前
缺血30min再灌注1h
缺血前
缺血再灌注1h
, http://www.100md.com
正常对照组
10
64.52±8.35
77.18±0.61
病理组
10
63.50±8.06
40.91±6.70△
77.30±0.49
79.61±0.67△
脑络通组
10
, http://www.100md.com
64.32±8.45
65.05±6.06*
77.20±0.58
77.49±0.46**
川芎嗪组
10
64.00±8.50
64.17±8.01*
77.34±0.71
77.53±0.41**
注：与正常组比较：△P<0.01；与病理组比较：*P<0.01，**P<0.05。
, http://www.100md.com
从表1显示，实验性脑缺血30min再灌注1h后，rCBF明显下降(P<0.01)，脑含水量增加(P<0.01)；而脑络通、川芎嗪治疗后能明显增加rCBF和改善脑水肿程度(P<0.05)。
2 脑络通过血浆TXB2、PGI2、TNF含量的影响
从表2显示，实验性全脑缺血30min再灌注1h后，TXB2、TNF含量显著升高(P<0.01)，PGI2显著降低(P<0.01)，而用脑络通和川芎嗪预处理后，能显著降低TXB2、TNF含量，升高PGI2含量(P<0.01)。
表2 脑络通对血TXB2、PGI2、TNF含量的变化(±s) 组 别
, 百拇医药
n
TXB2含量(pg/ml)
PGI2含量(pg/ml)
TNF含量(ng/ml)
正常对照组
10
128.28±17.18
450.39±79.5
1.37±0.19
病理组
10
, http://www.100md.com 224.60±25.60△
262.00±52.73△
2.02±0.38△
脑络通组
10
101.91±11.61*
429.73±92.40*
1.40±0.07*
川芎嗪组
10
, http://www.100md.com
151.33±13.02*
461.97±87.82*
1.36±0.12*
注：与正常组比较：△P<0.01；与病理组比较：*P<0.01。
讨论
本实验以大鼠急性全脑缺血再灌注模型，研究具有益气活血，熄风通络作用的脑络通抗脑缺血再灌注损伤作用的部分药效学机制。结果显示，脑络通具有明显增加模型鼠脑缺血再灌注损伤低灌注期rCBF，减轻脑水肿程度及调节血浆TXB2、PGI2、TNF的含量。
脑缺血再灌注时，通过花生四烯酸代谢产生大量的TXA2等物质，同时PGI2合成受到抑制，加重脑缺血和脑水肿，PGI2则通过抑制血小板活化和扩张血管而对抗之。[7]本研究表明，脑络通可抑制TXB2的升高，提高6-keto-PGI2水平，表明其作用与调节脑内TXA2/PGI2平衡有关。
, http://www.100md.com
脑缺血再灌注损伤是极其复杂的病理生理过程，存在中枢神经、内分泌及免疫三大调节系统。TNF不仅是重要的免疫递质，更是联系三大调节系统的桥梁。现有的研究表明，TNFα产生较早，这可能是因为TNFα是脑缺血损害后激活细胞因子网络的启动因子。TNF既诱导血管内皮细胞产生凝血活性，引发血小板活化因子(PAF)、TXA增加，又抑制抗凝物质的活性，使内皮细胞表面成为促凝状态，同时还诱导TXB2等缩血管活性物质的表达，抑制血管舒张因子下降，引发和加重血管收缩[8]，而阻断内源性TNFα则是有神经保护作用。[9]本研究表明，脑络通能抑制脑缺血再灌注损伤过程中TNFα升高，其作用机制可能与通过阻断内源性TNFα诱导产生的脑缺血再灌注损伤有关，详细的机理尚待进一步深入研究。
基金项目：安徽省教委自然科学基金资助项目
参考文献
[1] 王键，许冠荪，胡容峰.脑络通对大鼠急性脑缺血——再灌注损伤保护作用的实验研究.中国中医基础医学杂志，1997，4(6)：346-347.
, 百拇医药
[2] 王键，许冠荪，李净.脑络通激活L-arg——NO通路对缺血性脑损伤保护作用.中国中医基础医学杂志，1998，4(7)：36-38.
[3] 王键，李净，许冠荪.脑络通对大鼠局灶性脑缺血脑细胞超微结构的影响.中国中医基础医学杂志，1999，5(1)：26-28.
[4] Dulsinelli,WA,Brerley JB,A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanasthetized rat.Storke,1979,10:217.
[5] Young W.Hz.Clearance measurement of blood flow.A review of technique and polarographic principle.Stroke,1980,11:552.
, http://www.100md.com
[6] Gotch O,Asano T,koide t,et al.Ischemia brain edema following occlusion of the middle cerebral artery in the rat.Stroke,1985,16:101.
[7] Murdoch J,hall R.Brain protection:Physiological and pharmacological consideration.Part I:The physiology of brain injury.Can Anesth 1990，37:663.
[8] Uno H,Matsuyama T,Akita H,et al.Induction of tumornecrosis factor—α in the mouse hippocampus following transient forebrain ischemia,J Cereb Blood Flow Metab,1997,17：491.
[9] Barone FC,Arrin B,White RF,et al Tumornecrosis factor—alpha A mediator necrosis factor—alpha A mediator of focal ischemia brain injury.Stroke,1997,28(6):1233-1244., 百拇医药
单位：安徽中医学院，安徽 合肥 230038
关键词：脑络通；急性脑缺血再灌注；血栓素B2；前列环素；肿瘤坏死因子
中国中医基础医学杂志990908 摘 要 目的 探讨中药复方制剂脑络通抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法 采用急性全脑缺血再灌注模型鼠，观察脑络通对局部脑组织血流量、脑含水量、血中血栓素B2(TXB2)、前列环素(PGI2)、肿瘤坏死因子(TNF)含量的影响。结果 脑络通可明显改善脑缺血后局部脑组织血流量(rCBF)，脑组织含水量亦较病理组显著减少(P<0.05)，TXB2/PGI2、TNF的异常升高得到明显改善(P<0.01)。结论 脑络通对急性脑缺血再灌注损伤有显著保护作用。
, 百拇医药
Effect of Naoluotong on The Content of TXB2、PGI2 and
TNF in The Process of Cerebral ischemia reperfusion in Rats
LI Jing WANG Jian XUN Guan-sun
(Anhui College of Traditional Chinese Medicine,Hefei,230038)
Abstract: Objective:To investigate the effect and mechanism of Naoluotong in treating cerebral ischemia reperfusion in rats.Method:The cerebral ischemia reperfusion models were used.The regional cerebral blood flow,the content of the cerebral water,the Thuomboxane B2 (TXB2),6-keto-Prostaglandin F1α and Tumor necrosis factor (TNF) contents of blood were observed.Results:Naoluotong could obviously alleviate the regional cerebral ischemia,remarkably decrease the content of cerebral water and alleviate the abnormal raise of TXB2/PGI2 and TNF in blood.Conclude:Naoluotory have the protective function on the cerebral ischemia.
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KEY WORDS:Naoluotong; Cerebral ischemia reperfusion; Thuomboxane B2/6-keto-Prostaglandin F1α;Tumor necrosis factor;regional cerebral blood flow.
脑络通是根据王乐FDB3教授临床验方研制的中药复方制剂，主要由黄芪、三七、川芎、蜈蚣等药物组成，具有益气活血、熄风通络等功效。临床上用于治疗缺血性脑血管病，收到良好的效果。我们已做的实验研究，从生化和超微结构等方面论证了其药效学机理。[1～3]本研究选用大鼠急性脑缺血再灌注模型，进一步探讨脑络通在凝血机制和细胞因子方面抗急性脑缺血再灌注损伤的作用机理。
材料与方法
1 药物与试剂
, http://www.100md.com
脑络通由安徽中医学院制剂教研室制备，供腹腔注射用；川芎嗪注射液由无锡市第七制药厂生产，批号950406；血栓素B2放免药盒，6-酮-前列腺素F1α放免药盒和肿瘤坏死因子放免药盒均由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。
2 动物与分组
健康Wistar大鼠，雌雄不拘32只，由安徽中医学院实验动物中心供应，体重180g～220g，随机分为①正常对照组，正常饲养；②病理组，造模；③脑络通组，造模同病理组，于造模前0.5h腹腔注射脑络通12g/kg；④川芎嗪组，造模同病理组，于造模前0.5h腹腔注射川芎嗪33.3mg/kg。
3 脑缺血再灌注模型复制[4]
用氨基甲酸乙酯(1.0g/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰卧固定，逐层分离两侧颈总动脉，从第一颈椎横突孔热凝闭双侧椎动脉，用动脉夹夹闭双侧颈总动脉，夹闭时间为缺血期，松开动脉夹为再灌注期。
, http://www.100md.com
4 样品处理
实验动物于脑缺血再灌注后1h，眼球采血，放入加有10%EDTA.Na2试管中，分离出血浆后，放入-20℃保存。并断头取出全脑，取后部脑组织的1/2，供测脑含水量。
5 观察指标与方法
局部脑组织血流量(rCBF)，采用氢清除法；[5]脑含水量按Gotch[6]法略加修改，依公式(湿重——干重)/湿重×100%计算。血浆TXB2、PGI2、TNF含量，均采用放射免疫均相竞争法，严格遵药盒说明书步骤进行。
6 统计学处理
所有资料用
±s表示，组间比较采用方差处理。, 百拇医药
结果
1 脑络通对局部脑组织血流量和含水量的影响
表1 脑络通对局部脑组织血流量和含水量的变化(
±s) 组 别n
rCBF(ml/min 100g)
脑含水量(%)
缺血前
缺血30min再灌注1h
缺血前
缺血再灌注1h
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正常对照组
10
64.52±8.35
77.18±0.61
病理组
10
63.50±8.06
40.91±6.70△
77.30±0.49
79.61±0.67△
脑络通组
10
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64.32±8.45
65.05±6.06*
77.20±0.58
77.49±0.46**
川芎嗪组
10
64.00±8.50
64.17±8.01*
77.34±0.71
77.53±0.41**
注：与正常组比较：△P<0.01；与病理组比较：*P<0.01，**P<0.05。
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从表1显示，实验性脑缺血30min再灌注1h后，rCBF明显下降(P<0.01)，脑含水量增加(P<0.01)；而脑络通、川芎嗪治疗后能明显增加rCBF和改善脑水肿程度(P<0.05)。
2 脑络通过血浆TXB2、PGI2、TNF含量的影响
从表2显示，实验性全脑缺血30min再灌注1h后，TXB2、TNF含量显著升高(P<0.01)，PGI2显著降低(P<0.01)，而用脑络通和川芎嗪预处理后，能显著降低TXB2、TNF含量，升高PGI2含量(P<0.01)。
表2 脑络通对血TXB2、PGI2、TNF含量的变化(
±s) 组 别, 百拇医药
n
TXB2含量(pg/ml)
PGI2含量(pg/ml)
TNF含量(ng/ml)
正常对照组
10
128.28±17.18
450.39±79.5
1.37±0.19
病理组
10
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262.00±52.73△
2.02±0.38△
脑络通组
10
101.91±11.61*
429.73±92.40*
1.40±0.07*
川芎嗪组
10
, http://www.100md.com
151.33±13.02*
461.97±87.82*
1.36±0.12*
注：与正常组比较：△P<0.01；与病理组比较：*P<0.01。
讨论
本实验以大鼠急性全脑缺血再灌注模型，研究具有益气活血，熄风通络作用的脑络通抗脑缺血再灌注损伤作用的部分药效学机制。结果显示，脑络通具有明显增加模型鼠脑缺血再灌注损伤低灌注期rCBF，减轻脑水肿程度及调节血浆TXB2、PGI2、TNF的含量。
脑缺血再灌注时，通过花生四烯酸代谢产生大量的TXA2等物质，同时PGI2合成受到抑制，加重脑缺血和脑水肿，PGI2则通过抑制血小板活化和扩张血管而对抗之。[7]本研究表明，脑络通可抑制TXB2的升高，提高6-keto-PGI2水平，表明其作用与调节脑内TXA2/PGI2平衡有关。
, http://www.100md.com
脑缺血再灌注损伤是极其复杂的病理生理过程，存在中枢神经、内分泌及免疫三大调节系统。TNF不仅是重要的免疫递质，更是联系三大调节系统的桥梁。现有的研究表明，TNFα产生较早，这可能是因为TNFα是脑缺血损害后激活细胞因子网络的启动因子。TNF既诱导血管内皮细胞产生凝血活性，引发血小板活化因子(PAF)、TXA增加，又抑制抗凝物质的活性，使内皮细胞表面成为促凝状态，同时还诱导TXB2等缩血管活性物质的表达，抑制血管舒张因子下降，引发和加重血管收缩[8]，而阻断内源性TNFα则是有神经保护作用。[9]本研究表明，脑络通能抑制脑缺血再灌注损伤过程中TNFα升高，其作用机制可能与通过阻断内源性TNFα诱导产生的脑缺血再灌注损伤有关，详细的机理尚待进一步深入研究。
基金项目：安徽省教委自然科学基金资助项目
参考文献
[1] 王键，许冠荪，胡容峰.脑络通对大鼠急性脑缺血——再灌注损伤保护作用的实验研究.中国中医基础医学杂志，1997，4(6)：346-347.
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[3] 王键，李净，许冠荪.脑络通对大鼠局灶性脑缺血脑细胞超微结构的影响.中国中医基础医学杂志，1999，5(1)：26-28.
[4] Dulsinelli,WA,Brerley JB,A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanasthetized rat.Storke,1979,10:217.
[5] Young W.Hz.Clearance measurement of blood flow.A review of technique and polarographic principle.Stroke,1980,11:552.
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[8] Uno H,Matsuyama T,Akita H,et al.Induction of tumornecrosis factor—α in the mouse hippocampus following transient forebrain ischemia,J Cereb Blood Flow Metab,1997,17：491.
[9] Barone FC,Arrin B,White RF,et al Tumornecrosis factor—alpha A mediator necrosis factor—alpha A mediator of focal ischemia brain injury.Stroke,1997,28(6):1233-1244., 百拇医药