经眼电刺激建立慢性实验性大鼠癫痫模型*
作者：张丽蓓，周友龙，刘 芳，张 颖
单位：张丽蓓(河南省老干部医疗康复中心，河南 郑州 450003)；周友龙(河南中医学院 针灸推拿系，河南 郑州 450003)；刘 芳，张 颖(河南省人民医院 脑电图室，河南 郑州 450003)
关键词：癫痫；电刺激；慢性模型；大鼠
中国中医基础医学杂志990919 MAKING THE CHRONIC EXPERIMENTAL EPILEPTIC MODEL BY
ELECTRONIC STIMULATION THROUGH EYES
HeNan province health center Zhang Li-pei et al
Department of acupuncture and moxibustion,HeNan college of TCM
, 百拇医药
摘 要 目的 建立对脑组织无直接损害、稳定、可靠的慢性实验性癫痫模型。方法 用针灸针作为电极刺入眼底。经一定参数的电刺激大鼠，观察大鼠强直、痉挛发作及脑电图的变化。结果 90%以上的大鼠在停止电刺激后20d仍有1-3级自发发作，且有典型痫样放电。结论 强直痉挛发作及脑电图典型痫样放电是癫痫病的根本特征，因此，运用该方法可以建立稳定、可靠的癫痫模型。
目前国内外电刺激致痫模型，一种是急性电惊厥，另一种是慢性“点燃效应”模型，前者实际是惊厥模型，而后者操作技术复杂，周期长。我们采用经眼电刺激大鼠，在较短时间内，更简便地建立了稳定可靠的慢性癫痫模型。现报告如下：
材料与方法
1 材料
LMS-2B型二道生理记录仪(成都仪器厂生产)。YSD-4型药理生理实验多用仪(蚌埠医学院产)。华佗牌针灸针。大鼠固定台。
, 百拇医药
2 方法
取健康Wistar大鼠，雌雄各半，体重200 g～250 g，随机分为对照组10只，实验组60只。
固定大鼠四肢及头部，用1寸长的32号针灸针，沿大鼠眼球的内侧刺入眼底，动作要轻，以防刺破眼球引起眼底出血。
分别在两根针灸针柄上连接YSD-4型药理生理实验多用仪，选好刺激参数：频率8Hz、波宽4 ms、脉冲持续时间0.5s、强度10 v、24 h刺激1次，每次10 min。
脑电图描记方法：脑电图描记条件：灵敏度0.1 mv/cm，滤波30 Hz，纸速10 mm/sec，25 mm/sec，时间常数0.2s。电极位置及导联、电极位置参照国际脑电图学会10/20系统标准，记录电极分别置于c3点和c4点，双耳A1、A2为参考电极，c2接地，采用针刺电极单极导联描记。
, 百拇医药
70只大鼠在造模前全部描记一次脑电图，造模期间每3天描记一次脑电图。造模结束后每5天描记一次脑电图，观察20d，然后将70只大鼠全面做一次脑电图。
观察大鼠的形为表现，采Simialowski 6级评定法(0-V)[1]，并对脑电图进行分析。
结果
1 行为表现
电刺激4d后，所有的大鼠出现面部抽动，须动，咀嚼，相当于1～2级发作。到第7d，部分大鼠尖叫、流涎、前肢阵挛，相当于3～4级发作。到第10d，部分大鼠出现阵挛、狂奔、站立、跌倒，四肢抽搐，伴尖叫流涎，抽搐时间在20～180秒，相当于4～5级发作，电刺激停止20d后，随机观察动物30 min,90%的大鼠有1～5级的自发发作。
2 脑电的观测
, 百拇医药
电刺激4d后开始出现典型的棘波、尖波发放。10d后，放电形式基本稳定下来。癫痫发作时，脑电图出现大量高幅12～13 Hz棘节律发放，较多高幅尖波、尖一慢波、棘波、棘一慢波。脑电基本频率变慢，基本波幅升高。20d后，随机观察30min，有92%的动物出现典型痫样放电。其具体变化见下表：
电刺激致痫大鼠脑电变化情况(
±s) 组 别
例数
(只)
脑电基本频率
(Hz)
基本波幅
(mv)
, 百拇医药
放电平均波幅
(mv)
放电最高波幅
(mv)
放电频率
(次/分)
对照组
10
5.1±0.52
37±6.75
0
0
实验组
, 百拇医药
60
2.45±0.43***
72±12.29***
119±24.49***
258±81.21***
10.4±3.30***
注：**与对照组比较：*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01。
图1 对照组：背景为低-中幅5-7Hzθ波，少量低-中幅δ波
, 百拇医药
图2 实验组：大量高幅12—13 Hz棘节律发放，较多高幅尖波、尖-慢波、棘波、棘-慢波。
讨论
1 本实验采用经眼电刺激建立癫闲模型，通过对行为变化观察和脑电图的监测，证明此实验可以建立慢性癫痫模型。该方法与目前国内外慢性癫痫造模方法相比[2]具有以下特点：
1.1 造模方法简便、时间短、成本低，适用各层次科研单位。对脑组织无损伤，避免了直接在脑组织上造模而致的脑神经元的病理损伤，有利于神经生化和形态结构方面研究。
1.2 自发发作率较高，停止电刺激20d以后，尚可见90%以上动物有1—5级自发发作， 且有典型痫样放电，说明该模型具有较高的可靠性及稳定性，更加接近人类癫痫的自发发作，且该模型自发发作及痫样放电能保留较长时间，更有利于研究者系统的观察抗痫的药物作用，客观地评价抗痫的疗效。同时也为癫痫病的神经生理、神经生化等基础研究提供了一个很好的研究对象。
, 百拇医药
1.3 造模后脑电的基本频率极显著变慢(与对照组比较P<0.01)，脑电基本波幅升高(与对照组比较P<0.01)，并出现大量高幅12～13 Hz棘节律发放，较多高幅尖波、尖一慢波、棘波、棘一慢波，放电的平均波幅为119±23.8 mv、最高波幅258±81.21 mv，放电的频率高达10.4±3.2次/分。因此，该模型脑电图有典型的癫样改变。
1.4 该模型自发发作多为1～3级发作，而脑电均有较典型的痫样放电，由于条件所限，我们尚未对该模型作长期观察，从已研究的结果看，是一种较理想慢性实验性癫痫模型，具有很大的推广价值。
基金项目：河南省自然基金资助项目。编号：98101
作者简介：张丽蓓，女，32岁，河南省老干部医疗康复中心主治医师，电话：0371-5955639，邮编：450003。
周友龙，男，33岁，讲师，硕士研究生，河南中医学院针灸系。主持研究省自然基金项目、省攻关项目3项，主持厅级项目2项，已获省级二等奖1项，厅级二等奖2项，发表论文20余篇。电话：0371-5965292，邮编：450003。
参考文献
[1] Dedhl RG.et al.Development and persistance of kindled seizures after repeated injections of pentylentetrazol in rats and guinea pigs.Epilepsia,1984，25(4):505.
[2] 王大仁，慕容慎行.实验性癫痫模型.福建中医学院学报，1984，18(2)：73.
(收稿日期 1999-04-28 修回日期 1999-05-18), http://www.100md.com
单位：张丽蓓(河南省老干部医疗康复中心，河南 郑州 450003)；周友龙(河南中医学院 针灸推拿系，河南 郑州 450003)；刘 芳，张 颖(河南省人民医院 脑电图室，河南 郑州 450003)
关键词：癫痫；电刺激；慢性模型；大鼠
中国中医基础医学杂志990919 MAKING THE CHRONIC EXPERIMENTAL EPILEPTIC MODEL BY
ELECTRONIC STIMULATION THROUGH EYES
HeNan province health center Zhang Li-pei et al
Department of acupuncture and moxibustion,HeNan college of TCM
, 百拇医药
摘 要 目的 建立对脑组织无直接损害、稳定、可靠的慢性实验性癫痫模型。方法 用针灸针作为电极刺入眼底。经一定参数的电刺激大鼠，观察大鼠强直、痉挛发作及脑电图的变化。结果 90%以上的大鼠在停止电刺激后20d仍有1-3级自发发作，且有典型痫样放电。结论 强直痉挛发作及脑电图典型痫样放电是癫痫病的根本特征，因此，运用该方法可以建立稳定、可靠的癫痫模型。
目前国内外电刺激致痫模型，一种是急性电惊厥，另一种是慢性“点燃效应”模型，前者实际是惊厥模型，而后者操作技术复杂，周期长。我们采用经眼电刺激大鼠，在较短时间内，更简便地建立了稳定可靠的慢性癫痫模型。现报告如下：
材料与方法
1 材料
LMS-2B型二道生理记录仪(成都仪器厂生产)。YSD-4型药理生理实验多用仪(蚌埠医学院产)。华佗牌针灸针。大鼠固定台。
, 百拇医药
2 方法
取健康Wistar大鼠，雌雄各半，体重200 g～250 g，随机分为对照组10只，实验组60只。
固定大鼠四肢及头部，用1寸长的32号针灸针，沿大鼠眼球的内侧刺入眼底，动作要轻，以防刺破眼球引起眼底出血。
分别在两根针灸针柄上连接YSD-4型药理生理实验多用仪，选好刺激参数：频率8Hz、波宽4 ms、脉冲持续时间0.5s、强度10 v、24 h刺激1次，每次10 min。
脑电图描记方法：脑电图描记条件：灵敏度0.1 mv/cm，滤波30 Hz，纸速10 mm/sec，25 mm/sec，时间常数0.2s。电极位置及导联、电极位置参照国际脑电图学会10/20系统标准，记录电极分别置于c3点和c4点，双耳A1、A2为参考电极，c2接地，采用针刺电极单极导联描记。
, 百拇医药
70只大鼠在造模前全部描记一次脑电图，造模期间每3天描记一次脑电图。造模结束后每5天描记一次脑电图，观察20d，然后将70只大鼠全面做一次脑电图。
观察大鼠的形为表现，采Simialowski 6级评定法(0-V)[1]，并对脑电图进行分析。
结果
1 行为表现
电刺激4d后，所有的大鼠出现面部抽动，须动，咀嚼，相当于1～2级发作。到第7d，部分大鼠尖叫、流涎、前肢阵挛，相当于3～4级发作。到第10d，部分大鼠出现阵挛、狂奔、站立、跌倒，四肢抽搐，伴尖叫流涎，抽搐时间在20～180秒，相当于4～5级发作，电刺激停止20d后，随机观察动物30 min,90%的大鼠有1～5级的自发发作。
2 脑电的观测
, 百拇医药
电刺激4d后开始出现典型的棘波、尖波发放。10d后，放电形式基本稳定下来。癫痫发作时，脑电图出现大量高幅12～13 Hz棘节律发放，较多高幅尖波、尖一慢波、棘波、棘一慢波。脑电基本频率变慢，基本波幅升高。20d后，随机观察30min，有92%的动物出现典型痫样放电。其具体变化见下表：
电刺激致痫大鼠脑电变化情况(
±s) 组 别例数
(只)
脑电基本频率
(Hz)
基本波幅
(mv)
, 百拇医药
放电平均波幅
(mv)
放电最高波幅
(mv)
放电频率
(次/分)
对照组
10
5.1±0.52
37±6.75
0
0
实验组
, 百拇医药
60
2.45±0.43***
72±12.29***
119±24.49***
258±81.21***
10.4±3.30***
注：**与对照组比较：*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01。
图1 对照组：背景为低-中幅5-7Hzθ波，少量低-中幅δ波
, 百拇医药
图2 实验组：大量高幅12—13 Hz棘节律发放，较多高幅尖波、尖-慢波、棘波、棘-慢波。
讨论
1 本实验采用经眼电刺激建立癫闲模型，通过对行为变化观察和脑电图的监测，证明此实验可以建立慢性癫痫模型。该方法与目前国内外慢性癫痫造模方法相比[2]具有以下特点：
1.1 造模方法简便、时间短、成本低，适用各层次科研单位。对脑组织无损伤，避免了直接在脑组织上造模而致的脑神经元的病理损伤，有利于神经生化和形态结构方面研究。
1.2 自发发作率较高，停止电刺激20d以后，尚可见90%以上动物有1—5级自发发作， 且有典型痫样放电，说明该模型具有较高的可靠性及稳定性，更加接近人类癫痫的自发发作，且该模型自发发作及痫样放电能保留较长时间，更有利于研究者系统的观察抗痫的药物作用，客观地评价抗痫的疗效。同时也为癫痫病的神经生理、神经生化等基础研究提供了一个很好的研究对象。
, 百拇医药
1.3 造模后脑电的基本频率极显著变慢(与对照组比较P<0.01)，脑电基本波幅升高(与对照组比较P<0.01)，并出现大量高幅12～13 Hz棘节律发放，较多高幅尖波、尖一慢波、棘波、棘一慢波，放电的平均波幅为119±23.8 mv、最高波幅258±81.21 mv，放电的频率高达10.4±3.2次/分。因此，该模型脑电图有典型的癫样改变。
1.4 该模型自发发作多为1～3级发作，而脑电均有较典型的痫样放电，由于条件所限，我们尚未对该模型作长期观察，从已研究的结果看，是一种较理想慢性实验性癫痫模型，具有很大的推广价值。
基金项目：河南省自然基金资助项目。编号：98101
作者简介：张丽蓓，女，32岁，河南省老干部医疗康复中心主治医师，电话：0371-5955639，邮编：450003。
周友龙，男，33岁，讲师，硕士研究生，河南中医学院针灸系。主持研究省自然基金项目、省攻关项目3项，主持厅级项目2项，已获省级二等奖1项，厅级二等奖2项，发表论文20余篇。电话：0371-5965292，邮编：450003。
参考文献
[1] Dedhl RG.et al.Development and persistance of kindled seizures after repeated injections of pentylentetrazol in rats and guinea pigs.Epilepsia,1984，25(4):505.
[2] 王大仁，慕容慎行.实验性癫痫模型.福建中医学院学报，1984，18(2)：73.
(收稿日期 1999-04-28 修回日期 1999-05-18), http://www.100md.com