自体外周血干细胞采集和冷冻保存与移植后造血功能恢复的研究
作者：常伟荣 夏学鸣 吴德沛 岑建农
单位：苏州医学院附属第一医院血液科江苏省血液研究所(215006)
关键词：
江苏医药991023 自体外周血干细胞移植(APBSCT)具有造血及免疫重建快、瘤细胞污染少等优点，正被临床广泛应用。干细胞的采集和冷冻保存是移植成功的关键，只有采集到足够数量的造血干细胞并进行适当有效的冷冻保存，回输后才能获得造血重建。本科1996年12月～1998年10月，对14例恶性血液病患者进行APBSCT，造血干细胞通过程控冷冻，液氮保存，回输后全部患者造血功能得到重建，现报告如下。
材料和方法
患者：男10例，女4例，年龄15～53岁。急性非淋巴细胞白血病6例，其中M21例，M33例，M52例；急性淋巴细胞性白血病2例；恶性淋巴瘤5例；杂合型白血病1例。全部患者入净化仓前行颈内静脉留置导管。
, 百拇医药
设备：应用CS-3000plus血细胞分离机，Cryomed程控冷冻仪及液氮进行干细胞采集和冷冻保存。
冷冻保存液：
1.TCE保养液：TC199培养基9.8g，EDTA-Na22.0g，NaHCO32.0g加双蒸水至1000ml，pH6.8～7.0，正压过滤除菌，细菌、热源检测合格。
2.冷冻保存液：TCE保养液占70%，二甲亚砜(DMSO)占20%，人类同型血清占10%，使用前按上述比例配置混匀后置冰浴备用。
方法：
1.造血干细胞动员和采集：急非淋及淋巴瘤患者采用MAG方案，米妥蒽醌10mg.m-2.d-1×2天，阿糖胞苷2g.m-2.12h-1×4次，动员后待白细胞数下降至1.0×109/L以下时，皮下注射惠尔血(G-CSF)300μg，每日1次，待白细胞数开始回升时，用流式细胞仪监测CD34+细胞的量，待CD34+细胞量明显升高时，用CS-3000plus血细胞分离机采集造血干细胞，采集终点量按单个核细胞(MNC)达到(4～6)×108/kg，CD34+细胞(2～4)×106/kg。
, 百拇医药
2.造血干细胞冷冻保存：血细胞分离机采集之造血干细胞按(0.5～1.0)×108/ml细胞浓度，在超净台中分装入深低温冷冻袋，再加入等量之冷冻保存液，充分混匀后排气封口，并立即放入Cryomed程控冷冻仪内冷冻至-90℃，随后移入液氮中长期保存。
3.复苏和回输：冷冻袋从液氮中取出后，立即放入40℃恒温水浴中并不断摇晃，直至溶解，立即回输给病人，为了减少DMSO对造血干细胞的毒性，应在床边复苏解冻，并在5～10分钟内回输完毕，并取少许细胞进行CFU-GM培养，CD34+细胞检测及细胞活力检测。
结 果
一、造血干细胞采集情况：14例患者经MAG方案动员后MNC采集纯度达98%以上，一次采集CD34+细胞达到标准者11例，占79%。
二、移植后造血功能恢复情况：APBSCT患者入净化仓按预处理方案行大剂量化疗，预处理结束48小时后快速回输复苏之造血干细胞，回输过程中未见严重不良反应。14例患者移植后除1例血小板恢复时间较长外，其余造血功能均在早期得到重建，中性粒细胞大于0.5×109/L平均为11(8～29)天，血小板大于3.0×109/L平均为21(10～120)天。
, 百拇医药
讨 论
影响造血干细胞采集的因素颇多，但主要与动员方案密切相关，本组病例一次采集成功者占79%，且采集到的MNC和CD34+细胞量和国外报道基本相似。仅有个别患者经动员后未见CD34+细胞明显增高，这可能与患者对化疗不敏感或多次化疗后骨髓损伤有关。
其次影响CFU-GM存活率的因素主要来自冷冻过程中的两个因素， 即细胞从液态转为固态过程所释放出的“融解热”和冷冻过程中细胞内大块冰晶的形成，导致细胞损伤。本研究用的冷冻仪可分别测定冷冻箱内和细胞样品中的温度，当样品从液态转为固态时，细胞释放出大量融解热，此时冷冻箱内的温度可达到-45℃，但细胞内的实际温度仅-10℃左右，避免了大块冰晶的形成，从而保证了细胞较高的活力。, http://www.100md.com
单位：苏州医学院附属第一医院血液科江苏省血液研究所(215006)
关键词：
江苏医药991023 自体外周血干细胞移植(APBSCT)具有造血及免疫重建快、瘤细胞污染少等优点，正被临床广泛应用。干细胞的采集和冷冻保存是移植成功的关键，只有采集到足够数量的造血干细胞并进行适当有效的冷冻保存，回输后才能获得造血重建。本科1996年12月～1998年10月，对14例恶性血液病患者进行APBSCT，造血干细胞通过程控冷冻，液氮保存，回输后全部患者造血功能得到重建，现报告如下。
材料和方法
患者：男10例，女4例，年龄15～53岁。急性非淋巴细胞白血病6例，其中M21例，M33例，M52例；急性淋巴细胞性白血病2例；恶性淋巴瘤5例；杂合型白血病1例。全部患者入净化仓前行颈内静脉留置导管。
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设备：应用CS-3000plus血细胞分离机，Cryomed程控冷冻仪及液氮进行干细胞采集和冷冻保存。
冷冻保存液：
1.TCE保养液：TC199培养基9.8g，EDTA-Na22.0g，NaHCO32.0g加双蒸水至1000ml，pH6.8～7.0，正压过滤除菌，细菌、热源检测合格。
2.冷冻保存液：TCE保养液占70%，二甲亚砜(DMSO)占20%，人类同型血清占10%，使用前按上述比例配置混匀后置冰浴备用。
方法：
1.造血干细胞动员和采集：急非淋及淋巴瘤患者采用MAG方案，米妥蒽醌10mg.m-2.d-1×2天，阿糖胞苷2g.m-2.12h-1×4次，动员后待白细胞数下降至1.0×109/L以下时，皮下注射惠尔血(G-CSF)300μg，每日1次，待白细胞数开始回升时，用流式细胞仪监测CD34+细胞的量，待CD34+细胞量明显升高时，用CS-3000plus血细胞分离机采集造血干细胞，采集终点量按单个核细胞(MNC)达到(4～6)×108/kg，CD34+细胞(2～4)×106/kg。
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2.造血干细胞冷冻保存：血细胞分离机采集之造血干细胞按(0.5～1.0)×108/ml细胞浓度，在超净台中分装入深低温冷冻袋，再加入等量之冷冻保存液，充分混匀后排气封口，并立即放入Cryomed程控冷冻仪内冷冻至-90℃，随后移入液氮中长期保存。
3.复苏和回输：冷冻袋从液氮中取出后，立即放入40℃恒温水浴中并不断摇晃，直至溶解，立即回输给病人，为了减少DMSO对造血干细胞的毒性，应在床边复苏解冻，并在5～10分钟内回输完毕，并取少许细胞进行CFU-GM培养，CD34+细胞检测及细胞活力检测。
结 果
一、造血干细胞采集情况：14例患者经MAG方案动员后MNC采集纯度达98%以上，一次采集CD34+细胞达到标准者11例，占79%。
二、移植后造血功能恢复情况：APBSCT患者入净化仓按预处理方案行大剂量化疗，预处理结束48小时后快速回输复苏之造血干细胞，回输过程中未见严重不良反应。14例患者移植后除1例血小板恢复时间较长外，其余造血功能均在早期得到重建，中性粒细胞大于0.5×109/L平均为11(8～29)天，血小板大于3.0×109/L平均为21(10～120)天。
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影响造血干细胞采集的因素颇多，但主要与动员方案密切相关，本组病例一次采集成功者占79%，且采集到的MNC和CD34+细胞量和国外报道基本相似。仅有个别患者经动员后未见CD34+细胞明显增高，这可能与患者对化疗不敏感或多次化疗后骨髓损伤有关。
其次影响CFU-GM存活率的因素主要来自冷冻过程中的两个因素， 即细胞从液态转为固态过程所释放出的“融解热”和冷冻过程中细胞内大块冰晶的形成，导致细胞损伤。本研究用的冷冻仪可分别测定冷冻箱内和细胞样品中的温度，当样品从液态转为固态时，细胞释放出大量融解热，此时冷冻箱内的温度可达到-45℃，但细胞内的实际温度仅-10℃左右，避免了大块冰晶的形成，从而保证了细胞较高的活力。, http://www.100md.com