人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的建立
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[章卫平，等. 中国免疫学杂志，1999，15(6)：245]
建立人树突状细胞(DC)的cDNA文库，通过大规模随机测序克隆免疫新分子。方法：来源于正常人外周血的单核细胞，体外经GM-CSF和IL-4培养，扩增出高纯度的DC，抽取纯化mRNA，转录成cDNA，定向插入pSPORT2.0载体，建立人DC的cDNA质粒文库；用ABI377全自动测序仪对该文库进行同源性比较，筛选出代表未知基因EST，然后在GCG软件中进行分析，对重要的未知EST克隆其全长cDNA。结果：所扩增的DC经流式细胞仪分析高表达MHC-Ⅰ，MHC-Ⅱ，B7，CD1a和CD83等表面标志，能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的体外增殖反应；建立的DC cDNA文库92%以上克隆有平均1.6 kb大小的插入片段；从所测的12 000余条EST中筛选出代表未知基因的3 000余条，克隆到109条全长新基因，包括属于细胞因子、细胞因子受体、趋化因子和粘附分子等家族的免疫新分子，部分全长基因已在Genebank中登录。结论：成功建立了人DC的cDNA基因文库及其大规模随机测序体系，并克隆到免疫分子。, 百拇医药
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[章卫平，等. 中国免疫学杂志，1999，15(6)：245]
建立人树突状细胞(DC)的cDNA文库，通过大规模随机测序克隆免疫新分子。方法：来源于正常人外周血的单核细胞，体外经GM-CSF和IL-4培养，扩增出高纯度的DC，抽取纯化mRNA，转录成cDNA，定向插入pSPORT2.0载体，建立人DC的cDNA质粒文库；用ABI377全自动测序仪对该文库进行同源性比较，筛选出代表未知基因EST，然后在GCG软件中进行分析，对重要的未知EST克隆其全长cDNA。结果：所扩增的DC经流式细胞仪分析高表达MHC-Ⅰ，MHC-Ⅱ，B7，CD1a和CD83等表面标志，能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的体外增殖反应；建立的DC cDNA文库92%以上克隆有平均1.6 kb大小的插入片段；从所测的12 000余条EST中筛选出代表未知基因的3 000余条，克隆到109条全长新基因，包括属于细胞因子、细胞因子受体、趋化因子和粘附分子等家族的免疫新分子，部分全长基因已在Genebank中登录。结论：成功建立了人DC的cDNA基因文库及其大规模随机测序体系，并克隆到免疫分子。, 百拇医药