褪黑素减弱小鼠对吗啡的精神和身体依赖性
作者：黄 矛 周丽华 李万亥 栗志远 张晓冬 傅秋生
单位：第二军医大学药学院药理学教研室，上海，200433
关键词：褪黑素；吗啡；精神依赖；身体依赖
第二军医大学学报991013 摘要 目的：观察褪黑素(melatonin,MT)对吗啡依赖小鼠精神依赖性和身体依赖性的抑制作用。方法：用小鼠条件性位置偏爱(conditioned place preferece,CPP)模型及吗啡身体依赖进行观察。结果：单纯MT组小鼠在偏爱侧(黑箱)的停留时间给药前后差异无显著性。与吗啡同时ip MT 10 mg/kg 5 d，显示出抑制吗啡精神依赖性反应的作用(P<0.01)。单次ip给药，MT 10和 20 mg/kg，或连续与吗啡一同给予MT 10和20 mg/kg,可剂量依赖地减少小鼠的跳跃次数(P<0.05)。结论：在一定的剂量范围内，MT具有抗小鼠对吗啡精神依赖和身体依赖的作用，且本身未显示精神依赖性反应。
中图分类号 R 966 文献标识码：A
Melatonin attenuated the dependence to morphine in mice
Huang Mao, Zhou Lihua, Li Wanhai, Li Zhiyuan, Zhang Xiaodong, Fu Qiusheng
(Department of Pharmacology, College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
ABSTRACT Objective: To study effects of melatonin(MT) on psychical and physical dependence induced by morphine(Mor) in mice. Methods: Effects of MT on the dependence of Mor were tested by using conditioned place preference(CPP) model and jumping test charllenged by naloxone in morphine-dependent mice. Results: MT ip 10 mg/kg(MT10) combined with sc Mor 10 mg/kg for 5 days could attenuate CPP response guided by Mor in dose-related manner (P<0.01). Jumping numbers and the number of mice jumping(P<0.05) were markly decreased when single MT 10(MT10) and 20 mg/kg(MT20), and 10(MT10) and 20 mg/kg(MT20) combined with Mor were injected. There were no significant differences between the time of pre- and post-MT in the biassed side in only MT treated. Conclusion: MT could attenuate effects of psychical and physical dependence induced by Mor, and itself psychical and physical dependence have not been expressed in the experiments.
KEY WORDS melatonin；morphine；psychical dependence；physical dependence
阿片类物质依赖是一个严重的健康问题和社会问题，现有的戒除治疗方法仍不太理想，有必要加以改进。阿片类成瘾早期脱毒(detoxification)的药物治疗方法已基本解决，有美沙酮疗法，可乐定疗法及中医药疗法。脱毒后相当长时期的稽延性症状(protracted symptoms)和心理渴求(craving)，是困扰吸毒者并导致复吸(relapse)的主要原因。因此,药物治疗的研究应侧重在如何克服脱毒后的心理渴求，防止复吸[1]，即重点解决阿片类物质的精神依赖性。
褪黑素(melatonin, MT)是一种主要由松果体细胞分泌的重要激素。在生理状态下，MT对中枢神经系统的活动有抑制作用，是维持脑内稳态的重要神经递质之一。药理剂量的MT具有镇痛、镇静、诱导睡眠、免疫调节、抗癫痫、抗肿瘤和脑保护等效应以及影响学习与记忆过程[2～4]，MT可抑制吗啡(morphine hydrochloride, Mor) 依赖小鼠的身体依赖反应[5～7]。但MT能否抑制Mor的精神依赖性则尚未知晓。阿片类成瘾患者在脱毒后，存在着顽固性失眠、纳差、焦虑和关节肌肉痛等稽延性症状和心理渴求，以及免疫功能低下和神经内分泌改变，似与体内MT的作用有一定关系，因此研究MT对Mor依赖小鼠的精神和身体依赖性反应的作用, 对MT能否作为脱毒后康复治疗中的有效药物具有重要意义。
1 材料和方法
1.1 动物 昆明种雄性小鼠，6～8周龄，体质量(20±2)g，由本校实验动物中心提供。
1.2 试剂与药物 MT：美国Sigma公司产品，临用前用无水乙醇溶解，再加生理盐水配制，使乙醇的体积分数为10%。Mor：青海制药厂生产。盐酸纳洛酮(naloxone hydrochloride)：北京四环制药厂生产。
1.3 条件性位置偏爱(CPP)实验 本实验采用的CPP穿梭箱为长方形木制箱子，四壁光滑，中间用一活动挡板隔成两箱，两箱的颜色分别为黑色和白色，每箱尺寸(L×H×W)为25 cm×35 cm×20 cm。黑箱底面为金属网的粗糙面，白箱底面为光滑面，两箱之间的挡板下部正中留有一闸门(10 cm×10 cm)。木箱顶部用透明有机玻璃板盖住，可通过它观察小鼠在箱子内部的活动情况。实验全过程均在安静，温、湿度和光线相对恒定的房间里进行[8]。
小鼠随机分为6组，即生理盐水组、仅用Mor组、仅用MT 10 mg/kg(记作MT10)组、Mor+MT5组、Mor+MT10组和Mor+MT20组，每组8只。注射药物后放入白箱(伴药箱)，注射生理盐水后放入黑箱(非伴药箱)。小鼠每天上午分别皮下注射(sc) Mor 10 mg/kg，腹腔注射(ip) MT 5, 10或20 mg/kg 后放入伴药箱，下午ip生理盐水后放入非伴药箱，每次在箱内停留50 min，连续5 d，第6天不给任何药物, 将其放于CPP穿梭箱内, 观察15 min内在偏爱侧(黑箱)的停留时间。实验重复2次进行。
1.4 小鼠Mor身体依赖模型[9, 10] 第1天14：00, 20：00及第2天早上8：00, 每次分别sc Mor 10 mg/kg，第2天14:00起每次增加剂量5 mg/kg, 每天增加15 mg/kg，连续6 d。第6天Mor剂量达到每天100 mg/kg，造成小鼠对Mor的显著依赖。
1.5 单次剂量MT和连续给予MT的给药方法 单次给药将小鼠随机分为6组，即生理盐水组、MT10组、Mor组、Mor+MT10组、Mor+MT20组和Mor+MT40组。连续给药将小鼠随机分为5组，即MT10+生理盐水组、Mor+生理盐水组、Mor+MT5组、Mor+MT10组和Mor+MT20组。单次给药和连续给药每组均10只小鼠。Mor给药方法如上所述。单次给予MT: 于最后一次sc Mor后5.5 h，分别ip MT；连续给予MT: 于每次sc Mor后立即ip MT5，MT10和MT20。实验重复1次。
1.6 观察指标 单次给药于最后一次sc Mor后5.5 h ip MT，30 min后ip 纳洛酮 4 mg/kg催促；连续给药于最后一次sc Mor后6 h ip 纳洛酮 4 mg/kg催促。给予纳洛酮后均立即将小鼠单只置于5 000 ml玻璃烧杯内，观察并记录纳洛酮催促后15 min内跳跃小鼠的鼠数和小鼠的跳跃次数。
1.7 统计学处理 数据以
表示，t检验。2 结 果
2.1 MT对Mor CPP的影响及本身的精神依赖性 单纯MT组小鼠在偏爱侧(黑箱)停留时间给药前后的差异无显著性。MT5(P<0.01)，MT10(P<0.05)和MT20(P<0.01)具有明显减弱Mor精神依赖作用(表1)。
表1 MT对Mor所致小鼠条件性位置偏爱形成的影响
Tab 1 Effects of MT on the development of CPP
induced by the Mor in mice (n=8,
) GroupTime in biassed side(t/min)
Pre-MT
Post-MT
Pre-post change
Saline
10.35±1.47
10.52±1.55
-0.16±1.16
Mor alone
10.12±0.74
5.02±1.45**
5.10±1.32
MT10 alone
9.47±0.82
8.24±2.14
1.12±2.02
Mor+MT5
10.29±0.54
6.73±1.85**
3.56±1.70
Mor+MT10
10.52±1.07
8.74±1.78*
1.78±2.20△△
Mor+MT20
9.95±1.88
7.22±1.14**
2.73±1.76△△
*P<0.05, **P<0.01 vs pre-MT group; △△P<0.01 vs Mor Pre-post change
2.2 MT对小鼠Mor身体依赖性的影响
2.2.1 单次给予MT对Mor所致小鼠身体依赖性的影响 单纯MT本身组小鼠跳跃次数给药前后差异无显著性。MT10和MT20可明显减少小鼠跳跃次数(P<0.05)，发生跳跃的小鼠数也减少(表2)。
表2 单次剂量MT对Mor所致小鼠身体依赖性的影响
Tab 2 Effects of single ip MT on physical
dependence induced by Mor in mice (n=10) Group
Number of
jumping(
)Incidence of
jumping(%)
Saline
0±0
0
MT10
0±0
0
Mor
27.7±28.2
90.0
Mor+MT10
2.4± 6.2*
30.0
Mor+MT20
5.2±10.7*
30.0
Mor+MT40
11.4±16.1
60.0
*P<0.05 vs Mor group
2.2.2 连续给予MT对Mor所致小鼠身体依赖性的影响 MT+Saline组小鼠跳跃次数给药前后差异无显著性。MT10和MT20可显著抑制小鼠跳跃次数(P<0.05), 发生跳跃的小鼠数也减少。表明连续给予MT有明显抑制Mor依赖小鼠身体依赖性的作用(表3)。
表3 连续给予MT对Mor所致小鼠身体依赖性的影响
Tab 3 Effects of MT with Mor on physical
dependence induced by Mor in mice (n=10) Group
Number of
jumping(
)Incidence of
jumping(%)
MT10+saline
0±0
0
Mor+saline
10.0±10.1
100.0
Mor+MT5
5.3± 9.8
30.0
Mor+MT10
2.0± 3.7*
30.0
Mor+MT20
1.0± 1.2*
50.0
*P<0.05 vs Mor+saline group
3 讨 论
MT能否作为防治阿片类物质依赖，特别是作为防治脱毒后心理渴求的有效药物，成为我们关心的主要问题。本实验首次观察了MT对Mor依赖小鼠精神依赖反应的作用，并利用小鼠跳跃实验观察了MT对Mor依赖小鼠的抑制作用。实验结果表明，在反映精神依赖性的CPP实验中，MT10和MT20可显著抑制Mor的位置偏爱作用。
在身体依赖实验中，单次给予MT和连续给予MT均能程度不同地减少小鼠跳跃次数和发生跳跃的小鼠数。但单次给予MT，MT 抑制跳跃的剂量依赖关系呈相反(表2)；单次或多次给予MT，发生跳跃反应的鼠数也是MT剂量大的反而跳跃次数多(表2和表3)，对这种结果目前我们尚难以解释。相似的是，徐贵丽等[6]在小鼠扭体模型上，以MT分别 ig 20，40和80 mg/kg的镇痛作用中，也出现中剂量MT 40 mg/kg的镇痛效果比20和80 mg/kg的更显著，并略强于ip相同剂量MT的镇痛作用。
Mor依赖小鼠的身体依赖性，主要采用阿片受体拮抗剂纳洛酮催促引起的跳跃反应来评估[9, 10]，小鼠的平均跳跃次数在一定范围内，与Mor的累积剂量或纳洛酮的激发剂量呈正相关。但创立此方法的作者[9]曾指出，同一组Mor和纳洛酮处理的小鼠，不同小鼠间跳跃次数的个体差异很大。我们以往和本文，以及国内[5, 6]、外[10]研究者均观察到这种结果，因此本文表2和表3中的小鼠平均跳跃次数的标准差较大。
我们观察到小鼠上MT具有抑制Mor精神依赖和减弱Mor身体依赖的作用，且本身未显示依赖性。魏伟等[5]用MT 30和90 mg/kg连续ig 7 d可明显使Mor组小鼠的痛阈下降，跳跃次数减少。用热板法测痛阈实验[7]表明：ig 80 mg/kg MT 1 h后可使小鼠痛阈提高270%，小鼠跳跃反应和小鼠竖尾实验未见MT对小鼠有致身体依赖性作用。徐贵丽等[6]观察到MT无论单剂量还是多剂量均可显著地抑制戒断后引起的腹泻。这些结果提示MT本身未显示耐受性和身体依赖性。
总结本文的实验结果，MT在实验剂量下具有抑制和减弱阿片类物质Mor依赖性的作用，尤其是抑制或减弱精神依赖性的作用更值得进一步的深入研究，希望有可能成为一种本身不具依赖性的新型防治阿片类物质精神依赖的药物。
文章编号：0258-879X(1999)10-0749-03
参考文献
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(1999-07-23收稿, 1999-09-21修回)