介绍一种观察组织内小血管的电镜制样方法
作者：沙继宏 叶煦亭 杨向群 杨勇骥 郑 尊
单位：第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海，200433；杨向群：第二军医大学基础医学部解剖学教研室；沙继宏，男，1965年1月生，硕士，讲师
关键词：血管；电镜制样
第二军医大学学报991034 电镜观察血管标本，一般比较容易做的是游离血管，如主动脉、肾动脉或毛细血管，前者可直接取材，后者数量众多。如果要观察组织内一定直径的小血管，则比较麻烦，因为要找到一定直径的小血管不容易，用常规方法进行，工作量很大。我们摸索了一种方法，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 组织取材 拟观察的组织内血管为大鼠肾脏内直径100～200 μm的小动脉，应用灌流方法固定，固定液为4%多聚甲醛，灌流5 min后取下肾脏切成两半，继续固定，固定4 h后漂洗，用振荡切片机将组织切成50～150 μm薄片，锇酸后固定，脱水、树脂包埋剂渗透同常规处理。
1.2 树脂圆台制作 制作厚约3 mm的树脂小圆台，要求两面光滑，这样透光性好。可用塑料眼药水小瓶，剪成厚3 mm的小圈，放在载玻片上，四周用石蜡封闭，加满包埋剂，上面再用载玻片压上。加热使包埋剂聚合。
1.3 包埋及定位 组织放在树脂小圆台上，加树脂包埋，用载玻片压在组织上，以保持组织展开、平整。聚合，光镜下观察定位。加热，切割下所需观察的部位，修块，超薄切片，电镜下观察。
2 结果和讨论
电镜下每次都能观察到血管，见图1。
图1 大鼠肾脏内小动脉
内皮细胞(
)及平滑肌细胞(
)(标尺=1 μm)
该方法虽然简单，但却很实用。不过操作时也有几点小技巧：(1)小圆台两面要光滑，这样透光效果好，可清楚地观察到组织内的结构；(2)小圆台的厚度要合适，太厚了切割不易，另外透光也受影响，太薄了无法用夹子夹住进行超薄切片，需再次粘在树脂上；(3)最好用灌流固定，因为所取组织块较大，浸泡固定效果可能不太好，另外灌流固定后也有利于振荡切片，振荡切片厚度也要适宜。该方法不仅可以用于组织内血管的研究，还可以用于组织内一些特定结构的研究。
中图分类号 R 322-34 文献标识码：B
文章编号：0258-879X(1999)10-0806-01
(1999-03-10收稿，1999-07-21修回), http://www.100md.com
单位：第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海，200433；杨向群：第二军医大学基础医学部解剖学教研室；沙继宏，男，1965年1月生，硕士，讲师
关键词：血管；电镜制样
第二军医大学学报991034 电镜观察血管标本，一般比较容易做的是游离血管，如主动脉、肾动脉或毛细血管，前者可直接取材，后者数量众多。如果要观察组织内一定直径的小血管，则比较麻烦，因为要找到一定直径的小血管不容易，用常规方法进行，工作量很大。我们摸索了一种方法，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 组织取材 拟观察的组织内血管为大鼠肾脏内直径100～200 μm的小动脉，应用灌流方法固定，固定液为4%多聚甲醛，灌流5 min后取下肾脏切成两半，继续固定，固定4 h后漂洗，用振荡切片机将组织切成50～150 μm薄片，锇酸后固定，脱水、树脂包埋剂渗透同常规处理。
1.2 树脂圆台制作 制作厚约3 mm的树脂小圆台，要求两面光滑，这样透光性好。可用塑料眼药水小瓶，剪成厚3 mm的小圈，放在载玻片上，四周用石蜡封闭，加满包埋剂，上面再用载玻片压上。加热使包埋剂聚合。
1.3 包埋及定位 组织放在树脂小圆台上，加树脂包埋，用载玻片压在组织上，以保持组织展开、平整。聚合，光镜下观察定位。加热，切割下所需观察的部位，修块，超薄切片，电镜下观察。
2 结果和讨论
电镜下每次都能观察到血管，见图1。
图1 大鼠肾脏内小动脉
内皮细胞(
)及平滑肌细胞()(标尺=1 μm)该方法虽然简单，但却很实用。不过操作时也有几点小技巧：(1)小圆台两面要光滑，这样透光效果好，可清楚地观察到组织内的结构；(2)小圆台的厚度要合适，太厚了切割不易，另外透光也受影响，太薄了无法用夹子夹住进行超薄切片，需再次粘在树脂上；(3)最好用灌流固定，因为所取组织块较大，浸泡固定效果可能不太好，另外灌流固定后也有利于振荡切片，振荡切片厚度也要适宜。该方法不仅可以用于组织内血管的研究，还可以用于组织内一些特定结构的研究。
中图分类号 R 322-34 文献标识码：B
文章编号：0258-879X(1999)10-0806-01
(1999-03-10收稿，1999-07-21修回), http://www.100md.com