舌鳞癌组织中p53，p21基因蛋白的表达及生物学意义
作者：潘朝斌 黄洪章 陈伟良 李海光 王安顺
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院(510120)
关键词：舌肿瘤；癌基因蛋白；免疫组织学；蛋白质p53；蛋白质p21
广东医学991008 【摘要】 目的 研究p53，p21在舌鳞癌组织的表达及其与肿瘤分级的关系。方法 应用免疫组化SP法对54例舌鳞癌组织标本行p53，p21癌基因蛋白表达的检测。结果 舌癌组织p53，p21癌基因蛋白的阳性率分别为46.3%、61.1%；两种癌基因的阳性表达皆与组织分化程度有关(P<0.01)；p53基因的阳性表达与p21基因的阳性表达有关(P<0.05)。结论 舌鳞癌组织中具有较高的p53，p21癌基因的阳性率。p53，p21基因阳性的病例恶性程度高，p21基因与p53基因的表达存在相关关系，舌鳞癌的发生是多基因共同作用的结果。
The expressions of p53 and p21 proteins in tongue carcinoma and their significance Pan Chaobin,Huang Hongzhang, Chen Wiliang, et al.
, 百拇医药
Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, 510120
【Abstract】 Objective To study the expressions of p53 and p21 proteins in tongue carcinoma and their significance. Methods The expressions of p53 and p21 proteins in 54 cases with tongue carcinoma were determined by immunohistochemical SP method. Results The positive expressions of p53, p21 proteins in tongue carcinoma were 46.3%, 61.1%, respectively. The expressions of p53, p21 proteins were associated with histological grade of differentiation (P<0.01). The p21 protein expression was associated with p53 protein expression (P<0.05). Conclusion High positive expressions of p53 and p21 proteins are found in tongue carcinoma. Expressions of p53 and p21 proteins are valuable in determining the degree of malignancy. The occurrence of tongue carcinoma is the result of multi-oncogene mutation.
, 百拇医药
【Key words】 Protein p53/biosythesis Protein p21/biosythesis Protooncogene protein Immunohistochemistry Tongue neoplasms
目前已发现口腔鳞癌中有多种癌基因如ras,c-myc,p53等的过度表达，并与肿瘤的恶性程度有关。本研究应用免疫组化SP法对54例舌癌组织p53, p21基因的表达进行检测，以探讨两种基因蛋白的表达与其生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 一般资料 经手术及病理确诊的舌鳞组织标本54例，男性31例，女性23例，年龄33～75岁，平均50.6岁。组织病理学分级：高分化30例，中分化13例，低分化11例。
1.2 主要试剂 鼠抗人p53, p21单克隆抗体及免疫试剂盒均购自福建迈新公司。
, http://www.100md.com
1.3 免疫组化SP法 54例舌癌标本分别行下列处理：①取石蜡切片脱蜡、水化；②微波炉抗原修复(p53)；③加过氧化酶阻断内源性过氧化酶活性、漂洗；④非免疫性动物血清封闭非特异抗原；⑤单抗的孵育、漂洗；⑥加入生物素标记的二抗孵育、漂洗；⑦加链霉素生物素蛋白—过氧化物酶溶液孵育、漂洗；⑧DAB显色、复染苏木素。实验中设阴性对照和空白对照。
1.4 结果判断 p53,p21显色反应：以每张切片随机选择4个高倍镜视野，计算100个肿瘤细胞中的阳性数，取平均数，阳性细胞>5%定为染色阳性。
1.5 统计学处理 χ2检验，Fisher精确概率法。
2 结果
2.1 两种癌基因蛋白的阳性表达及相关关系 见表1。本研究p53,p21基因蛋白的阳性表达率分别是46.3%,61.1%。阳性反应产物p53蛋白主要分布在细胞核，p21蛋白主要分布于细胞浆，两者表达率之间差异有显著性(χ2=5.74,P<0.05)。
, 百拇医药
表1 p21基因的表达与p53基因表达的关系 p21
n
p53
+
-
+
21
11
22
-
33
14
7
, 百拇医药
合计
54
25
29
2.2 两种癌基因蛋白的表达与舌鳞癌组织病理学分级的关系 见表2。舌鳞癌组织中p53,p21基因的阳性表达与组织分化程度有关(p53：χ2＝11.4, P<0.01; p21:χ2=11.7, P<0.01)；且组织分化越低，p53，p21的阳性率越高。表2 两种癌基因蛋白的表达与舌鳞癌组织病理学分级的关系 组织病理
学分级
n
p53
p21
, http://www.100md.com
-
+
阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
H
30
22
8
26.7
17
13
43.3
, http://www.100md.com
M
13
5
8
61.5
3
10
76.9
L
11
2
9
81.8
1
, http://www.100md.com
10
90.9
合计
54
46.3
61.1
χ2值
11.4
11.7
P值
<0.01
<0.01
3 讨论
, http://www.100md.com
恶性肿瘤的病因发病学较为复杂，其发生为多因素、多基因共同作用的结果，癌基因、抑癌基因不仅调节着细胞的增殖、分化，同时还影响着细胞的凋亡。Ras癌基因突变及其p21蛋白的表达可引起细胞形态改变，促进细胞分裂增殖。p21蛋白的表达与某些肿瘤的发生、生物学行为及预后有密切关系，p21蛋白阳性表达者恶性程度高，预后差[1]。本研究中舌鳞癌组织p21蛋白的表达率达61.1%，与文献报道的结果相似[2]。本研究发现p21的阳性表达与组织病理学分级有关(P<0.01)。
p53是目前公认的抑癌基因，野生型p53蛋白参与DNA合成，复制的负性调控，具有抑癌功能，而突变型p53不仅失去了正常野生型p53的生长抑制作用，而且本身又具有癌基因的功能。p53基因的异常是目前发现的人类癌症中最常见和最关键的基因改变，近年来免疫组织分析发现口腔鳞癌p53蛋白的过度表达率达50%～80%。Afula等[3]的研究也发现舌癌组织p53蛋白的阳性率达51.5%，与本研究结果相似。p53基因在舌鳞癌中频发突变提示它是舌鳞癌发生过程中的一个重要环节。有作者用免疫组织检测口腔鳞癌、白斑、扁平苔藓或p53蛋白表达，结果表明p53基因突变可能发生在口腔癌恶变早期。本研究还发现p53的阳性表达与组织分化程度有关(P<0.01)。现已证实p53阳性表达与头颈癌[4]的发生、转移、生存期明显相关；p53基因蛋白的检测有于判断肿瘤的恶性程度，对评价患者的预后和指导临床治疗具有一定的意义。
, 百拇医药
在肿瘤发生发展的各个阶段，至少有两个以上功能不同的异常激活的癌基因各自发挥作用，并在时间和空间上相互配合，协同加强了细胞的癌变。本研究中的两种癌基因蛋白的阳性率平均较高，88.9%的病例(48例)至少有一种癌基因蛋白阳性表达，22.4%的病例(11例)有两种癌基因蛋白阳性表达。两种癌基因相互关系的分析发现：p21的阳性表达与p53的阳性表达有关(P<0.05)，其内在的机制目前仍未明了，需进一步研究。由上述研究推测在舌鳞癌的发生中p53基因的失活导致了细胞凋亡的抑制，同时ras基因的突变促进了细胞分裂、增殖，加上其他因素的影响，最终导致了舌鳞癌的发生。
4 参考文献
1 Jansson DS, Radosevich JA, Carney WP, et al. An immunohistochemical analysis of ras oncogene expression in epithelial neoplasms of the colon. Cancer, 1990, 65:1329
, http://www.100md.com
2 陆蔚人，张永福，蒋爱兴，等.Ras p21和p53蛋白与口鳞癌的关系.中华口腔医学杂志，1997， 32(2)：128
3 Atula S, Grenman R, Laippala P, et al. Cancer of the tongue in patients younger than 40 years, A distinct entity? Arch Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, 1996, 122(12):1313
4 Watling DL, Gown AM, Coltrera MD. Overexpression of p53 in head and neck cancer. Head Neck, 1992, 14:437, 百拇医药
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院(510120)
关键词：舌肿瘤；癌基因蛋白；免疫组织学；蛋白质p53；蛋白质p21
广东医学991008 【摘要】 目的 研究p53，p21在舌鳞癌组织的表达及其与肿瘤分级的关系。方法 应用免疫组化SP法对54例舌鳞癌组织标本行p53，p21癌基因蛋白表达的检测。结果 舌癌组织p53，p21癌基因蛋白的阳性率分别为46.3%、61.1%；两种癌基因的阳性表达皆与组织分化程度有关(P<0.01)；p53基因的阳性表达与p21基因的阳性表达有关(P<0.05)。结论 舌鳞癌组织中具有较高的p53，p21癌基因的阳性率。p53，p21基因阳性的病例恶性程度高，p21基因与p53基因的表达存在相关关系，舌鳞癌的发生是多基因共同作用的结果。
The expressions of p53 and p21 proteins in tongue carcinoma and their significance Pan Chaobin,Huang Hongzhang, Chen Wiliang, et al.
, 百拇医药
Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, 510120
【Abstract】 Objective To study the expressions of p53 and p21 proteins in tongue carcinoma and their significance. Methods The expressions of p53 and p21 proteins in 54 cases with tongue carcinoma were determined by immunohistochemical SP method. Results The positive expressions of p53, p21 proteins in tongue carcinoma were 46.3%, 61.1%, respectively. The expressions of p53, p21 proteins were associated with histological grade of differentiation (P<0.01). The p21 protein expression was associated with p53 protein expression (P<0.05). Conclusion High positive expressions of p53 and p21 proteins are found in tongue carcinoma. Expressions of p53 and p21 proteins are valuable in determining the degree of malignancy. The occurrence of tongue carcinoma is the result of multi-oncogene mutation.
, 百拇医药
【Key words】 Protein p53/biosythesis Protein p21/biosythesis Protooncogene protein Immunohistochemistry Tongue neoplasms
目前已发现口腔鳞癌中有多种癌基因如ras,c-myc,p53等的过度表达，并与肿瘤的恶性程度有关。本研究应用免疫组化SP法对54例舌癌组织p53, p21基因的表达进行检测，以探讨两种基因蛋白的表达与其生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 一般资料 经手术及病理确诊的舌鳞组织标本54例，男性31例，女性23例，年龄33～75岁，平均50.6岁。组织病理学分级：高分化30例，中分化13例，低分化11例。
1.2 主要试剂 鼠抗人p53, p21单克隆抗体及免疫试剂盒均购自福建迈新公司。
, http://www.100md.com
1.3 免疫组化SP法 54例舌癌标本分别行下列处理：①取石蜡切片脱蜡、水化；②微波炉抗原修复(p53)；③加过氧化酶阻断内源性过氧化酶活性、漂洗；④非免疫性动物血清封闭非特异抗原；⑤单抗的孵育、漂洗；⑥加入生物素标记的二抗孵育、漂洗；⑦加链霉素生物素蛋白—过氧化物酶溶液孵育、漂洗；⑧DAB显色、复染苏木素。实验中设阴性对照和空白对照。
1.4 结果判断 p53,p21显色反应：以每张切片随机选择4个高倍镜视野，计算100个肿瘤细胞中的阳性数，取平均数，阳性细胞>5%定为染色阳性。
1.5 统计学处理 χ2检验，Fisher精确概率法。
2 结果
2.1 两种癌基因蛋白的阳性表达及相关关系 见表1。本研究p53,p21基因蛋白的阳性表达率分别是46.3%,61.1%。阳性反应产物p53蛋白主要分布在细胞核，p21蛋白主要分布于细胞浆，两者表达率之间差异有显著性(χ2=5.74,P<0.05)。
, 百拇医药
表1 p21基因的表达与p53基因表达的关系 p21
n
p53
+
-
+
21
11
22
-
33
14
7
, 百拇医药
合计
54
25
29
2.2 两种癌基因蛋白的表达与舌鳞癌组织病理学分级的关系 见表2。舌鳞癌组织中p53,p21基因的阳性表达与组织分化程度有关(p53：χ2＝11.4, P<0.01; p21:χ2=11.7, P<0.01)；且组织分化越低，p53，p21的阳性率越高。表2 两种癌基因蛋白的表达与舌鳞癌组织病理学分级的关系 组织病理
学分级
n
p53
p21
, http://www.100md.com
-
+
阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
H
30
22
8
26.7
17
13
43.3
, http://www.100md.com
M
13
5
8
61.5
3
10
76.9
L
11
2
9
81.8
1
, http://www.100md.com
10
90.9
合计
54
46.3
61.1
χ2值
11.4
11.7
P值
<0.01
<0.01
3 讨论
, http://www.100md.com
恶性肿瘤的病因发病学较为复杂，其发生为多因素、多基因共同作用的结果，癌基因、抑癌基因不仅调节着细胞的增殖、分化，同时还影响着细胞的凋亡。Ras癌基因突变及其p21蛋白的表达可引起细胞形态改变，促进细胞分裂增殖。p21蛋白的表达与某些肿瘤的发生、生物学行为及预后有密切关系，p21蛋白阳性表达者恶性程度高，预后差[1]。本研究中舌鳞癌组织p21蛋白的表达率达61.1%，与文献报道的结果相似[2]。本研究发现p21的阳性表达与组织病理学分级有关(P<0.01)。
p53是目前公认的抑癌基因，野生型p53蛋白参与DNA合成，复制的负性调控，具有抑癌功能，而突变型p53不仅失去了正常野生型p53的生长抑制作用，而且本身又具有癌基因的功能。p53基因的异常是目前发现的人类癌症中最常见和最关键的基因改变，近年来免疫组织分析发现口腔鳞癌p53蛋白的过度表达率达50%～80%。Afula等[3]的研究也发现舌癌组织p53蛋白的阳性率达51.5%，与本研究结果相似。p53基因在舌鳞癌中频发突变提示它是舌鳞癌发生过程中的一个重要环节。有作者用免疫组织检测口腔鳞癌、白斑、扁平苔藓或p53蛋白表达，结果表明p53基因突变可能发生在口腔癌恶变早期。本研究还发现p53的阳性表达与组织分化程度有关(P<0.01)。现已证实p53阳性表达与头颈癌[4]的发生、转移、生存期明显相关；p53基因蛋白的检测有于判断肿瘤的恶性程度，对评价患者的预后和指导临床治疗具有一定的意义。
, 百拇医药
在肿瘤发生发展的各个阶段，至少有两个以上功能不同的异常激活的癌基因各自发挥作用，并在时间和空间上相互配合，协同加强了细胞的癌变。本研究中的两种癌基因蛋白的阳性率平均较高，88.9%的病例(48例)至少有一种癌基因蛋白阳性表达，22.4%的病例(11例)有两种癌基因蛋白阳性表达。两种癌基因相互关系的分析发现：p21的阳性表达与p53的阳性表达有关(P<0.05)，其内在的机制目前仍未明了，需进一步研究。由上述研究推测在舌鳞癌的发生中p53基因的失活导致了细胞凋亡的抑制，同时ras基因的突变促进了细胞分裂、增殖，加上其他因素的影响，最终导致了舌鳞癌的发生。
4 参考文献
1 Jansson DS, Radosevich JA, Carney WP, et al. An immunohistochemical analysis of ras oncogene expression in epithelial neoplasms of the colon. Cancer, 1990, 65:1329
, http://www.100md.com
2 陆蔚人，张永福，蒋爱兴，等.Ras p21和p53蛋白与口鳞癌的关系.中华口腔医学杂志，1997， 32(2)：128
3 Atula S, Grenman R, Laippala P, et al. Cancer of the tongue in patients younger than 40 years, A distinct entity? Arch Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, 1996, 122(12):1313
4 Watling DL, Gown AM, Coltrera MD. Overexpression of p53 in head and neck cancer. Head Neck, 1992, 14:437, 百拇医药