中药复方及黄连对肺炎球菌DNA合成的抑制作用
作者：贾海骅， 王 仑， 胡海翔
单位：贾海骅(中国中医研究院基础理论研究所 北京 100700)；王 仑(北京军区总医院 北京 100700)；胡海翔(空军总院 北京 100036)
关键词：清热药 肺炎球菌；DNA合成
中国中医基础医学杂志991013 摘 要：目的 观察中药对肺炎双球菌的抑菌机理。方法 采用从大叶肺炎痰液中分离出的致病肺炎球菌进行体外DNA合成抑制试验。结果 随着清热药物浓度提高，肺炎球菌DNA合成呈下降趋势，不同中药浓度组与空白对照相比(dpm值459990.3±9301.1)有极显著差别(P<0.05)，其抑制pneumococcus DNA合成程度几乎与青霉素相同。结论 清热药物抑菌机制是通过抑制细菌的DNA合成，从而抑制致病菌的增殖生长。
肺炎双球菌为肺部感染的主要致病菌，它具有完整的荚膜，能保护细菌免受机体吞噬细胞吞噬，侵入机体后大量生长繁殖，可引起肺毛细血管扩张、充血、肺泡水肿、浆液渗出。此外，肺炎双球菌尚能产生细胞内容血素、紫斑产生因子等毒素，可引起皮肤及内脏出血，并有致死作用。肺炎双球菌也常引起脑膜炎、鼻炎、支气管炎、中耳炎、角膜溃疡等。本文适用3H-TdR细胞内掺入法对清热药物抑制肺炎双球菌DNA合成作用进行观察，以期对清热药物抑菌机制作部分说明。
, 百拇医药
材料与方法
1 材料
3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)购自中国原子能研究院同位素研究所。致病肺炎双球菌，由中国医学科学院微生物研究所分离培养。中药制剂由石家庄中药一厂提供。其他试剂为常用市售生化试剂。液体闪烁记数仪为LKB—2000型。
2 方法
2.1 致病肺炎双球菌分离
从大叶肺炎痰液中分离筛选出单一菌株pneumococcus,经EPEC方法鉴定为毒力最强的第3亚型肺炎双球菌菌株。增菌后制成8×103cfu/ml混悬液备用。
2.2 清热方剂
, 百拇医药
泻白散：地骨皮、桑白皮、甘草；黄连解毒汤：黄连、黄芩、黄柏、栀子；单味黄连：黄连。
上述方剂分别制成生药浓度为本1g/ml的精制静脉注射液(pH7.4)(石家庄第一中药厂提供)备用。
2.3 肺炎双球菌DNA合成测定
于上述肺炎双球菌混悬液中加入1Ci/ml3H-TdR(20ci/mM),37℃温育4h，置冰浴中止掺入，4℃ 4500rpm离心15min，弃上清，肺炎双球菌用5%三绿醋酸洗3次，去除末掺入3H-TdR，每管内加入50μlHClO4及时30% H2O2100μl，80℃水浴1h，至液体清亮无气泡产生，冷至室温，加入Bu-PBD,行液闪测定dpm值。
2.4 清热药对肺炎双球菌DNA合成抑制作用观察
, 百拇医药
将上述三种不同中药制剂稀释成不同浓度，与3H-TdR同时加入肺炎双球菌混悬液中，同上述处理测定肺炎双球菌DNA合成水平。每同一药物浓度设6管平行管，以青霉素作阳性对照，同时设空白对照。
结果
三种中药制剂均能显著抑制肺炎双球菌DNA合成，各不同药物浓度组与空白对照相比(dpm值459990.3±9301.1)有极显著差别(P<0.005)。随药物浓度增加肺炎双球菌DNA合成水平呈下降趋势。三种中药抑制肺炎双球菌DNA合成能力几乎与青霉素相似。
讨论
许多清热燥湿、泻火解毒、退热药物对病原微生物有抑制作用。清热燥湿药物不仅具有抑菌作用，而且有破坏肺炎双球菌荚膜作用，具有抑菌减菌双重功效。但长期以来对清热药物的抑菌机理尚无明确认识。本实验结果表明，以黄连解毒汤为代表的清热方剂对致病肺炎双球菌具有抑制其DNA合成作用。3H-TdR为DNA合成前体，其能作为肺炎双球菌DNA合成原料，在pneumococcus增殖活跃时被摄入体内，并掺入DNA中，形成较稳定结合，此法简便易行，灵敏度高，可重复性好，并能排除许多人为因素干扰。
(收稿日期 1999-05-29 修回日期 1999-06-21), http://www.100md.com
单位：贾海骅(中国中医研究院基础理论研究所 北京 100700)；王 仑(北京军区总医院 北京 100700)；胡海翔(空军总院 北京 100036)
关键词：清热药 肺炎球菌；DNA合成
中国中医基础医学杂志991013 摘 要：目的 观察中药对肺炎双球菌的抑菌机理。方法 采用从大叶肺炎痰液中分离出的致病肺炎球菌进行体外DNA合成抑制试验。结果 随着清热药物浓度提高，肺炎球菌DNA合成呈下降趋势，不同中药浓度组与空白对照相比(dpm值459990.3±9301.1)有极显著差别(P<0.05)，其抑制pneumococcus DNA合成程度几乎与青霉素相同。结论 清热药物抑菌机制是通过抑制细菌的DNA合成，从而抑制致病菌的增殖生长。
肺炎双球菌为肺部感染的主要致病菌，它具有完整的荚膜，能保护细菌免受机体吞噬细胞吞噬，侵入机体后大量生长繁殖，可引起肺毛细血管扩张、充血、肺泡水肿、浆液渗出。此外，肺炎双球菌尚能产生细胞内容血素、紫斑产生因子等毒素，可引起皮肤及内脏出血，并有致死作用。肺炎双球菌也常引起脑膜炎、鼻炎、支气管炎、中耳炎、角膜溃疡等。本文适用3H-TdR细胞内掺入法对清热药物抑制肺炎双球菌DNA合成作用进行观察，以期对清热药物抑菌机制作部分说明。
, 百拇医药
材料与方法
1 材料
3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)购自中国原子能研究院同位素研究所。致病肺炎双球菌，由中国医学科学院微生物研究所分离培养。中药制剂由石家庄中药一厂提供。其他试剂为常用市售生化试剂。液体闪烁记数仪为LKB—2000型。
2 方法
2.1 致病肺炎双球菌分离
从大叶肺炎痰液中分离筛选出单一菌株pneumococcus,经EPEC方法鉴定为毒力最强的第3亚型肺炎双球菌菌株。增菌后制成8×103cfu/ml混悬液备用。
2.2 清热方剂
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泻白散：地骨皮、桑白皮、甘草；黄连解毒汤：黄连、黄芩、黄柏、栀子；单味黄连：黄连。
上述方剂分别制成生药浓度为本1g/ml的精制静脉注射液(pH7.4)(石家庄第一中药厂提供)备用。
2.3 肺炎双球菌DNA合成测定
于上述肺炎双球菌混悬液中加入1Ci/ml3H-TdR(20ci/mM),37℃温育4h，置冰浴中止掺入，4℃ 4500rpm离心15min，弃上清，肺炎双球菌用5%三绿醋酸洗3次，去除末掺入3H-TdR，每管内加入50μlHClO4及时30% H2O2100μl，80℃水浴1h，至液体清亮无气泡产生，冷至室温，加入Bu-PBD,行液闪测定dpm值。
2.4 清热药对肺炎双球菌DNA合成抑制作用观察
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将上述三种不同中药制剂稀释成不同浓度，与3H-TdR同时加入肺炎双球菌混悬液中，同上述处理测定肺炎双球菌DNA合成水平。每同一药物浓度设6管平行管，以青霉素作阳性对照，同时设空白对照。
结果
三种中药制剂均能显著抑制肺炎双球菌DNA合成，各不同药物浓度组与空白对照相比(dpm值459990.3±9301.1)有极显著差别(P<0.005)。随药物浓度增加肺炎双球菌DNA合成水平呈下降趋势。三种中药抑制肺炎双球菌DNA合成能力几乎与青霉素相似。
讨论
许多清热燥湿、泻火解毒、退热药物对病原微生物有抑制作用。清热燥湿药物不仅具有抑菌作用，而且有破坏肺炎双球菌荚膜作用，具有抑菌减菌双重功效。但长期以来对清热药物的抑菌机理尚无明确认识。本实验结果表明，以黄连解毒汤为代表的清热方剂对致病肺炎双球菌具有抑制其DNA合成作用。3H-TdR为DNA合成前体，其能作为肺炎双球菌DNA合成原料，在pneumococcus增殖活跃时被摄入体内，并掺入DNA中，形成较稳定结合，此法简便易行，灵敏度高，可重复性好，并能排除许多人为因素干扰。
(收稿日期 1999-05-29 修回日期 1999-06-21), http://www.100md.com