体外受精和胚胎移植技术的初步成功
作者：刘嘉茵 冒韵东 杨健之 杨乃明 傅士龙 洪 蕾 刘翠珍
单位：江苏省人民医院妇产科 邮政编码：210029 南京医科大学生殖医学重点实验室
关键词：体外受精和胚胎移植 妊娠 分娩
江苏医药991118 摘要 我院自1998年1月至1998年8月共进行了16例19个周期的取卵和体外受精，共胚胎移植(ET)17例次；获4例妊娠，其中3例临床妊娠，1例生化妊娠，临床妊娠中1例于孕70天流产；平均每周期取卵7.6个，受精率63.9%，卵裂率72.2%，每周期ET率94.7%，临床妊娠率(每取卵周期)3/19，活胎率(每取卵周期)2/19。第一例于1998年9月足月分娩一体重3000g的女婴；第二例于1999年1月足月剖宫产一体重4000g的男婴。“试管婴儿”技术在我省获得成功，标志着江苏省生殖医学辅助生育技术的水平又上了一个新的台阶。
, 百拇医药
我院妇产科和南京医科大学省生殖医学重点实验室已于1998年9月和1999年1月先后成功获得江苏省两例“试管婴儿”的足月分娩。本文报告我们在体外受精和胚胎移植技术开展初始阶段的体会。
方 法
一、病例的选择
自1998年1月至1998年6月，我们共进行了16例病人19个周期的取卵和体外受精，病人平均年龄30.5岁，不育年限平均5年，不育原因包括输卵管因素10例，子宫内膜异位症1例，卵巢因素1例，垂体衰竭1例，不明原因不孕3例。
二、控制性促超排卵方案
1.长方案 自前次月经周期的第21天起，皮下注射长效促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)诺雷德3.6mg或达必佳3.75mg。自月经周期第二天起肌肉注射促性腺激素FSH 150～225单位，每日1次，直至卵泡发育成熟。
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2.短方案(flare up) 自月经周期第2天开始，每日皮下注射短效GnRH-a达必佳0.1mg，肌肉注射促性腺激素FSH 150单位，直至卵泡发育成熟。
3.卵泡发育监测 自月经周期第8天起每天B超阴道探头观察和测量卵泡直径。自优势卵泡直径达14mm时，每日测尿LH值，监测隐匿性的LH峰值的出现。当4个卵泡直径达16mm,或3个卵泡直径达17mm，或2个卵泡直径达18mm时，肌肉注射hCG 10000单位。
三、取卵和检卵
hCG注射36小时后，在B超阴道探头的引导下，用17号取卵针(Cook公司)负压抽吸卵泡液，在解剖显微镜下迅速检出被卵丘颗粒细胞包绕的卵子，用含10%人血清的HTF培养液(美国欧文公司)洗涤后，在5%的CO2培养箱37℃孵育4～6小时。
四、精子的处理和体外受精
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1.精子处理 采用Percoll梯度离心法将精子离心洗涤后收集。
2.体外受精 将处理过的精子按每个卵子10～30万条精子的比例，采用液滴法将精子加到每个含1个卵子的HTF培养液滴中去，表面覆盖矿物油层。置5%CO2培养箱中37℃孵育培养。
3.加精后12～16小时将卵丘颗粒细胞拆去，观察卵子是否受精。在倒置显微镜下看到2个原核，判为受精[2，3]。
五、体外培养和胚胎移植
将受精卵换入含10%人血清的HTF培养液滴，在5%CO2培养箱37℃继续培养。观察受精卵发生卵裂到4～8细胞胚胎时(通常在受精后的24～48小时)，将2～4个胚胎用专用ET导管(Cook公司)移植入母亲子宫腔。移植后母亲用hCG，用黄体酮建黄体，及安胎治疗。
, 百拇医药
结 果
2例体外卵未受精；共胚胎移植(ET)17例次，共获4例妊娠，其中3例临床妊娠，1例生化妊娠。临床妊娠中1例于孕70天流产。平均每周期取卵7.6个，受精率63.9%，卵裂率72.2%，每周期ET率94.7%，临床妊娠率(每取卵周期)3/19，活胎率(每取卵周期)2/19。第1例于1998年9月足月分娩一体重3000g的女婴；第2例于1999年1月足月剖宫产一体重4000g的男婴。
讨 论
“试管婴儿”的成功标志着江苏省生殖医学领域又上了一个新的台阶。体外受精和胚胎移植是一项学术性强、对生殖内分泌的理论、临床水平、实验室操作、设备环境条件要求较高的辅助生育技术，每个技术环节对妊娠的成功率和活胎率都有重要的影响。在首批患者的治疗实践中，我们积累了一定的经验和教训。
1.促排卵方案近年来有较大的进展，从卵泡的募集到卵子的成熟，从子宫内膜的发育到黄体功能的维持，促性腺激素FSH和HMG的使用方案逐渐成熟，特别是近年来国内外普遍采用的GnRH-a的降调节处理，使大部分的促排卵周期都能获得理想的成熟卵子数，并防止早熟的隐匿性的LH峰出现。本文对大多数患者采用了GnRH-a短方案(flare up)进行促超排卵，它的优点是能够在卵泡募集阶段增加促性腺激素的水平，募集到较多的卵子数，节省FSH或HMG使用的药量，同时也能较好地抑制早熟的LH峰；但是一般的促超排卵方案对子宫内膜异位症、多囊卵巢、高龄妇女等情况不一定能够成功，促超排卵方案及促排卵药的剂量和组合需进行调整，以减少取消率，预防卵巢过度刺激综合征的发生，提高卵子的质量。
, 百拇医药
2.胚胎的体外受精和培养技术是“试管婴儿”成功的关键。目前国外较先进的培养方案，采用序贯的培养液系统，在胚胎不同的生长期内选用不同成分和配方的培养液，将胚胎培养到第5天的囊胚期，可以增加对优良胚胎的正确选择，增加胚胎的种植率和妊娠率。但这种技术对培养液和培养条件要求较高，在本文的实验过程中，当时因缺少适当的培养液和体外培养的经验，一般在4细胞阶段就进行胚胎移植，这是值得进行研究和改进的方面之一。
我们的各个技术环节还有待改进，妊娠活胎率还有待提高[5]，需要从病例的选择、促排卵方案的调整、卵泡生长的监测和调控、体外受精的条件、胚胎培养的质量、孕卵着床的环境等各个环节进行分析总结，进一步改善结果。
参 考 文 献
[1] 张丽珠.中华妇产科杂志 1993；28：472.
[2] Wolf DP,et al. In Vitro Fertilization and Embryo
, http://www.100md.com
Transfer. A manual of basic techniques. Plenum Press,New York:1988;7～206.
[3] Soules MR, et al. Infertility Evaluation and Treatment. W.B.Saunders Company， USA 1995;729～900.
[4] Edwards RG, et al. Hum Reprod 1999;14:1.
[5] Anonymous. Fertil Steril 1998;69:389.
(1999年4月3日收稿 同年8月24日修回), 百拇医药
单位：江苏省人民医院妇产科 邮政编码：210029 南京医科大学生殖医学重点实验室
关键词：体外受精和胚胎移植 妊娠 分娩
江苏医药991118 摘要 我院自1998年1月至1998年8月共进行了16例19个周期的取卵和体外受精，共胚胎移植(ET)17例次；获4例妊娠，其中3例临床妊娠，1例生化妊娠，临床妊娠中1例于孕70天流产；平均每周期取卵7.6个，受精率63.9%，卵裂率72.2%，每周期ET率94.7%，临床妊娠率(每取卵周期)3/19，活胎率(每取卵周期)2/19。第一例于1998年9月足月分娩一体重3000g的女婴；第二例于1999年1月足月剖宫产一体重4000g的男婴。“试管婴儿”技术在我省获得成功，标志着江苏省生殖医学辅助生育技术的水平又上了一个新的台阶。
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我院妇产科和南京医科大学省生殖医学重点实验室已于1998年9月和1999年1月先后成功获得江苏省两例“试管婴儿”的足月分娩。本文报告我们在体外受精和胚胎移植技术开展初始阶段的体会。
方 法
一、病例的选择
自1998年1月至1998年6月，我们共进行了16例病人19个周期的取卵和体外受精，病人平均年龄30.5岁，不育年限平均5年，不育原因包括输卵管因素10例，子宫内膜异位症1例，卵巢因素1例，垂体衰竭1例，不明原因不孕3例。
二、控制性促超排卵方案
1.长方案 自前次月经周期的第21天起，皮下注射长效促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)诺雷德3.6mg或达必佳3.75mg。自月经周期第二天起肌肉注射促性腺激素FSH 150～225单位，每日1次，直至卵泡发育成熟。
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2.短方案(flare up) 自月经周期第2天开始，每日皮下注射短效GnRH-a达必佳0.1mg，肌肉注射促性腺激素FSH 150单位，直至卵泡发育成熟。
3.卵泡发育监测 自月经周期第8天起每天B超阴道探头观察和测量卵泡直径。自优势卵泡直径达14mm时，每日测尿LH值，监测隐匿性的LH峰值的出现。当4个卵泡直径达16mm,或3个卵泡直径达17mm，或2个卵泡直径达18mm时，肌肉注射hCG 10000单位。
三、取卵和检卵
hCG注射36小时后，在B超阴道探头的引导下，用17号取卵针(Cook公司)负压抽吸卵泡液，在解剖显微镜下迅速检出被卵丘颗粒细胞包绕的卵子，用含10%人血清的HTF培养液(美国欧文公司)洗涤后，在5%的CO2培养箱37℃孵育4～6小时。
四、精子的处理和体外受精
, http://www.100md.com
1.精子处理 采用Percoll梯度离心法将精子离心洗涤后收集。
2.体外受精 将处理过的精子按每个卵子10～30万条精子的比例，采用液滴法将精子加到每个含1个卵子的HTF培养液滴中去，表面覆盖矿物油层。置5%CO2培养箱中37℃孵育培养。
3.加精后12～16小时将卵丘颗粒细胞拆去，观察卵子是否受精。在倒置显微镜下看到2个原核，判为受精[2，3]。
五、体外培养和胚胎移植
将受精卵换入含10%人血清的HTF培养液滴，在5%CO2培养箱37℃继续培养。观察受精卵发生卵裂到4～8细胞胚胎时(通常在受精后的24～48小时)，将2～4个胚胎用专用ET导管(Cook公司)移植入母亲子宫腔。移植后母亲用hCG，用黄体酮建黄体，及安胎治疗。
, 百拇医药
结 果
2例体外卵未受精；共胚胎移植(ET)17例次，共获4例妊娠，其中3例临床妊娠，1例生化妊娠。临床妊娠中1例于孕70天流产。平均每周期取卵7.6个，受精率63.9%，卵裂率72.2%，每周期ET率94.7%，临床妊娠率(每取卵周期)3/19，活胎率(每取卵周期)2/19。第1例于1998年9月足月分娩一体重3000g的女婴；第2例于1999年1月足月剖宫产一体重4000g的男婴。
讨 论
“试管婴儿”的成功标志着江苏省生殖医学领域又上了一个新的台阶。体外受精和胚胎移植是一项学术性强、对生殖内分泌的理论、临床水平、实验室操作、设备环境条件要求较高的辅助生育技术，每个技术环节对妊娠的成功率和活胎率都有重要的影响。在首批患者的治疗实践中，我们积累了一定的经验和教训。
1.促排卵方案近年来有较大的进展，从卵泡的募集到卵子的成熟，从子宫内膜的发育到黄体功能的维持，促性腺激素FSH和HMG的使用方案逐渐成熟，特别是近年来国内外普遍采用的GnRH-a的降调节处理，使大部分的促排卵周期都能获得理想的成熟卵子数，并防止早熟的隐匿性的LH峰出现。本文对大多数患者采用了GnRH-a短方案(flare up)进行促超排卵，它的优点是能够在卵泡募集阶段增加促性腺激素的水平，募集到较多的卵子数，节省FSH或HMG使用的药量，同时也能较好地抑制早熟的LH峰；但是一般的促超排卵方案对子宫内膜异位症、多囊卵巢、高龄妇女等情况不一定能够成功，促超排卵方案及促排卵药的剂量和组合需进行调整，以减少取消率，预防卵巢过度刺激综合征的发生，提高卵子的质量。
, 百拇医药
2.胚胎的体外受精和培养技术是“试管婴儿”成功的关键。目前国外较先进的培养方案，采用序贯的培养液系统，在胚胎不同的生长期内选用不同成分和配方的培养液，将胚胎培养到第5天的囊胚期，可以增加对优良胚胎的正确选择，增加胚胎的种植率和妊娠率。但这种技术对培养液和培养条件要求较高，在本文的实验过程中，当时因缺少适当的培养液和体外培养的经验，一般在4细胞阶段就进行胚胎移植，这是值得进行研究和改进的方面之一。
我们的各个技术环节还有待改进，妊娠活胎率还有待提高[5]，需要从病例的选择、促排卵方案的调整、卵泡生长的监测和调控、体外受精的条件、胚胎培养的质量、孕卵着床的环境等各个环节进行分析总结，进一步改善结果。
参 考 文 献
[1] 张丽珠.中华妇产科杂志 1993；28：472.
[2] Wolf DP,et al. In Vitro Fertilization and Embryo
, http://www.100md.com
Transfer. A manual of basic techniques. Plenum Press,New York:1988;7～206.
[3] Soules MR, et al. Infertility Evaluation and Treatment. W.B.Saunders Company， USA 1995;729～900.
[4] Edwards RG, et al. Hum Reprod 1999;14:1.
[5] Anonymous. Fertil Steril 1998;69:389.
(1999年4月3日收稿 同年8月24日修回), 百拇医药