中药蛇床子水提物活性成分的研究
作者：向仁德 张新勇 韩英 夏超 殷学军 刘德祥 黄国香 王河川
单位：(向仁德 张新勇 韩英 夏超)江苏省药物研究所(南京 210009)；(殷学军 刘德祥 黄国香 王河川)兰州军区乌鲁木齐总医院临床医学研究所
关键词：蛇床子；水提物；活性成分；抗诱变
中草药991105 摘 要 从中药蛇床Cnidium monnieri (L. ) Cusson. 果实的水提物中分得9个化合物，经化学和光谱方法鉴定为蛇床子素 (osthol, Ⅰ ) 、佛手柑内酯 (bergapten, Ⅱ ) 、异虎耳草素 (isopimpinellin, Ⅲ ) 、欧芹属素乙 ( imperation, Ⅳ ) 、5-甲基尿嘧啶 ( thymine, Ⅴ ) 、6-氧嘌呤 ( hypoxanthine, Ⅵ ) 、尿嘧啶 ( uracil, Ⅶ ) 、L- ( + ) 缬氨酸 ( L- ( + ) -valine, Ⅷ ) 与苯丙氨酸 ( D-phenylalanine, Ⅸ ) 。其中Ⅴ， Ⅵ， Ⅶ， Ⅷ与Ⅸ均首次从该植物中获得。Ⅰ， Ⅱ， Ⅲ与Ⅳ显示很强的抗诱变作用。
, 百拇医药
蛇床子系伞形科蛇床属植物蛇床 Cnidum monnieri ( L.) Cusson. 的果实，是我国的传统常用中药。近几年来，我们在同协作单位合作开展蛇床子水提物抗化学致癌剂的实验研究中，发现有多种成分具有极强的抗黄曲霉素B1诱发的移码突变效应和很强的抗环磷酰胺诱发的小鼠染色体损伤和染红细胞微核效应。其中一成分可使环磷酰胺诱发的染色畸变率和多染红细胞微核的频率下降至接近阴性对照组〔1〕。这一研究成果对研制配合癌症化疗、放疗以及抗衰老药物的研究和开发方面，展现了广阔的前景。
有关蛇床子化学成分的研究已有较多的报道，但其水溶性成分的系统研究至今还无人问津。为此，我们对蛇床子水提物的化学成分进行了比较深入的研究，共分得12个化合物，除3个因得量微而无法鉴定外，其它9个均通过化学和光谱法确定了结构。其中Ⅴ，Ⅵ，Ⅶ，Ⅷ与Ⅸ等 5个化合均首次从该植物中获得。
1 仪器与材料
, 百拇医药
熔点用 YANACO 微量熔点测定仪测定，温度计未经校正；UV 用岛津 UV-200 型测定； IR 用 FTS-100 型测定； MS 用 JMS-D 300 型测定；1HNMR 用 BRUKER ACF-300 型测定。柱层析和薄层层析用硅胶均为青岛海洋化工厂产品。紫外灯下观察荧光。原料药材购自江苏高淳县，并经专家鉴定。
2 提取和分离
将蛇床子果实粉碎后加水提取3 次，水提取液减压浓缩至小体积后加醇沉淀，弃去沉淀，溶液经适当浓缩后上大孔树脂柱分离，用水和不同比例的水-醇混合溶媒洗脱，各流分合并后再减压浓缩至小体积后用正丁醇萃取。正丁醇萃取液经减压浓缩后再进行硅胶柱和低压硅胶柱层析分离，并用不同比例的石油醚-醋酸乙酯溶媒系统洗脱，先后得蛇床子素 (osthol) ，佛手柑内酯 (bergapten) ，异虎耳草素 (isopimoinellin) 、欧芹属素乙 (imperatorin) ，5-甲基尿嘧啶、 (thymine) ，6-氧嘌呤 (hypoxanthine) ，尿嘧啶 (uracil) ，L-(+)-缬氨酸 (L-(+)-valine) 与苯丙氨酸 (D-phenylalanien)。
, 百拇医药
3 鉴定
Ⅰ：无色柱晶(乙醇)，mp 83℃～84℃，Rf0.639 (蓝紫色荧光)，UVλEtOHmax nm：322，258。IRνKBrmaxcm-1：2960，2900(CH3，CH2)，1715 (α，β不饱和δ-内酯)，1600，1495 (苯环)，1385 (偕甲基)。1HNMR (CDCl3)δ：1.65 (3 H，s，C5′-CH3)，1.85 (3 H，s，C4′-CH3)，3.51 (2 H，d，C1′-CH2)，3.90 (3 H，s，C7-OCH3)，5.21 (H，m，C2′-H)，6.20 (H，d，J=10 Hz，C3-H)，6.82 (H，d，J=8.5 Hz，C6-H)，7.38 (H，d，J=8.5 Hz，C5-H)，7.60 (H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：244 (M+)，229，201，132。根据理化数据和光谱分析与文献〔2〕比较，并与标准品一起测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅰ为 osthol。
, 百拇医药
Ⅱ：米黄色针晶(丙酮)，mp189 ℃～191 ℃，Rf 0.538 (草绿色荧光)。UV入EtOHmax nm：243 (肩峰)，259，268，312。IRνKBrmax cm-1：3 100～3 050 (CH)，1 720 (α，β不饱和内酯)，1 600，1 480 (苯环)。1HNMR (CDCl3)δ：4.34 (3 H，s，C5-OCH3)，6.20 (1H，d，J=10 Hz，C3-H)，7.16 (1H，s，C8-H)，7.33 (1H，d，J=8.5 Hz，C4′-H)，7.53 (1H，d，J=8.5 Hz，C5′-H)，8.30 (1H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：216 (M+)，201，188，173，145。根据理化数据和光谱分析与文献〔3〕比较，并与标准品测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅱ为 bergapten。
, 百拇医药
Ⅲ：淡黄色针晶(丙酮)，mp150 ℃～152 ℃，Rf 0.456 (棕黄色荧光)。UVλEtOHmax nm：241，248，270，313。IRνKBrmax cm-1：3 125～3 050 (CH)，1 720 (>C=O)，1582，1 470 (苯环)。1HNMR (CDCl3)δ：4.14 (6 H，s，C5，8-OCH3)，6.21 (1H，d，J=10 Hz，C3-H)，6.93 (1H，d，J=2 Hz，C4′-H)，7.56 (1H，d，J=2 Hz，C5′-H)，8.03 (1H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：246 (M+)，231，203，175，160。以上光谱数据与文献〔4〕比较，并与标准品一起测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅲ为 isopimpinellin。
, 百拇医药
Ⅳ：无色针晶(丙酮)，mp100℃～102℃，Rf0.50(黄色荧光)。UVλEtOHmax nm：244(肩峰)，249，264，300。IRνKBrmax cm-1：3120，3100，3050，1720，1580，1300。1HNMR (CDCl3)δ：1.71 (6 H，s，
，4.98 (2H，d，J=7，-OCH2)，5.56 (1H，t，-CH=)，6.29 (1H，d，J=10 Hz，C3-H)，6.78 (1H，d，J=2 Hz，C4′-H)，7.29 (1H，s，C5-H)，7.67 (1H，d，J=2 Hz，C5′-H)，7.73 (1H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：270 (M+)，202，174，146，116，69，41。以上光谱数据与文献〔4〕比较，并与标准品测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅳ为 imperatorin。
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Ⅴ：淡黄色针晶(沸水)，mp>300 ℃，UVλH2Omax nm：209，263。IRνKBrmax cm-1：3 208，3 172，3 089，3 043，2 978，1 726，1 676，1 449，1 211，813。1HNMR (DMSO-D6)δ：1.72 (3 H，s，-CH3)，7.21 (1H，s，-CH)，10.62 (1H，s，-NH)，11.04 (1H，s，-NH)。13CNMR (DMSO-D6)δ：151.6 (C2)，165.1 (C4)，107.1 (C5)，137.9 (C6)，11.9 (C7)。m/z：112 (M+)，69，55，42。以上光谱数据与 Sadtler〔4〕标准光谱一致，故确定化合物Ⅴ为 thymine。
, 百拇医药
Ⅵ：淡黄色针晶(沸水)，mp 150 ℃(分解)，UVλH2Omax nm：203，248。IRνKBrmax cm-1：3 134，1 688，1 678，1 581，1 346，1 213，790。1HNMR (DMSO-D6)δ：7.96 (1 H，s，C6-H)，8.10 (1H，s，C2-H)，12.36 (1H，s，7-NH)，13.23 (H，s，1-NH)。MS m/z：134 (M+)，109，81，54。以上测试光谱数据与 Sadtler 〔5〕标准光谱一致，故确定化合物Ⅵ为 hypoxanthine。
Ⅶ：浅黄色针晶(热水)，mp>300 ℃，UVλH2Omax nm：206.8，258.3。IRνKBrmax cm-1：3212～3100，1 713，1650，1510，1420，1 240，827，760。1HNMR (DMSO-D6)δ：5.44 (1 H，d，J=7.5 Hz，C5-H)，7.39 (1H，d，J=7.5 Hz，C6-H)，10.80，10.99 (各1H，s，-NH)。13CNMR (DMSO-D6)δ：100.3 (C5)，142.2 (C6)，151.6 (C2)，164.4 (C4)。MS m/z：112 (M+)，69，42。以上光谱数据与文献〔7〕比较，确定化合物Ⅶ为 uracil。
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Ⅷ：无色鳞片状结晶(热水)，mp>300 ℃，茚三酮反应呈阳性。UVλH2Omax nm：207.2，271.5，298.9。IRνKBrmax cm-1：2 960，2 875，2 180，1 606，1 584，1 360，1 351，843。1HNMR (D2O)δ：0.99 (3 H，m，-CH3)，1.05 (3H，m，-CH3)，2.22 (1H，m，C3-H)，3.55 (1H，d，C2-H)。以上光谱数据与 Sadtler〔8〕标准光谱一致，并与标准品测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅷ为 L-(+)-valine。
Ⅸ：无色片状结晶(热水)，mp>298 ℃(分解)，茚三酮反应呈阳性。UVλH2Omax nm：242，258，267。IRνKBrmax cm-1：3040，2100，1590，1 490，1 400，1 330，1 070，840。以上光谱数据与光谱集〔9〕所载数据一致，并与标准品对照纸层析亦相同，故确定化合物Ⅸ为 D-phenylalanine。
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基金项目：本课题为国家自然科学基金(29372053)资助项目
参考文献
1 殷学军，等.癌变*畸变*突变，1998，10(3)：133
2 陈尚齐，等.药学学报，1982，17(5)：391
3 杨秀伟，等.中草药，1993，24(10)：507
4 Lee K H, et al. J Pharm Sci, 1969,58(6):681
5 Sadtler standard spectra.UV spectra ,1972：18385 Sadtler standard spectra.IR spectra ,1971：8683 Sadtler standard spectra.1H-NMR Spectra ,1970：9394
, http://www.100md.com
6 Sadtler standard spectra.UV spectra ,1971：17763 Sadtler standard spectra.IR spectra ,1971：21138 Sadtler standard spectra.1H-NMR Spectra ,1977：27560
7 卢颖等.中国中药杂志，1972，17(8)：488
8 Sadtler standard spectre.IR spectra ,1970：453 Sadtler standard spectre.1H-NMR Spectra ,1971：10363
9 Atlas of Spectral Data and Physical Coostants for Organic Conpounds
收稿日期：1999-01-11, 百拇医药
单位：(向仁德 张新勇 韩英 夏超)江苏省药物研究所(南京 210009)；(殷学军 刘德祥 黄国香 王河川)兰州军区乌鲁木齐总医院临床医学研究所
关键词：蛇床子；水提物；活性成分；抗诱变
中草药991105 摘 要 从中药蛇床Cnidium monnieri (L. ) Cusson. 果实的水提物中分得9个化合物，经化学和光谱方法鉴定为蛇床子素 (osthol, Ⅰ ) 、佛手柑内酯 (bergapten, Ⅱ ) 、异虎耳草素 (isopimpinellin, Ⅲ ) 、欧芹属素乙 ( imperation, Ⅳ ) 、5-甲基尿嘧啶 ( thymine, Ⅴ ) 、6-氧嘌呤 ( hypoxanthine, Ⅵ ) 、尿嘧啶 ( uracil, Ⅶ ) 、L- ( + ) 缬氨酸 ( L- ( + ) -valine, Ⅷ ) 与苯丙氨酸 ( D-phenylalanine, Ⅸ ) 。其中Ⅴ， Ⅵ， Ⅶ， Ⅷ与Ⅸ均首次从该植物中获得。Ⅰ， Ⅱ， Ⅲ与Ⅳ显示很强的抗诱变作用。
, 百拇医药
蛇床子系伞形科蛇床属植物蛇床 Cnidum monnieri ( L.) Cusson. 的果实，是我国的传统常用中药。近几年来，我们在同协作单位合作开展蛇床子水提物抗化学致癌剂的实验研究中，发现有多种成分具有极强的抗黄曲霉素B1诱发的移码突变效应和很强的抗环磷酰胺诱发的小鼠染色体损伤和染红细胞微核效应。其中一成分可使环磷酰胺诱发的染色畸变率和多染红细胞微核的频率下降至接近阴性对照组〔1〕。这一研究成果对研制配合癌症化疗、放疗以及抗衰老药物的研究和开发方面，展现了广阔的前景。
有关蛇床子化学成分的研究已有较多的报道，但其水溶性成分的系统研究至今还无人问津。为此，我们对蛇床子水提物的化学成分进行了比较深入的研究，共分得12个化合物，除3个因得量微而无法鉴定外，其它9个均通过化学和光谱法确定了结构。其中Ⅴ，Ⅵ，Ⅶ，Ⅷ与Ⅸ等 5个化合均首次从该植物中获得。
1 仪器与材料
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熔点用 YANACO 微量熔点测定仪测定，温度计未经校正；UV 用岛津 UV-200 型测定； IR 用 FTS-100 型测定； MS 用 JMS-D 300 型测定；1HNMR 用 BRUKER ACF-300 型测定。柱层析和薄层层析用硅胶均为青岛海洋化工厂产品。紫外灯下观察荧光。原料药材购自江苏高淳县，并经专家鉴定。
2 提取和分离
将蛇床子果实粉碎后加水提取3 次，水提取液减压浓缩至小体积后加醇沉淀，弃去沉淀，溶液经适当浓缩后上大孔树脂柱分离，用水和不同比例的水-醇混合溶媒洗脱，各流分合并后再减压浓缩至小体积后用正丁醇萃取。正丁醇萃取液经减压浓缩后再进行硅胶柱和低压硅胶柱层析分离，并用不同比例的石油醚-醋酸乙酯溶媒系统洗脱，先后得蛇床子素 (osthol) ，佛手柑内酯 (bergapten) ，异虎耳草素 (isopimoinellin) 、欧芹属素乙 (imperatorin) ，5-甲基尿嘧啶、 (thymine) ，6-氧嘌呤 (hypoxanthine) ，尿嘧啶 (uracil) ，L-(+)-缬氨酸 (L-(+)-valine) 与苯丙氨酸 (D-phenylalanien)。
, 百拇医药
3 鉴定
Ⅰ：无色柱晶(乙醇)，mp 83℃～84℃，Rf0.639 (蓝紫色荧光)，UVλEtOHmax nm：322，258。IRνKBrmaxcm-1：2960，2900(CH3，CH2)，1715 (α，β不饱和δ-内酯)，1600，1495 (苯环)，1385 (偕甲基)。1HNMR (CDCl3)δ：1.65 (3 H，s，C5′-CH3)，1.85 (3 H，s，C4′-CH3)，3.51 (2 H，d，C1′-CH2)，3.90 (3 H，s，C7-OCH3)，5.21 (H，m，C2′-H)，6.20 (H，d，J=10 Hz，C3-H)，6.82 (H，d，J=8.5 Hz，C6-H)，7.38 (H，d，J=8.5 Hz，C5-H)，7.60 (H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：244 (M+)，229，201，132。根据理化数据和光谱分析与文献〔2〕比较，并与标准品一起测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅰ为 osthol。
, 百拇医药
Ⅱ：米黄色针晶(丙酮)，mp189 ℃～191 ℃，Rf 0.538 (草绿色荧光)。UV入EtOHmax nm：243 (肩峰)，259，268，312。IRνKBrmax cm-1：3 100～3 050 (CH)，1 720 (α，β不饱和内酯)，1 600，1 480 (苯环)。1HNMR (CDCl3)δ：4.34 (3 H，s，C5-OCH3)，6.20 (1H，d，J=10 Hz，C3-H)，7.16 (1H，s，C8-H)，7.33 (1H，d，J=8.5 Hz，C4′-H)，7.53 (1H，d，J=8.5 Hz，C5′-H)，8.30 (1H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：216 (M+)，201，188，173，145。根据理化数据和光谱分析与文献〔3〕比较，并与标准品测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅱ为 bergapten。
, 百拇医药
Ⅲ：淡黄色针晶(丙酮)，mp150 ℃～152 ℃，Rf 0.456 (棕黄色荧光)。UVλEtOHmax nm：241，248，270，313。IRνKBrmax cm-1：3 125～3 050 (CH)，1 720 (>C=O)，1582，1 470 (苯环)。1HNMR (CDCl3)δ：4.14 (6 H，s，C5，8-OCH3)，6.21 (1H，d，J=10 Hz，C3-H)，6.93 (1H，d，J=2 Hz，C4′-H)，7.56 (1H，d，J=2 Hz，C5′-H)，8.03 (1H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：246 (M+)，231，203，175，160。以上光谱数据与文献〔4〕比较，并与标准品一起测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅲ为 isopimpinellin。
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Ⅳ：无色针晶(丙酮)，mp100℃～102℃，Rf0.50(黄色荧光)。UVλEtOHmax nm：244(肩峰)，249，264，300。IRνKBrmax cm-1：3120，3100，3050，1720，1580，1300。1HNMR (CDCl3)δ：1.71 (6 H，s，
，4.98 (2H，d，J=7，-OCH2)，5.56 (1H，t，-CH=)，6.29 (1H，d，J=10 Hz，C3-H)，6.78 (1H，d，J=2 Hz，C4′-H)，7.29 (1H，s，C5-H)，7.67 (1H，d，J=2 Hz，C5′-H)，7.73 (1H，d，J=10 Hz，C4-H)。MS m/z：270 (M+)，202，174，146，116，69，41。以上光谱数据与文献〔4〕比较，并与标准品测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅳ为 imperatorin。, http://www.100md.com
Ⅴ：淡黄色针晶(沸水)，mp>300 ℃，UVλH2Omax nm：209，263。IRνKBrmax cm-1：3 208，3 172，3 089，3 043，2 978，1 726，1 676，1 449，1 211，813。1HNMR (DMSO-D6)δ：1.72 (3 H，s，-CH3)，7.21 (1H，s，-CH)，10.62 (1H，s，-NH)，11.04 (1H，s，-NH)。13CNMR (DMSO-D6)δ：151.6 (C2)，165.1 (C4)，107.1 (C5)，137.9 (C6)，11.9 (C7)。m/z：112 (M+)，69，55，42。以上光谱数据与 Sadtler〔4〕标准光谱一致，故确定化合物Ⅴ为 thymine。
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Ⅵ：淡黄色针晶(沸水)，mp 150 ℃(分解)，UVλH2Omax nm：203，248。IRνKBrmax cm-1：3 134，1 688，1 678，1 581，1 346，1 213，790。1HNMR (DMSO-D6)δ：7.96 (1 H，s，C6-H)，8.10 (1H，s，C2-H)，12.36 (1H，s，7-NH)，13.23 (H，s，1-NH)。MS m/z：134 (M+)，109，81，54。以上测试光谱数据与 Sadtler 〔5〕标准光谱一致，故确定化合物Ⅵ为 hypoxanthine。
Ⅶ：浅黄色针晶(热水)，mp>300 ℃，UVλH2Omax nm：206.8，258.3。IRνKBrmax cm-1：3212～3100，1 713，1650，1510，1420，1 240，827，760。1HNMR (DMSO-D6)δ：5.44 (1 H，d，J=7.5 Hz，C5-H)，7.39 (1H，d，J=7.5 Hz，C6-H)，10.80，10.99 (各1H，s，-NH)。13CNMR (DMSO-D6)δ：100.3 (C5)，142.2 (C6)，151.6 (C2)，164.4 (C4)。MS m/z：112 (M+)，69，42。以上光谱数据与文献〔7〕比较，确定化合物Ⅶ为 uracil。
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Ⅷ：无色鳞片状结晶(热水)，mp>300 ℃，茚三酮反应呈阳性。UVλH2Omax nm：207.2，271.5，298.9。IRνKBrmax cm-1：2 960，2 875，2 180，1 606，1 584，1 360，1 351，843。1HNMR (D2O)δ：0.99 (3 H，m，-CH3)，1.05 (3H，m，-CH3)，2.22 (1H，m，C3-H)，3.55 (1H，d，C2-H)。以上光谱数据与 Sadtler〔8〕标准光谱一致，并与标准品测混合熔点不下降，故确定化合物Ⅷ为 L-(+)-valine。
Ⅸ：无色片状结晶(热水)，mp>298 ℃(分解)，茚三酮反应呈阳性。UVλH2Omax nm：242，258，267。IRνKBrmax cm-1：3040，2100，1590，1 490，1 400，1 330，1 070，840。以上光谱数据与光谱集〔9〕所载数据一致，并与标准品对照纸层析亦相同，故确定化合物Ⅸ为 D-phenylalanine。
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基金项目：本课题为国家自然科学基金(29372053)资助项目
参考文献
1 殷学军，等.癌变*畸变*突变，1998，10(3)：133
2 陈尚齐，等.药学学报，1982，17(5)：391
3 杨秀伟，等.中草药，1993，24(10)：507
4 Lee K H, et al. J Pharm Sci, 1969,58(6):681
5 Sadtler standard spectra.UV spectra ,1972：18385 Sadtler standard spectra.IR spectra ,1971：8683 Sadtler standard spectra.1H-NMR Spectra ,1970：9394
, http://www.100md.com
6 Sadtler standard spectra.UV spectra ,1971：17763 Sadtler standard spectra.IR spectra ,1971：21138 Sadtler standard spectra.1H-NMR Spectra ,1977：27560
7 卢颖等.中国中药杂志，1972，17(8)：488
8 Sadtler standard spectre.IR spectra ,1970：453 Sadtler standard spectre.1H-NMR Spectra ,1971：10363
9 Atlas of Spectral Data and Physical Coostants for Organic Conpounds
收稿日期：1999-01-11, 百拇医药