威灵仙中挥发性成分的GC-MS分析
作者：何明 张静华 胡昌奇 蔡建国 邓修
单位：(何明 张静华 胡昌奇)上海医科大学药学院 (200032)；(蔡建国 邓修)华东理工大学
关键词：威灵仙；水蒸气蒸馏法；超临界CO2萃取；GC-MC挥发性成分
中草药991104摘 要 采用水蒸气蒸馏法和超临界CO2流体萃取技术分别从威灵仙中提取出挥发性成分，并用GC-MS联用技术对其进行了分离测定。水蒸气蒸馏提取物得率是0.15 %，测定了25个化合物，超临界提取物得率是0.4 %，测定了21个化合物。结果表明超临界技术提取效率高。该结果与我们的化学分离工作相比，没有得到我们分离的化合物，说明GC-MC的应用有其局限性。
威灵仙，为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck的根，具有祛风湿、通经络、止痛等功效〔1〕。临床上用其水蒸液作针剂，有抗炎镇痛等疗效。威灵仙中化学成分复杂，其中对皂苷的研究比较深入〔2〕，但对挥发性成分的研究，目前还未见报道。提取威灵仙挥发性成分的常规工艺是水蒸气蒸馏法，该法提取温度高，时间长，易使对湿热不稳定的挥发性成分发生变化。而超临界CO2流体萃取技术是一门高新化工分离技术，对于某些高沸点、热敏性物质的分离，有其独特的优点〔3〕。
, 百拇医药
我们用水蒸气蒸馏法和超临界CO2流体萃取技术分别从威灵仙中提取出挥发性成分，并用GC-MC联用技术对其进行了研究。水蒸气蒸馏法提取物分离鉴定了25个挥发性成分，超临界CO2流体萃取物则分离鉴定了21个挥发性成分，并用峰面积归一法测定了相对含量，并与我们水蒸液中化学分离得到的成分进行了比较。
1 材料与仪器
药材威灵仙产自辽宁，经上海医科大学药学院生药教研室潘胜利教授鉴定为 Clematis chinensis Osbeck；超临界CO2萃取装置：瑞士NOVAF公司生产的200 mL超临界流体萃取装置；气质联用仪为MD 800型，色谱柱为OV101 (30m×0.25 mm)，柱温：150 ℃停3 min，5 ℃/min 升到250 ℃，柱前压：35 MPa；进样口温度：250 ℃，离子源：EI (250 ℃)，倍增电压：350 V，电子能量：70 eV，色谱进样量：0.2 μL，载气：氦气。
, 百拇医药
2 威灵仙挥发性成分的提取
超临界CO2提取：将威灵仙粉碎后投入超临界CO2萃取釜中，萃取温度为40 ℃，萃取压力为15 MPa，经循环萃取，并保持恒温恒压2 h后分离器出口出料，得到超临界萃取的挥发性成分。
水蒸气蒸馏法提取：将威灵仙加水浸泡，然后水蒸气蒸馏，蒸馏液用乙醚萃取，得到挥发性成分。
3 GC-MS分离与鉴定
将上述得到的挥发性成分用氯仿溶解，分别进行GC-MS测定分析，并联机检索。水蒸气蒸馏提取物分离鉴定了25个挥发性成分，超临界萃取物分离鉴定了21个，分析结果列于下表1，2。
表1 水蒸气蒸馏出的挥发性成分 峰号
, http://www.100md.com 化合物名称
相对
含量(%)
1
正己酸
0.38
2
正庚酸
0.16
3
3A,4,7,7A-四氢-3A-甲基-2(3H)-苯并呋喃酮
0.19
4
, http://www.100md.com
苯乙醇
0.15
5
4-乙基苯甲醛
0.22
6
未鉴定
0.38
7
1，2，4-三乙苯
0.48
8
1-(2-羟基-5-甲苯)-乙酮
, http://www.100md.com
0.18
9
未鉴定
0.27
10
1-(2-羟基-5-苯甲醚)-乙酮
0.54
11
顺-细辛脑
0.35
12
细辛脑
0.17
, 百拇医药
13
未鉴定
3.07
14
γ-桉叶油醇
0.97
15
3H-3A,7-methanoazulene. 2,4,5,6,7,8-hexahydro-1,4,9,9-tetramethy1,3A-
0.24
16
正十四酸
0.30
, 百拇医药
17
正十五酸
1.26
18
环十六烷
0.25
19
9-烯十六酸甲酯
0.14
20
正十六酸甲酯
1.04
21
, http://www.100md.com
邻苯二甲酸丁酯
4.20
22
正十六酸
65.06
23
正十七酸
0.30
24
亚油酸甲酯
3.14
25
9，12-十八二烯酸
, 百拇医药
14.83
26
邻苯二甲酸二庚酯
0.66
27
邻苯二甲酸二-(2-乙基)丁酯
0.58
28
葵二酸二-(2-乙基)己酯
0.49
表2 超临界CO2萃取的挥发性成分 峰号
化合物名称
, 百拇医药
相对含量(%)
1
正辛酸
0.30
2
顺-四氢-5-甲基糠醇
0.27
3
香草醛
0.11
4
1-(2-羟基-4-甲氧基苯)-乙酮
0.11
, 百拇医药
5
2-甲基-6-丙基十二烷
0.05
6
未鉴定
0.11
7
顺-细辛脑
0.14
8
正十五酸
0.28
9
, http://www.100md.com
7-烯16酸甲酯
0.64
10
正十六酸
26.97
11
正十六酸乙酯
0.17
12
正十七酸
0.63
13
亚油酸甲酸
, http://www.100md.com
0.41
14
9，12-十八二烯酸
48.56
15
亚油酸乙酯
4.09
16
邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯
0.43
17
五味子素
0.43
, http://www.100md.com
18
未鉴定
2.10
19
5-烯麦角甾醇
1.91
20
豆甾醇
3.13
21
γ-谷甾醇
7.58
22
, http://www.100md.com
羽扇豆醇
0.96
23
4-烯豆甾酮
0.61
4 结果与讨论
本文首次研究报道了威灵仙中的挥发性成分。水蒸气蒸馏法提取得率为0.15 %，主要成分为有机酸、有机酸酯、苯丙素、倍半萜、酚类等，而超临界CO2萃取得率为0.4%，主要成分为有机酸、有机酸酯、苯丙素、酚类、三萜、甾醇等。2种提取方法获得的大多数成分是共同的，而超临界CO2萃取比水蒸气蒸馏可以获得更多的提取物，如三萜、甾醇等高沸点物质，这些物质在水蒸气蒸馏时很难获得。由于GS-MS中气相层析中分离条件的限制，有些组分并没有分开，尤其是超临界提取的组分多，分离情况就更差些，这就影响了组分的结构鉴定。在GC-MS分析的同时，我们从水蒸气蒸馏物中分离提到了白头翁素，异阿魏酸，齐墩果酮，β-谷甾醇，而在GC-MS分析中这些化合物都没有，这说明GC-MS分析有其局限性。究其原因除了气相色谱分离中，有些化合物没有分开，分子离子峰以及碎片离子峰混杂在一起之外，也可能由于气相中柱温为250 ℃，在该温度下有些化合物结构发生了变化。
, http://www.100md.com
基金项目：上海市科委资助项目
联系人：胡昌奇
参考文献
1 江苏新医学院编.中药大辞典.下册.上海：上海人民出版社，1975：1635
2 Kizu H, et al. Chem Pharm Bull, 1982,30:3340
3 葛发欢，等.中药材，1995，18(6)：316
收稿日期：1999-06-29, http://www.100md.com
单位：(何明 张静华 胡昌奇)上海医科大学药学院 (200032)；(蔡建国 邓修)华东理工大学
关键词：威灵仙；水蒸气蒸馏法；超临界CO2萃取；GC-MC挥发性成分
中草药991104摘 要 采用水蒸气蒸馏法和超临界CO2流体萃取技术分别从威灵仙中提取出挥发性成分，并用GC-MS联用技术对其进行了分离测定。水蒸气蒸馏提取物得率是0.15 %，测定了25个化合物，超临界提取物得率是0.4 %，测定了21个化合物。结果表明超临界技术提取效率高。该结果与我们的化学分离工作相比，没有得到我们分离的化合物，说明GC-MC的应用有其局限性。
威灵仙，为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck的根，具有祛风湿、通经络、止痛等功效〔1〕。临床上用其水蒸液作针剂，有抗炎镇痛等疗效。威灵仙中化学成分复杂，其中对皂苷的研究比较深入〔2〕，但对挥发性成分的研究，目前还未见报道。提取威灵仙挥发性成分的常规工艺是水蒸气蒸馏法，该法提取温度高，时间长，易使对湿热不稳定的挥发性成分发生变化。而超临界CO2流体萃取技术是一门高新化工分离技术，对于某些高沸点、热敏性物质的分离，有其独特的优点〔3〕。
, 百拇医药
我们用水蒸气蒸馏法和超临界CO2流体萃取技术分别从威灵仙中提取出挥发性成分，并用GC-MC联用技术对其进行了研究。水蒸气蒸馏法提取物分离鉴定了25个挥发性成分，超临界CO2流体萃取物则分离鉴定了21个挥发性成分，并用峰面积归一法测定了相对含量，并与我们水蒸液中化学分离得到的成分进行了比较。
1 材料与仪器
药材威灵仙产自辽宁，经上海医科大学药学院生药教研室潘胜利教授鉴定为 Clematis chinensis Osbeck；超临界CO2萃取装置：瑞士NOVAF公司生产的200 mL超临界流体萃取装置；气质联用仪为MD 800型，色谱柱为OV101 (30m×0.25 mm)，柱温：150 ℃停3 min，5 ℃/min 升到250 ℃，柱前压：35 MPa；进样口温度：250 ℃，离子源：EI (250 ℃)，倍增电压：350 V，电子能量：70 eV，色谱进样量：0.2 μL，载气：氦气。
, 百拇医药
2 威灵仙挥发性成分的提取
超临界CO2提取：将威灵仙粉碎后投入超临界CO2萃取釜中，萃取温度为40 ℃，萃取压力为15 MPa，经循环萃取，并保持恒温恒压2 h后分离器出口出料，得到超临界萃取的挥发性成分。
水蒸气蒸馏法提取：将威灵仙加水浸泡，然后水蒸气蒸馏，蒸馏液用乙醚萃取，得到挥发性成分。
3 GC-MS分离与鉴定
将上述得到的挥发性成分用氯仿溶解，分别进行GC-MS测定分析，并联机检索。水蒸气蒸馏提取物分离鉴定了25个挥发性成分，超临界萃取物分离鉴定了21个，分析结果列于下表1，2。
表1 水蒸气蒸馏出的挥发性成分 峰号
, http://www.100md.com 化合物名称
相对
含量(%)
1
正己酸
0.38
2
正庚酸
0.16
3
3A,4,7,7A-四氢-3A-甲基-2(3H)-苯并呋喃酮
0.19
4
, http://www.100md.com
苯乙醇
0.15
5
4-乙基苯甲醛
0.22
6
未鉴定
0.38
7
1，2，4-三乙苯
0.48
8
1-(2-羟基-5-甲苯)-乙酮
, http://www.100md.com
0.18
9
未鉴定
0.27
10
1-(2-羟基-5-苯甲醚)-乙酮
0.54
11
顺-细辛脑
0.35
12
细辛脑
0.17
, 百拇医药
13
未鉴定
3.07
14
γ-桉叶油醇
0.97
15
3H-3A,7-methanoazulene. 2,4,5,6,7,8-hexahydro-1,4,9,9-tetramethy1,3A-
0.24
16
正十四酸
0.30
, 百拇医药
17
正十五酸
1.26
18
环十六烷
0.25
19
9-烯十六酸甲酯
0.14
20
正十六酸甲酯
1.04
21
, http://www.100md.com
邻苯二甲酸丁酯
4.20
22
正十六酸
65.06
23
正十七酸
0.30
24
亚油酸甲酯
3.14
25
9，12-十八二烯酸
, 百拇医药
14.83
26
邻苯二甲酸二庚酯
0.66
27
邻苯二甲酸二-(2-乙基)丁酯
0.58
28
葵二酸二-(2-乙基)己酯
0.49
表2 超临界CO2萃取的挥发性成分 峰号
化合物名称
, 百拇医药
相对含量(%)
1
正辛酸
0.30
2
顺-四氢-5-甲基糠醇
0.27
3
香草醛
0.11
4
1-(2-羟基-4-甲氧基苯)-乙酮
0.11
, 百拇医药
5
2-甲基-6-丙基十二烷
0.05
6
未鉴定
0.11
7
顺-细辛脑
0.14
8
正十五酸
0.28
9
, http://www.100md.com
7-烯16酸甲酯
0.64
10
正十六酸
26.97
11
正十六酸乙酯
0.17
12
正十七酸
0.63
13
亚油酸甲酸
, http://www.100md.com
0.41
14
9，12-十八二烯酸
48.56
15
亚油酸乙酯
4.09
16
邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯
0.43
17
五味子素
0.43
, http://www.100md.com
18
未鉴定
2.10
19
5-烯麦角甾醇
1.91
20
豆甾醇
3.13
21
γ-谷甾醇
7.58
22
, http://www.100md.com
羽扇豆醇
0.96
23
4-烯豆甾酮
0.61
4 结果与讨论
本文首次研究报道了威灵仙中的挥发性成分。水蒸气蒸馏法提取得率为0.15 %，主要成分为有机酸、有机酸酯、苯丙素、倍半萜、酚类等，而超临界CO2萃取得率为0.4%，主要成分为有机酸、有机酸酯、苯丙素、酚类、三萜、甾醇等。2种提取方法获得的大多数成分是共同的，而超临界CO2萃取比水蒸气蒸馏可以获得更多的提取物，如三萜、甾醇等高沸点物质，这些物质在水蒸气蒸馏时很难获得。由于GS-MS中气相层析中分离条件的限制，有些组分并没有分开，尤其是超临界提取的组分多，分离情况就更差些，这就影响了组分的结构鉴定。在GC-MS分析的同时，我们从水蒸气蒸馏物中分离提到了白头翁素，异阿魏酸，齐墩果酮，β-谷甾醇，而在GC-MS分析中这些化合物都没有，这说明GC-MS分析有其局限性。究其原因除了气相色谱分离中，有些化合物没有分开，分子离子峰以及碎片离子峰混杂在一起之外，也可能由于气相中柱温为250 ℃，在该温度下有些化合物结构发生了变化。
, http://www.100md.com
基金项目：上海市科委资助项目
联系人：胡昌奇
参考文献
1 江苏新医学院编.中药大辞典.下册.上海：上海人民出版社，1975：1635
2 Kizu H, et al. Chem Pharm Bull, 1982,30:3340
3 葛发欢，等.中药材，1995，18(6)：316
收稿日期：1999-06-29, http://www.100md.com