大肠癌组织CD44v6的表达及其临床意义
作者：徐钊 张霞 房殿春 晋华源 阎晓初 王东旭
单位：徐钊 房殿春 晋华源 阎晓初 王东旭：第三军医大学附属西南医院消化内科，重庆 400038；张霞：白求恩国际和平医院特诊科，石家庄 050082
关键词：CD44v6；大肠癌；预后
第三军医大学学报991214
提要 目的：探讨血清透明质酸(HA)及大肠癌组织中CD44v6的表达对大肠癌预后的判断价值。方法：60例大肠癌患者血清HA含量采用放免法检测，大肠癌组织CD44v6的表达采用免疫组织化学ABC法。结果：60例大肠癌组织中，有CD44v6检出者45例，占75%，Dukes C、D期及有淋巴结转移者其CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期及无淋巴结转移者(P<0.01)，CD44v6的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化及类型无关；Dukes C、D期及有淋巴结转移的患者其血清HA水平明显高于Duke A、B期及无淋巴结转移的患者(P<0.01)；随着CD44v6表达增强，血清中HA水平亦逐渐增加。结论：血清中HA水平及大肠癌组织中CD44v6的表达可以作为判断大肠癌患者预后的指标。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R392.11;R735.34 文献标识码 A
文章编号：1000-5404(1999)12-0911-03
Expression of CD44v6 in colorectal cancer and its clinical significance
XU Zhao,ZHANG Xia,FANG Dian-chun,JIN Hua-yuan,YAN Xiao-chu,WANG Dong-xu
(Department of Gastroenterology,Southwest Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400038)
Abstract Objective: To explore the value of hylauronic acid (HA) in serum and CD44v6 in cancerous tissue in predicting the prognosis of colorectal cancer.Methods: The concentration of HA in serum and expression of CD44v6 in the cancerous tissue in 60 cases of colorectal cancer were determined with radioimmunological assay and immunohistochemistry respectively.Results: The expression of CD44v6 was seen in 45 out of the 60 cases.The concentration of HA in serum and expression of CD44v6 in the cancerous tissue were significantly higher in patients of Dukes stages of C and D or with lymph node metastasis than in those of Dukes stages of A and B or without lymph node metastasis (P<0.01).The concentration of HA was increased along with the enhancement of the expression of CD44v6.Conclusion: Concentration of HA and expression of CD44v6 are both important indexes for predicting prognosis of colorectal cancer.
, 百拇医药
Key words CD44v6; colorectal cancer; prognosis
CD44是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，它能与多种配体分子结合，参与细胞与细胞之间、细胞与基质之间的特异性粘附。人类CD44基因位于11号染色体短臂上，CD44基因的外显子按剪接方式不同分为标准型CD44(CD44s)及变异体CD44(CD44v)[1]。近年来许多研究发现CD44v与肿瘤细胞的生长、浸润、转移及预后密切相关。本研究采用免疫组化法检测CD44v6在大肠癌组织中的表达与临床病理指标的关系，并采用放免法检测患者血清中CD44v6的配体透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的变化，藉以探讨CD44v6在评估大肠癌患者预后中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源
60例大肠癌选自本院1997年4月至1998年1月行大肠癌根治术的病人。病例纳入标准：均经手术病理证实，无肝肾功能异常，无内分泌疾病及其它部位恶性肿瘤，无放化疗病史者。其中男37例，女23例，平均年龄56.9岁(22～76岁)。取少许手术切除的肿瘤组织常规10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，片厚5 μm。经HE染色证实高分化腺癌18例，中分化腺癌31例，低分化腺癌11例。Dukes分期：A期10例，B期22例，C期16例，D期12例。有淋巴结转移24例，无淋巴结转移36例。另外10例正常大肠组织同时进行免疫组化染色。
, 百拇医药
1.2 方法
采用免疫组化ABC法，CD44v6单克隆抗体及ABC试剂盒购自北京中山生物技术公司，以PBS代替一抗作为阴性对照，抗原经胰酶或/和微波修复后，室温下操作，切片脱蜡至水；0.3%过氧化氢阻断10 min；非免疫血清封闭10 min；一抗4°C孵育过夜；二抗孵育37°C30 min；三抗37°C30min；DAB显色，镜下观察，显出黄色颗粒后终止反应；苏木素复染，中性树胶封片。结果判定，根据染色的程度和范围分为4级：强阳性(++)：阳性细胞占整个切片的70%以上；阳性(+++)：阳性细胞占整个切片的30%～70%；弱阳性(+)：阳性细胞占整个切片的10%～30%；阴性(-)：阳性细胞占整个切片的10%以下。
1.3 HA的检测
于手术前清晨空腹抽取静脉血，室温放置2h后离心分离血清，-20°C保存备用。HA放免试剂盒购自上海海军医学研究所生物技术中心，检测严格按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
1.4 统计学处理
采用t检验及χ2检验处理相关数据，P<0.05为相差显著，P<0.01为相差非常显著。
2 结果
60例大肠癌组织中，CD44v6表达阳性者45例，占75%，而癌旁大肠粘膜及正常大肠组织未见有CD44v6表达(0/70)，两组相差非常显著(P<0.01)。CD44v6的表达与淋巴结转移及Dukes分期明显相关，有淋巴结转移组CD44v6的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01)；Dukes C、D期CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期(P<0.01),见表1。而CD44v6的表达与患者年龄、性别、分化程度和组织学类型无明显相关性(P>0.05)。
表1 大肠癌CD44v6表达与淋巴结转移
, http://www.100md.com 及Dukes分期的关系
Tab 1 Relationship between expression of CD44v6,lymph node metastasis and Dukes stage in patients with colorectal carcinoma
n
Expression of CD44v6
-～+
++～+++
Lymph node metastasis
With
24
, http://www.100md.com
7(29.1%)
17(70.9%)##
Without
36
24(66.7%)
12(33.3%)
Dukes stage
A
10
7(70.0%)
3(30.0%)
B
, 百拇医药
22
14(63.6%)
8(36.4%)
C
16
6(37.5%)
10(62.5%)**
D
12
4(33.3%)
8(66.7%)**
##：P<0.01 patients with lymph node metastasis group vs without；**：P<0.01 Dukes stage C、D vs A、B
, http://www.100md.com
HA与肿瘤大小、分化程度无明显相关性，而与Dukes分期和有无淋巴结转移明显相关，见表2。
表2 大肠癌患者血清HA与临床病理指标的关系
Tab 2 Relationship between serum HA concentration and clinicopathological parameters in patients with colorectal carcinoma
n
HA(x±s,ng/ml)
Size(cm)
>5
24
, 百拇医药 247.5±22.6
<5
36
169.4±153.2
Differentiation
Well
18
152.7±116.2
Moderate
31
216.3±214.7
Poor
, http://www.100md.com
11
246.1±214.6
Lymph node metastasis
With
36
122.4±127.7**
Without
24
323.0±209.9
Dukes stage
A
10
, 百拇医药
92.6±24.2
B
22
131.8±157.1
C
16
265.6±175.4##
D
12
340.5±240.6##
**：P<0.01 patients with lymph node metastasis group vs without;＃＃：P<0.01 Dukes stage C、D vs A、B
, http://www.100md.com
本组60例大肠癌组织中CD44v6的表达与患者血清中HA含量的关系见表3。随着组织中CD44v6表达增高，血清中HA的含量亦呈上升趋势，CD44v6强阳性表达的患者，血清中HA含量明显高于CD44v6阴性的患者(P<0.01)。
表3 大肠癌患者组织中CD44v6含量
与血清中HA含量的关系
Tab 3 Relationship between CD44v6 expression level in tissues and concentration of serum HA in patients with colorectal carcinoma Expression of CD44v6
n
Concentration of HA(x±s,ng/ml)
, 百拇医药
+++
13
324.1±228.7**
++
16
203.3±198.7
+
16
186.2±195.9
-
15
116.5±49.2
, 百拇医药 **:P<0.01 +++vs +
3 讨论
有研究表明，正常大肠上皮细胞CD44蛋白表达以CD44s为主，且局限于腺管基底部，未发现有CD44v的表达[2]。本研究亦发现正常大肠组织及癌旁大肠组织CD44v6表达阴性，同国外报道一致。本研究发现大肠癌细胞膜中存在不同程度的CD44v6的异常表达，阳性率为75%，提示CD44v6同肠癌的发生与发展可能有关。
Takeucki[3]采用Northern杂交和RT-PCR技术，检测60例结肠癌组织中CD44的表达，发现癌组织中CD44v8～v10表达明显高于癌旁组织，在结肠癌肝转移患者中，CD44v8～v10的表达明显高于无肝转移者，肝转移灶中CD44v8～v10的表达又明显高于原发灶，提示CD44v8～v10在结肠癌肝转移中可能发挥重要作用。而Wielenga[4]对不同时期结直肠癌肿瘤细胞CD44表达类型进行分类研究后发现，在结直肠癌早期，不含v6的CD44蛋白表达增加，而在肿瘤的进展期，含有v6的CD44蛋白表达增加，并在肿瘤的早期转移中起重要作用。本文采用免疫组化方法，发现CD44v6与结肠癌淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移者CD44v6表达明显高于无淋巴结转移者，并且发现CD44v6的表达与结肠癌的Dukes分期明显相关，Dukes C、D期CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期，与国外报道基本一致。本文未发现CD44v6的表达与肿瘤分化、类型及大小相关。
, 百拇医药
HA作为CD44的配体，在肿瘤转移中亦具有重要的作用。国内许洪卫等[5]的研究表明在结直肠癌患者中，Dukes C期和/或有淋巴结转移的患者，其血清HA水平明显高于Dukes A、B期和/或无淋巴结转移的患者。本研究亦发现大肠癌患者血清HA水平与患者的Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关。提示血清中HA含量与组织中CD44受体的表达水平是平行的。
以上研究表明，HA及CD44v6参与了结直肠癌的转移过程，联合检测血清HA与组织中CD44v6对于结肠癌预后的判断具有重要的意义。
作者简介：徐钊，男，1952.03.20生，陕西省乾县人，主任医师，主要从事细胞粘附分子与消化道肿瘤转移关系的临床病理研究，发表论文10余篇。电话：023(68754124)
参考文献
[1] 徐钊.CD44与消化道肿瘤转移和预后评估的研究进展[J].国外医学：临床生物化学与检验学分册，1998，19(3)：111-114.
, 百拇医药
[2] Salmi M,Gron Virta K,Soint P,et al.Regulated expression of exon v6 containing isoforms of CD44 in man: Down regulation during malignant transformation of tumors of squamocellular origin[J].J Cell Biol,1993,122(2):431-435.
[3] Takeucki K,Yamaguchi A,Urano T,et al.Expression of CD44 variant exon 8～10 in colorectal cancer and its relationship to metastasis[J].Jpn J Cancer Res,1995,86(3):292-295.
[4] Wielenga V J M,Heider K H,Offerhaus G J A,et al.Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression[J].Cancer Res,1993,53(20):4754-4759.
[5] 许洪卫，王元和，高瀚.结、直肠癌侵袭性和根治手术对血清透明质酸浓度的影响[J].解放军医学杂志，1996，21(2)：131-133.
收稿日期：1999-07-15；修回日期：1999-10-21, 百拇医药
单位：徐钊 房殿春 晋华源 阎晓初 王东旭：第三军医大学附属西南医院消化内科，重庆 400038；张霞：白求恩国际和平医院特诊科，石家庄 050082
关键词：CD44v6；大肠癌；预后
第三军医大学学报991214
提要 目的：探讨血清透明质酸(HA)及大肠癌组织中CD44v6的表达对大肠癌预后的判断价值。方法：60例大肠癌患者血清HA含量采用放免法检测，大肠癌组织CD44v6的表达采用免疫组织化学ABC法。结果：60例大肠癌组织中，有CD44v6检出者45例，占75%，Dukes C、D期及有淋巴结转移者其CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期及无淋巴结转移者(P<0.01)，CD44v6的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化及类型无关；Dukes C、D期及有淋巴结转移的患者其血清HA水平明显高于Duke A、B期及无淋巴结转移的患者(P<0.01)；随着CD44v6表达增强，血清中HA水平亦逐渐增加。结论：血清中HA水平及大肠癌组织中CD44v6的表达可以作为判断大肠癌患者预后的指标。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R392.11;R735.34 文献标识码 A
文章编号：1000-5404(1999)12-0911-03
Expression of CD44v6 in colorectal cancer and its clinical significance
XU Zhao,ZHANG Xia,FANG Dian-chun,JIN Hua-yuan,YAN Xiao-chu,WANG Dong-xu
(Department of Gastroenterology,Southwest Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400038)
Abstract Objective: To explore the value of hylauronic acid (HA) in serum and CD44v6 in cancerous tissue in predicting the prognosis of colorectal cancer.Methods: The concentration of HA in serum and expression of CD44v6 in the cancerous tissue in 60 cases of colorectal cancer were determined with radioimmunological assay and immunohistochemistry respectively.Results: The expression of CD44v6 was seen in 45 out of the 60 cases.The concentration of HA in serum and expression of CD44v6 in the cancerous tissue were significantly higher in patients of Dukes stages of C and D or with lymph node metastasis than in those of Dukes stages of A and B or without lymph node metastasis (P<0.01).The concentration of HA was increased along with the enhancement of the expression of CD44v6.Conclusion: Concentration of HA and expression of CD44v6 are both important indexes for predicting prognosis of colorectal cancer.
, 百拇医药
Key words CD44v6; colorectal cancer; prognosis
CD44是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，它能与多种配体分子结合，参与细胞与细胞之间、细胞与基质之间的特异性粘附。人类CD44基因位于11号染色体短臂上，CD44基因的外显子按剪接方式不同分为标准型CD44(CD44s)及变异体CD44(CD44v)[1]。近年来许多研究发现CD44v与肿瘤细胞的生长、浸润、转移及预后密切相关。本研究采用免疫组化法检测CD44v6在大肠癌组织中的表达与临床病理指标的关系，并采用放免法检测患者血清中CD44v6的配体透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的变化，藉以探讨CD44v6在评估大肠癌患者预后中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源
60例大肠癌选自本院1997年4月至1998年1月行大肠癌根治术的病人。病例纳入标准：均经手术病理证实，无肝肾功能异常，无内分泌疾病及其它部位恶性肿瘤，无放化疗病史者。其中男37例，女23例，平均年龄56.9岁(22～76岁)。取少许手术切除的肿瘤组织常规10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，片厚5 μm。经HE染色证实高分化腺癌18例，中分化腺癌31例，低分化腺癌11例。Dukes分期：A期10例，B期22例，C期16例，D期12例。有淋巴结转移24例，无淋巴结转移36例。另外10例正常大肠组织同时进行免疫组化染色。
, 百拇医药
1.2 方法
采用免疫组化ABC法，CD44v6单克隆抗体及ABC试剂盒购自北京中山生物技术公司，以PBS代替一抗作为阴性对照，抗原经胰酶或/和微波修复后，室温下操作，切片脱蜡至水；0.3%过氧化氢阻断10 min；非免疫血清封闭10 min；一抗4°C孵育过夜；二抗孵育37°C30 min；三抗37°C30min；DAB显色，镜下观察，显出黄色颗粒后终止反应；苏木素复染，中性树胶封片。结果判定，根据染色的程度和范围分为4级：强阳性(++)：阳性细胞占整个切片的70%以上；阳性(+++)：阳性细胞占整个切片的30%～70%；弱阳性(+)：阳性细胞占整个切片的10%～30%；阴性(-)：阳性细胞占整个切片的10%以下。
1.3 HA的检测
于手术前清晨空腹抽取静脉血，室温放置2h后离心分离血清，-20°C保存备用。HA放免试剂盒购自上海海军医学研究所生物技术中心，检测严格按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
1.4 统计学处理
采用t检验及χ2检验处理相关数据，P<0.05为相差显著，P<0.01为相差非常显著。
2 结果
60例大肠癌组织中，CD44v6表达阳性者45例，占75%，而癌旁大肠粘膜及正常大肠组织未见有CD44v6表达(0/70)，两组相差非常显著(P<0.01)。CD44v6的表达与淋巴结转移及Dukes分期明显相关，有淋巴结转移组CD44v6的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01)；Dukes C、D期CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期(P<0.01),见表1。而CD44v6的表达与患者年龄、性别、分化程度和组织学类型无明显相关性(P>0.05)。
表1 大肠癌CD44v6表达与淋巴结转移
, http://www.100md.com 及Dukes分期的关系
Tab 1 Relationship between expression of CD44v6,lymph node metastasis and Dukes stage in patients with colorectal carcinoma
n
Expression of CD44v6
-～+
++～+++
Lymph node metastasis
With
24
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7(29.1%)
17(70.9%)##
Without
36
24(66.7%)
12(33.3%)
Dukes stage
A
10
7(70.0%)
3(30.0%)
B
, 百拇医药
22
14(63.6%)
8(36.4%)
C
16
6(37.5%)
10(62.5%)**
D
12
4(33.3%)
8(66.7%)**
##：P<0.01 patients with lymph node metastasis group vs without；**：P<0.01 Dukes stage C、D vs A、B
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HA与肿瘤大小、分化程度无明显相关性，而与Dukes分期和有无淋巴结转移明显相关，见表2。
表2 大肠癌患者血清HA与临床病理指标的关系
Tab 2 Relationship between serum HA concentration and clinicopathological parameters in patients with colorectal carcinoma
n
HA(x±s,ng/ml)
Size(cm)
>5
24
, 百拇医药 247.5±22.6
<5
36
169.4±153.2
Differentiation
Well
18
152.7±116.2
Moderate
31
216.3±214.7
Poor
, http://www.100md.com
11
246.1±214.6
Lymph node metastasis
With
36
122.4±127.7**
Without
24
323.0±209.9
Dukes stage
A
10
, 百拇医药
92.6±24.2
B
22
131.8±157.1
C
16
265.6±175.4##
D
12
340.5±240.6##
**：P<0.01 patients with lymph node metastasis group vs without;＃＃：P<0.01 Dukes stage C、D vs A、B
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本组60例大肠癌组织中CD44v6的表达与患者血清中HA含量的关系见表3。随着组织中CD44v6表达增高，血清中HA的含量亦呈上升趋势，CD44v6强阳性表达的患者，血清中HA含量明显高于CD44v6阴性的患者(P<0.01)。
表3 大肠癌患者组织中CD44v6含量
与血清中HA含量的关系
Tab 3 Relationship between CD44v6 expression level in tissues and concentration of serum HA in patients with colorectal carcinoma Expression of CD44v6
n
Concentration of HA(x±s,ng/ml)
, 百拇医药
+++
13
324.1±228.7**
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16
203.3±198.7
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186.2±195.9
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15
116.5±49.2
, 百拇医药 **:P<0.01 +++vs +
3 讨论
有研究表明，正常大肠上皮细胞CD44蛋白表达以CD44s为主，且局限于腺管基底部，未发现有CD44v的表达[2]。本研究亦发现正常大肠组织及癌旁大肠组织CD44v6表达阴性，同国外报道一致。本研究发现大肠癌细胞膜中存在不同程度的CD44v6的异常表达，阳性率为75%，提示CD44v6同肠癌的发生与发展可能有关。
Takeucki[3]采用Northern杂交和RT-PCR技术，检测60例结肠癌组织中CD44的表达，发现癌组织中CD44v8～v10表达明显高于癌旁组织，在结肠癌肝转移患者中，CD44v8～v10的表达明显高于无肝转移者，肝转移灶中CD44v8～v10的表达又明显高于原发灶，提示CD44v8～v10在结肠癌肝转移中可能发挥重要作用。而Wielenga[4]对不同时期结直肠癌肿瘤细胞CD44表达类型进行分类研究后发现，在结直肠癌早期，不含v6的CD44蛋白表达增加，而在肿瘤的进展期，含有v6的CD44蛋白表达增加，并在肿瘤的早期转移中起重要作用。本文采用免疫组化方法，发现CD44v6与结肠癌淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移者CD44v6表达明显高于无淋巴结转移者，并且发现CD44v6的表达与结肠癌的Dukes分期明显相关，Dukes C、D期CD44v6的表达明显高于Dukes A、B期，与国外报道基本一致。本文未发现CD44v6的表达与肿瘤分化、类型及大小相关。
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HA作为CD44的配体，在肿瘤转移中亦具有重要的作用。国内许洪卫等[5]的研究表明在结直肠癌患者中，Dukes C期和/或有淋巴结转移的患者，其血清HA水平明显高于Dukes A、B期和/或无淋巴结转移的患者。本研究亦发现大肠癌患者血清HA水平与患者的Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关。提示血清中HA含量与组织中CD44受体的表达水平是平行的。
以上研究表明，HA及CD44v6参与了结直肠癌的转移过程，联合检测血清HA与组织中CD44v6对于结肠癌预后的判断具有重要的意义。
作者简介：徐钊，男，1952.03.20生，陕西省乾县人，主任医师，主要从事细胞粘附分子与消化道肿瘤转移关系的临床病理研究，发表论文10余篇。电话：023(68754124)
参考文献
[1] 徐钊.CD44与消化道肿瘤转移和预后评估的研究进展[J].国外医学：临床生物化学与检验学分册，1998，19(3)：111-114.
, 百拇医药
[2] Salmi M,Gron Virta K,Soint P,et al.Regulated expression of exon v6 containing isoforms of CD44 in man: Down regulation during malignant transformation of tumors of squamocellular origin[J].J Cell Biol,1993,122(2):431-435.
[3] Takeucki K,Yamaguchi A,Urano T,et al.Expression of CD44 variant exon 8～10 in colorectal cancer and its relationship to metastasis[J].Jpn J Cancer Res,1995,86(3):292-295.
[4] Wielenga V J M,Heider K H,Offerhaus G J A,et al.Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression[J].Cancer Res,1993,53(20):4754-4759.
[5] 许洪卫，王元和，高瀚.结、直肠癌侵袭性和根治手术对血清透明质酸浓度的影响[J].解放军医学杂志，1996，21(2)：131-133.
收稿日期：1999-07-15；修回日期：1999-10-21, 百拇医药