一氧化氮对大鼠胃窦肌间神经丛胆碱能神经的影响
作者：龙庆林 王振华
单位：第三军医大学附属西南医院消化内科，重庆 400038
关键词：一氧化氮；胆碱能神经；乙酰胆碱
第三军医大学学报991239
中图法分类号 R333.2 文献标识码 B
文章编号：1000-5404(1999)12-0892-01
Effects of nitric oxide on cholinergic nerves of myenteric plexus in gastric antrum of rats
一氧化氮是胃肠道主要的非胆碱能非肾上腺素能抑制性神经递质，它在胃肠道分布广泛且含量较高。形态学研究表明一氧化氮可能影响其它神经递质的释放[1]。本试验拟通过观察正常大鼠注射一氧化氮供体硝普钠后胃窦肌间神经丛内胆碱能神经变化，间接了解一氧化氮对乙酰胆碱合成的影响。
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1 材料与方法
健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，体重250～350 g，随机分为3组，每组8只：①正常对照组；②一氧化氮组，每天腹腔注射硝普钠0.5 mg/kg，3/d；③左型精氨酸甲脂(L-NAME)组，每天腹腔注射L-NAME 15 mg/kg，2/d。
4周后将各组大鼠用3%戊巴比妥钠麻醉后取出全胃，向胃内灌注适量4%的多聚甲醛液后放入固定液中固定12 h，再放入30%蔗糖液脱水。将胃窦剪成0.4 cm×0.8 cm大小的组织块，胃窦粘膜表面固定后呈绒毛状，粘膜及粘膜下层连接较紧密，可用钟表镊一块撕掉，根据平滑肌纤维走向判断出斜肌层和环肌层并依次撕去，即得到附于纵肌之上的肌间神经丛。采用Kamovsky-Root′s直接法显示胆碱能神经。
采用MD20型真彩色图像分析仪进行图像分析，于25倍物镜下每个标本随机取3～5个视野，计算阳性神经平均面密度(目标面积占统计面计的百分比)，反映阳性神经在铺片中的含量。
, 百拇医药
统计学处理采用单因素方差分析。
2 结果
光镜下，正常大鼠胃窦肌间神经丛中的胆碱能神经纤维呈“树根状”或“网状”分布，其神经节较粗，阳性神经元胞体较多；节间纤维相对细小，有少许阳性神经元散在分布。L-NAME组的胆碱能神经分布与正常组类似，而一氧化氮组胃窦肌间神经丛内胆碱能神经节更粗大，阳性神经元胞体密集，体积较大，其节间纤维也增粗。
图像分析显示，一氧化氮组胆碱能神经平均面密度为(26.75±4.72)%，正常对照组为(22.04±5.80)%，两组比较，相差显著(P<0.05)；L-NAME组为(21.17±4.00)%，与正常组比较，无显著差异。
3 讨论
一氧化氮能调控神经释放乙酰胆碱，但不同的动物和不同组织在不同实验条件下其结果不一样[2]。在胃肠道，学者们对一氧化氮是促进还是抑制乙酰胆碱释放意见不一，Katalina[3]认为一氧化氮的作用是双向的，基础状态下，一氧化氮供体明显促进豚鼠肌间神经元释放乙酰胆碱，且与浓度成正相关；局域性电刺激时，一氧化氮却抑制乙酰胆碱释放。
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本试验以大鼠为研究对象，通过观察胃窦肌间神经丛胆碱能神经含量变化间接了解乙酰胆碱的变化。注射硝普钠后，大鼠胃窦肌间神经丛内胆碱能神经节增大，胞体密集，节间束增粗；图像分析也表明一氧化氮组胆碱能神经平均面密度较正常组高，故认为一氧化氮能促进大鼠胃窦肌间神经元合成乙酰胆碱。
近来有作者认为L-NAME能抑制毒蕈受体，但如果对胆碱能神经具有阿托品样作用，乙酰胆碱合成应当增加，本实验未发现L-NAME有促进乙酰胆碱合成作用，故认为L-NAME并无抑制毒蕈受体作用，于Prast[4]结论一致。
总之，我们通过实验发现一氧化氮能促使胃窦肌间神经元合成乙酰胆碱，并认为L-NAME并无拮抗毒蕈受体作用。
作者简介：龙庆林，男，1970.10.01生，湖南省茶林县人，硕士，住院医师，主要从事消化道动力学方面的研究，发表论文3篇。电话：(023)68754114-73049
, 百拇医药
参考文献
[1] Llewellyn-smith I J, Song Z M, Costa M, et al. Ultrastructural localization of nitric oxide synthase immunoreactivity in guinea-pig enteric neurons[J]. Brain Res,1992,577(2):377-382.
[2]Mothet J, Fossier P, Tauc L, et al. Opposite action of nitric oxide on cholinergic synapses: Which pathway[J]?Proc Natl Acad Sci USA,1996,93(16):8721-8726.
[3] Katalina H, Kilbinger H. Differential effects of nitric oxide donors on basal and electrically evoked release of acetylcholine from guinea-pig myenteric neurons[J]. Br J Pharmacol,1996,118(8):2073-2078.
[4] Prast H, Fischer H, Werner E, et al. Nitric oxide modulates the release of acetylcholine in the ventral striatum of the freely moving rat[J]. Naunyn-Schmiedebergs Arch Pharmacol,1995,352(1):67-73.
收稿日期：1999-04-10；修回日期：1999-07-15, http://www.100md.com
单位：第三军医大学附属西南医院消化内科，重庆 400038
关键词：一氧化氮；胆碱能神经；乙酰胆碱
第三军医大学学报991239
中图法分类号 R333.2 文献标识码 B
文章编号：1000-5404(1999)12-0892-01
Effects of nitric oxide on cholinergic nerves of myenteric plexus in gastric antrum of rats
一氧化氮是胃肠道主要的非胆碱能非肾上腺素能抑制性神经递质，它在胃肠道分布广泛且含量较高。形态学研究表明一氧化氮可能影响其它神经递质的释放[1]。本试验拟通过观察正常大鼠注射一氧化氮供体硝普钠后胃窦肌间神经丛内胆碱能神经变化，间接了解一氧化氮对乙酰胆碱合成的影响。
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1 材料与方法
健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，体重250～350 g，随机分为3组，每组8只：①正常对照组；②一氧化氮组，每天腹腔注射硝普钠0.5 mg/kg，3/d；③左型精氨酸甲脂(L-NAME)组，每天腹腔注射L-NAME 15 mg/kg，2/d。
4周后将各组大鼠用3%戊巴比妥钠麻醉后取出全胃，向胃内灌注适量4%的多聚甲醛液后放入固定液中固定12 h，再放入30%蔗糖液脱水。将胃窦剪成0.4 cm×0.8 cm大小的组织块，胃窦粘膜表面固定后呈绒毛状，粘膜及粘膜下层连接较紧密，可用钟表镊一块撕掉，根据平滑肌纤维走向判断出斜肌层和环肌层并依次撕去，即得到附于纵肌之上的肌间神经丛。采用Kamovsky-Root′s直接法显示胆碱能神经。
采用MD20型真彩色图像分析仪进行图像分析，于25倍物镜下每个标本随机取3～5个视野，计算阳性神经平均面密度(目标面积占统计面计的百分比)，反映阳性神经在铺片中的含量。
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统计学处理采用单因素方差分析。
2 结果
光镜下，正常大鼠胃窦肌间神经丛中的胆碱能神经纤维呈“树根状”或“网状”分布，其神经节较粗，阳性神经元胞体较多；节间纤维相对细小，有少许阳性神经元散在分布。L-NAME组的胆碱能神经分布与正常组类似，而一氧化氮组胃窦肌间神经丛内胆碱能神经节更粗大，阳性神经元胞体密集，体积较大，其节间纤维也增粗。
图像分析显示，一氧化氮组胆碱能神经平均面密度为(26.75±4.72)%，正常对照组为(22.04±5.80)%，两组比较，相差显著(P<0.05)；L-NAME组为(21.17±4.00)%，与正常组比较，无显著差异。
3 讨论
一氧化氮能调控神经释放乙酰胆碱，但不同的动物和不同组织在不同实验条件下其结果不一样[2]。在胃肠道，学者们对一氧化氮是促进还是抑制乙酰胆碱释放意见不一，Katalina[3]认为一氧化氮的作用是双向的，基础状态下，一氧化氮供体明显促进豚鼠肌间神经元释放乙酰胆碱，且与浓度成正相关；局域性电刺激时，一氧化氮却抑制乙酰胆碱释放。
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本试验以大鼠为研究对象，通过观察胃窦肌间神经丛胆碱能神经含量变化间接了解乙酰胆碱的变化。注射硝普钠后，大鼠胃窦肌间神经丛内胆碱能神经节增大，胞体密集，节间束增粗；图像分析也表明一氧化氮组胆碱能神经平均面密度较正常组高，故认为一氧化氮能促进大鼠胃窦肌间神经元合成乙酰胆碱。
近来有作者认为L-NAME能抑制毒蕈受体，但如果对胆碱能神经具有阿托品样作用，乙酰胆碱合成应当增加，本实验未发现L-NAME有促进乙酰胆碱合成作用，故认为L-NAME并无抑制毒蕈受体作用，于Prast[4]结论一致。
总之，我们通过实验发现一氧化氮能促使胃窦肌间神经元合成乙酰胆碱，并认为L-NAME并无拮抗毒蕈受体作用。
作者简介：龙庆林，男，1970.10.01生，湖南省茶林县人，硕士，住院医师，主要从事消化道动力学方面的研究，发表论文3篇。电话：(023)68754114-73049
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参考文献
[1] Llewellyn-smith I J, Song Z M, Costa M, et al. Ultrastructural localization of nitric oxide synthase immunoreactivity in guinea-pig enteric neurons[J]. Brain Res,1992,577(2):377-382.
[2]Mothet J, Fossier P, Tauc L, et al. Opposite action of nitric oxide on cholinergic synapses: Which pathway[J]?Proc Natl Acad Sci USA,1996,93(16):8721-8726.
[3] Katalina H, Kilbinger H. Differential effects of nitric oxide donors on basal and electrically evoked release of acetylcholine from guinea-pig myenteric neurons[J]. Br J Pharmacol,1996,118(8):2073-2078.
[4] Prast H, Fischer H, Werner E, et al. Nitric oxide modulates the release of acetylcholine in the ventral striatum of the freely moving rat[J]. Naunyn-Schmiedebergs Arch Pharmacol,1995,352(1):67-73.
收稿日期：1999-04-10；修回日期：1999-07-15, http://www.100md.com