肝脾康胶囊药理作用研究
作者：焦柏忠 刘晓晶 吕美丽 田振坤 常存库
单位：(焦柏忠 刘晓晶 吕美丽)黑龙江省中龙医药专科研究院(哈尔滨 150080)；(田振坤 常存库)黑龙江中医药大学
关键词：肝脾康胶囊；慢性乙型肝炎；肝硬化
中草药991220 摘 要 肝脾康胶囊对鸭乙型肝炎病毒感染鸭血清 DHBV-DNA 有显著的抑制作用。能显著降低 CCl4 所致的小鼠血清谷丙转氨酶的升高，降低小鼠肝脏甘油三酯含量，提高肝糖元含量。对肝硬化模型大鼠，能降低肝硬化形成率，降低肝胶原蛋白、血清 r 球蛋白、肝脏羟脯氨酸和肝总脂含量，减轻肝脏病理变化。能提高细胞免疫功能，增加尿素蛋白质和铜蓝蛋白质合成，增加胆汁流量。
肝脾康胶囊是由黄芪、熊胆粉、三七、郁金、板蓝根等中药精制而成。具有疏肝健脾、清热活血的功效，临床用于治疗慢性乙型肝炎、肝硬化疗效显著，并对丙肝、脂肪肝、酒精肝等也具有良好的治疗效果。我们对该药的药理作用进行了实验研究。
, 百拇医药
1 实验材料
1.1 药物：肝脾康胶囊由哈尔滨市中龙肝病医药研究所提供，1.5 g 生药/g；无环鸟苷(ACV)，湖北科益公司；护肝片：黑龙江省五常制药厂；联苯双酯片：上海第十二制药厂；0.9%氯化钠注射液：哈尔滨制药六厂。
1.2 病毒：鸭乙型肝炎病毒、鸭乙型肝炎病毒 DNA(DHBV-DNA) 强阳性血清，采自上海麻鸭，-70 ℃ 保存。
1.3 实验动物：1日龄北京鸭，购自中国医学科学院药用植物研究所养鸭场；昆明系小鼠，Wistar 系大鼠均由黑龙江中医学院实验动物中心提供；新西兰种家兔，由黑龙江省兽医研究所动物中心提供。
2 方法与结果
2.1 肝脾康胶囊在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗效果
, 百拇医药
2.1.1 鸭乙型肝炎病毒感染：1日龄北京鸭，经腿胫 iv 上海麻鸭 DHBV-DNA 阳性鸭血清，每只 0.2 mL，在感染后 7 d 取血，分离血清，-70 ℃ 保存待检。
2.1.2 药物治疗试验：DHBV 感染雏鸭 7 d 后随机分组进行药物治疗试验，每组5～6只，给药组第1，2，3批均分别口服1，3，5 g/kg 肝脾康；病毒对照组(DHBV)以生理盐水代替药物；阳性对照组第1，2批均分别口服 100 mg/kg 无环鸟苷。每日2次，共10 d，在感染后第7天即用药前(T0)，用药第5天(T5)，第10天(T10)和停药后第3天(P3)自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70 ℃ 保存待检。
2.1.3 结果
①1日龄北京鸭感染 DHBV 后，3批实验感染鸭 78 只血清 DHBV-DNA 全部阳性。病毒对照组 17 只雏鸭感染后第7天 DHBV-DNA 全部阳性。感染第7，12，17和22天血清 DHBV-DNA 水平有所变动，但无显著差异，为自然波动。
, 百拇医药
②阳性药对照组第1，2批实验 DHBV 感染鸭11只，口服无环鸟苷 100 mg/kg，有明显抑制 DHBV 作用，但停药后略有反跳现象。
③肝脾康胶囊在 DHBV 感染鸭体内对鸭血清 DHBV-DNA 的影响：第1批3个剂量组中 5 g/kg 组 T10 鸭血清 HDBV-DNA OD 度与 T0 比较显著下降 (P<0.05)，与病毒对照组对比有明显的抑制作用 (P<0.01)，未见毒性反应。第2批 5 g/kg 在 T5，T10 都有显著抑制 (P<0.01 及 P<0.05)。第3批实验 5 g/kg T10 血清 DHBV-DNA 抑制38.6%，停药后 3 d 抑制 53.6%，与生理盐水对照组相比有显著和非常显著意义。
2.2 对小鼠 CCl4 肝损伤的影响：取健康昆明种小鼠70只，体重 22～24 g 雄性。随机分为7组，每组10只。其中6组分别由 sc 1% CCl4 植物油 5 mL/kg，隔日1次，共注射3次。于第3次注射 CCl4 当日开始给予药物。分别 ig 肝脾康 0.5，1.0，2.0 g/kg，护肝片 1.0 g/kg，联苯双酯片 100 mg/kg，模型对照组给予等体积生理盐水，容积为 0.5 mL/20 g，每日1次，连续 7 d，剩余1组不做任何处理作为正常对照组。末次给药后 3 h，割颈取血测定血清谷丙转氨酶，同时取适量肝组织测定甘油三酯，过氧化脂质，谷胱甘肽和谷胱甘肽-S-转移酶等生化指标。并取适量肝组织常规福尔马林液固定，石蜡切片，H.E 染色，进行组织学检查，结果见表1，2。
, 百拇医药
表1 对 CCl4 肝损伤谷丙转氨酶的影响(
±s) 组别
剂量
(g/kg)
动物数
(只)
血清谷丙
转氨酶(U)
正常对照
-
10
987±245**
, 百拇医药
模型对照
-
10
2119±524
联苯双酯
0.1
10
1473±412**
护肝片
1.0
10
1623±436**
, 百拇医药
肝脾康胶囊
0.5
10
1611±257**
1.0
10
1426±482**
2.0
10
1150±562**△
与模型对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
与护肝片组比较：△P<0.05表2 对 CCl4 肝损伤生化指标的影响(±s) 组别
剂量
(g/kg)
肝糖元含量
(μg/2 mg肝)
甘油三酯
(mg/g湿肝)
正常对照
-
24.07±2.30**
, 百拇医药
30.31±4.63**
模型对照
-
6.10±1.62
50.20±4.04
联苯双酯
0.1
15.63±2.67**
30.21±46.17**
护肝片
1.0
, 百拇医药 10.17±2.21**
28.45±6.16**
肝脾康胶囊
0.5
16.73±2.21**△△
22.45±3.14**△△
1.0
14.96±3.7**
28.21±5.82**
2.0
, http://www.100md.com
11.43±2.45**
35.27±4.66**
与模型对照组比较：**P<0.01
与护肝片组比较：△P<0.05 △△P<0.01
病理形态检查模型对照组可见 CCl4 所致典型的围绕中央静脉的小叶中心型坏死，外周可见肝细胞的混浊肿胀和气球样变及嗜酸性变等病理改变。肝脾康胶囊中、低剂量组肝细胞虽有混 浊变性，但结构完整，细胞核清晰可见；高剂量组可见肝细胞索结构完整，与肝血窦比例正常，肝细胞着色基本正常，胞核清晰。
2.3 肝脾康胶囊对 CCl4 致体外培养肝细胞损伤的保护作用：参照 Seglen 的方法，在乙醚麻醉下经大鼠门脉插管，用0.25%胰蛋白酶缓冲液循环灌流离体肝脏，分离收集肝细胞。肝细胞收获率为 1×108～4×108 个细胞/肝，台盼蓝染色计数细胞存活率为 90% 以上。用含 10% 小牛血清 RPMI 1640 干粉培养基液稀释成 5×103 个细胞/mL，接种于24孔培养板中，每孔 1 mL共40孔，细胞置 CO2 培养箱中预培养 1.5 h 后，于肝脾康胶囊组每孔加入 15% 肝脾康胶囊药物稀释液 15 mL，继续培养 2 h 后，肝脾康胶囊治疗组及模型组内加 20% CCl4 酒精溶液 15 mL，再培养 4 h，各组同时终止培养。分别取上层培养液 50 mL 测谷丙转氨酶(改良金氏法)，50 mL 测尿素氮(尿乙酰二肟法)，500 mL 测铜蓝蛋白含量(微量法)，100 μL 测丙二醛(MDA)(TBA荧光法)。肝细胞经离心去上清液，加入 4 mL 冰生理盐水，1 800 r/min 离心 1 min，制成肝细胞匀浆，分别测 MDA(TBA发光法)，总蛋白含量(Folln-酚法)及尿素氮含量。于培养板各孔底预先置一小块盖玻片，终止培养后取出，制成扫描电镜标本。
, 百拇医药
生化测定结果见表3～5。可见 CCl4 中毒肝细胞谷丙转氢酶释放明显增加，MDA 生成显著增多，尿蛋白质及铜蓝蛋白的合成明显减少。加入肝脾康胶囊药液谷丙转氨酶释放减少，MDA 生成减少，尿素蛋白质及铜蓝蛋白的合成明显增加。
表3 对培养肝细胞谷丙转氨酶释放及 MDA
生成的影响(n=10，±s) 组 别
谷丙转氨酶
悬液 MDA
细胞内 MDA
模型组
476.8±10.8**
, http://www.100md.com
0.308±0.059
18.4±6.5**
肝脾康胶囊组
421.4±11.2△△
0.206±0.078△△
8.4±3.9△△
正常对照组
421.2±10.9
0.245±0.031
11.8±2.6
与正常对照组比：*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
与模型组比：△P<0.05 △△P<0.01(下表同)表4 对 CCl4 损伤肝细胞蛋白质及铜蓝蛋白
含量的影响(n=10，±s) 组 别
总蛋白
(mg/5×108 细胞)
铜蓝蛋白
(μg/5×108 细胞)
模型组
95.6±8.6**
, 百拇医药
175.5±13.2*
肝脾康胶囊组
120.1±11.4△△
212.9±19.5△△
正常对照组
114.7±11.3
213.4±20.2
表5 对 CCl4 损伤肝细胞尿素代谢的影响
(n=10，±s) 组 别
, http://www.100md.com
悬液尿素
(μg/5×108细胞)
胞内尿素
(μg/5×108细胞)
总尿素
(μg/5×108细胞)
模型组
86.4±2.3*
17.9±4.9**
101.4±5.5**
, 百拇医药
肝脾康胶囊组
65.9±1.4△△
50.2±11.2△△
122.6±11.3△△
正常对照组
82.4±2.6
42.8±8.2
125.1±4.1
电镜下形态：①正常肝细胞膜表面绒毛致密，呈规则指状突起，纹理清楚。②CCl4 中毒细胞表面绒毛稀疏，排列紊乱，甚至绒毛完全脱失，呈光板状。③加入肝脾康胶囊后可明显减轻肝细胞膜表面的损伤。
, http://www.100md.com
2.4 肝脾康胶囊对肝硬化模型的影响：取雄性 Wistar 大鼠50只，体重 180～220 g，分为5组，即正常对照组、肝硬化对照组、联苯双酯组、护肝片组、肝脾康胶囊组，每组10只。除正常组外其余4组均采用复合病因(CCl4 高脂低蛋白膳食及饮酒等刺激)复制肝硬化模型，给药组于实验第 2 天开始 ig 给药，每日1次，共6周，剂量见表6，容积为 1 mL/100 g，正常对照组、肝硬化对照组给予等体积的生理盐水。实验第6周末处死动物。取血清做蛋白电泳，肝左叶固定于10%福尔马林液中，石蜡包埋切片，H.E 及 V.G 染色，进行组织学观察，其余肝组织留作羟脯氨酸测定。处死前收集 16 h 尿，测定尿羟脯氨酸含量。详见表6，7。表6 对肝硬化形成率的影响 组别
剂量
(g/kg)
肝纤维化程度
, 百拇医药 一 十 廿 卅
肝胶原蛋白含量
(mg/g干肝)
血清r球蛋白量
(%)
正常对照
-
10 0 0 0
18.4±0.53**
19.50±1.40*
肝硬化对照
-
, 百拇医药
0 4 3 3
33.2±3.26
20.6±0.51
联苯双酯
0.05
4 3 3 0
22.8±2.27**
18.2±0.52**
护肝片
2.0
2 3 3 2
26.3±1.51**
, 百拇医药
19.42±0.88**
肝脾康胶囊
2.0
6 3 1 0
20.4±1.91**
16.44±0.65**
与肝硬化对照比较：*P<0.05 **P<0.01表7 对尿羟脯氨酸排出量的影响(±s) 组 别
剂量
(g/kg)
, http://www.100md.com
尿羟脯氨酸含量
(μg/mL)
正常对照
-
1.92±0.31*
肝硬化对照
-
1.28±0.21
联苯双酯
0.05
1.79±0.34*
护肝片
, 百拇医药
2.0
1.94±0.72*
肝脾康胶囊
2.0
3.40±0.37*
与肝硬化对照组比较：*P<0.01
2.5 肝脾康胶囊对家兔胆汁流量的影响：取新西兰种家兔36只，体重(3±0.5) kg，雌雄不拘，随机分为6组，分别 ig 给药，给药后 1.5 h，以3%戊巴比妥钠静脉麻醉，仰卧行剑突下正中偏右全层切一6 cm 长切口，找出胆总管及十二指肠，在胆总管中段切一小口插入内径 1 mm 塑料管，结扎固定，在塑料管下连记滴装置使胆汁流量平衡 10 min，记录胆汁流量(滴/min)共60 min，结果见表8。
, http://www.100md.com
表8 对家兔胆汁流量的影响 组 别
剂量
(g/kg)
给药后(min)胆汁流量(滴)
10
20
30
40
50
60
生理盐水
-
6.12±0.30
, 百拇医药
6.34±0.22
6.75±0.40
5.36±0.25
6.00±0.30
5.70±0.22
联苯双酯
0.05
9.33±0.31
11.31±0.40
12.24±1.08
11.75±0.21
11.00±0.04
, 百拇医药
11.00±0.03
护肝片
1.0
12.30±0.42
12.47±0.51
12.00±2.35
11.25±0.42
9.00±1.40
9.50±1.03
肝脾康胶囊
2.0
14.33±1.10
, 百拇医药
14.17±1.10
13.33±1.13
13.50±0.70
12.67±1.13
10.64±1.06
1.0
14.40±0.54
13.42±0.55
12.21±0.50
11.44±0.64
11.34±0.62
12.00±0.73
, 百拇医药
0.5
12.50±0.87
12.25±1.02
12.50±1.02
10.00±1.00
11.75±1.12
10.20±2.50
2.6 对小鼠单核吞噬细胞功能的影响：取18～22 g 小鼠48只，随机分成6组，正常对照组、联苯双酯(200 mg/kg)组、护肝片(2 g/kg)组、肝脾康胶囊(4，2，1 g/kg)3个剂量组，ig 给药，每日1次，共给10 d，容积为 0.5 mL/20 g，于末次给药后 3 min，尾部 iv 印度墨汁 0.1 mL/20 g，注射后 2、10 min，分别从眼眶后静脉丛取血 20 mL，处理后测 OD 值，计算廓清指数，结果见表9。表9 对小鼠单核吞噬细胞功能的影响(±s) 组别
, 百拇医药
剂量
(g/kg)
动物数
(只)
廓清指数
(×10-3)
正常对照
-
8
5.02±0.84
联苯双酯
0.2
8
, 百拇医药
12.35±3.76**
护肝片
2
8
8.34±2.08**
肝脾康胶囊
4
8
10.23±3.43**
2
8
9.74±2.56**
, 百拇医药
1
8
9.69±3.32**
与正常对照比较：**P<0.01
3 讨论
实验结果表明，肝脾康胶囊口服 5 g/kg 组对鸭乙型肝炎病毒感染鸭血清 DHBV-DNA 有显著的抑制作用。肝脾康胶囊对 CCl4 所致小鼠肝损伤有良好的保护作用，能显著降低血清谷丙转氨酶和肝脏甘油三酯含量，增加肝糖元含量；能明显降低模型大鼠的肝硬化形成率，降低肝胶原蛋白和血清 r 球蛋白含量，增加尿羟脯氨酸含量；具有良好的增加家兔胆汁流量作用，能提高小鼠单核吞噬细胞功能。提示肝脾康胶囊具有抗乙肝病毒、修复肝损伤、抑制肝纤维化进程、利胆、增强机体免疫力等作用。这与临床用于治疗慢性乙型肝炎、肝硬化等病的效果是完全一致的，为该药的临床应用提供了可靠的药理学实验依据。
致谢：肝脾康胶囊在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒感染的实验由中国医学科学院医药生物技术研究所完成。
收稿日期：1999-08-30, http://www.100md.com
单位：(焦柏忠 刘晓晶 吕美丽)黑龙江省中龙医药专科研究院(哈尔滨 150080)；(田振坤 常存库)黑龙江中医药大学
关键词：肝脾康胶囊；慢性乙型肝炎；肝硬化
中草药991220 摘 要 肝脾康胶囊对鸭乙型肝炎病毒感染鸭血清 DHBV-DNA 有显著的抑制作用。能显著降低 CCl4 所致的小鼠血清谷丙转氨酶的升高，降低小鼠肝脏甘油三酯含量，提高肝糖元含量。对肝硬化模型大鼠，能降低肝硬化形成率，降低肝胶原蛋白、血清 r 球蛋白、肝脏羟脯氨酸和肝总脂含量，减轻肝脏病理变化。能提高细胞免疫功能，增加尿素蛋白质和铜蓝蛋白质合成，增加胆汁流量。
肝脾康胶囊是由黄芪、熊胆粉、三七、郁金、板蓝根等中药精制而成。具有疏肝健脾、清热活血的功效，临床用于治疗慢性乙型肝炎、肝硬化疗效显著，并对丙肝、脂肪肝、酒精肝等也具有良好的治疗效果。我们对该药的药理作用进行了实验研究。
, 百拇医药
1 实验材料
1.1 药物：肝脾康胶囊由哈尔滨市中龙肝病医药研究所提供，1.5 g 生药/g；无环鸟苷(ACV)，湖北科益公司；护肝片：黑龙江省五常制药厂；联苯双酯片：上海第十二制药厂；0.9%氯化钠注射液：哈尔滨制药六厂。
1.2 病毒：鸭乙型肝炎病毒、鸭乙型肝炎病毒 DNA(DHBV-DNA) 强阳性血清，采自上海麻鸭，-70 ℃ 保存。
1.3 实验动物：1日龄北京鸭，购自中国医学科学院药用植物研究所养鸭场；昆明系小鼠，Wistar 系大鼠均由黑龙江中医学院实验动物中心提供；新西兰种家兔，由黑龙江省兽医研究所动物中心提供。
2 方法与结果
2.1 肝脾康胶囊在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗效果
, 百拇医药
2.1.1 鸭乙型肝炎病毒感染：1日龄北京鸭，经腿胫 iv 上海麻鸭 DHBV-DNA 阳性鸭血清，每只 0.2 mL，在感染后 7 d 取血，分离血清，-70 ℃ 保存待检。
2.1.2 药物治疗试验：DHBV 感染雏鸭 7 d 后随机分组进行药物治疗试验，每组5～6只，给药组第1，2，3批均分别口服1，3，5 g/kg 肝脾康；病毒对照组(DHBV)以生理盐水代替药物；阳性对照组第1，2批均分别口服 100 mg/kg 无环鸟苷。每日2次，共10 d，在感染后第7天即用药前(T0)，用药第5天(T5)，第10天(T10)和停药后第3天(P3)自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70 ℃ 保存待检。
2.1.3 结果
①1日龄北京鸭感染 DHBV 后，3批实验感染鸭 78 只血清 DHBV-DNA 全部阳性。病毒对照组 17 只雏鸭感染后第7天 DHBV-DNA 全部阳性。感染第7，12，17和22天血清 DHBV-DNA 水平有所变动，但无显著差异，为自然波动。
, 百拇医药
②阳性药对照组第1，2批实验 DHBV 感染鸭11只，口服无环鸟苷 100 mg/kg，有明显抑制 DHBV 作用，但停药后略有反跳现象。
③肝脾康胶囊在 DHBV 感染鸭体内对鸭血清 DHBV-DNA 的影响：第1批3个剂量组中 5 g/kg 组 T10 鸭血清 HDBV-DNA OD 度与 T0 比较显著下降 (P<0.05)，与病毒对照组对比有明显的抑制作用 (P<0.01)，未见毒性反应。第2批 5 g/kg 在 T5，T10 都有显著抑制 (P<0.01 及 P<0.05)。第3批实验 5 g/kg T10 血清 DHBV-DNA 抑制38.6%，停药后 3 d 抑制 53.6%，与生理盐水对照组相比有显著和非常显著意义。
2.2 对小鼠 CCl4 肝损伤的影响：取健康昆明种小鼠70只，体重 22～24 g 雄性。随机分为7组，每组10只。其中6组分别由 sc 1% CCl4 植物油 5 mL/kg，隔日1次，共注射3次。于第3次注射 CCl4 当日开始给予药物。分别 ig 肝脾康 0.5，1.0，2.0 g/kg，护肝片 1.0 g/kg，联苯双酯片 100 mg/kg，模型对照组给予等体积生理盐水，容积为 0.5 mL/20 g，每日1次，连续 7 d，剩余1组不做任何处理作为正常对照组。末次给药后 3 h，割颈取血测定血清谷丙转氨酶，同时取适量肝组织测定甘油三酯，过氧化脂质，谷胱甘肽和谷胱甘肽-S-转移酶等生化指标。并取适量肝组织常规福尔马林液固定，石蜡切片，H.E 染色，进行组织学检查，结果见表1，2。
, 百拇医药
表1 对 CCl4 肝损伤谷丙转氨酶的影响(
±s) 组别剂量
(g/kg)
动物数
(只)
血清谷丙
转氨酶(U)
正常对照
-
10
987±245**
, 百拇医药
模型对照
-
10
2119±524
联苯双酯
0.1
10
1473±412**
护肝片
1.0
10
1623±436**
, 百拇医药
肝脾康胶囊
0.5
10
1611±257**
1.0
10
1426±482**
2.0
10
1150±562**△
与模型对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
与护肝片组比较：△P<0.05表2 对 CCl4 肝损伤生化指标的影响(
±s) 组别剂量
(g/kg)
肝糖元含量
(μg/2 mg肝)
甘油三酯
(mg/g湿肝)
正常对照
-
24.07±2.30**
, 百拇医药
30.31±4.63**
模型对照
-
6.10±1.62
50.20±4.04
联苯双酯
0.1
15.63±2.67**
30.21±46.17**
护肝片
1.0
, 百拇医药 10.17±2.21**
28.45±6.16**
肝脾康胶囊
0.5
16.73±2.21**△△
22.45±3.14**△△
1.0
14.96±3.7**
28.21±5.82**
2.0
, http://www.100md.com
11.43±2.45**
35.27±4.66**
与模型对照组比较：**P<0.01
与护肝片组比较：△P<0.05 △△P<0.01
病理形态检查模型对照组可见 CCl4 所致典型的围绕中央静脉的小叶中心型坏死，外周可见肝细胞的混浊肿胀和气球样变及嗜酸性变等病理改变。肝脾康胶囊中、低剂量组肝细胞虽有混 浊变性，但结构完整，细胞核清晰可见；高剂量组可见肝细胞索结构完整，与肝血窦比例正常，肝细胞着色基本正常，胞核清晰。
2.3 肝脾康胶囊对 CCl4 致体外培养肝细胞损伤的保护作用：参照 Seglen 的方法，在乙醚麻醉下经大鼠门脉插管，用0.25%胰蛋白酶缓冲液循环灌流离体肝脏，分离收集肝细胞。肝细胞收获率为 1×108～4×108 个细胞/肝，台盼蓝染色计数细胞存活率为 90% 以上。用含 10% 小牛血清 RPMI 1640 干粉培养基液稀释成 5×103 个细胞/mL，接种于24孔培养板中，每孔 1 mL共40孔，细胞置 CO2 培养箱中预培养 1.5 h 后，于肝脾康胶囊组每孔加入 15% 肝脾康胶囊药物稀释液 15 mL，继续培养 2 h 后，肝脾康胶囊治疗组及模型组内加 20% CCl4 酒精溶液 15 mL，再培养 4 h，各组同时终止培养。分别取上层培养液 50 mL 测谷丙转氨酶(改良金氏法)，50 mL 测尿素氮(尿乙酰二肟法)，500 mL 测铜蓝蛋白含量(微量法)，100 μL 测丙二醛(MDA)(TBA荧光法)。肝细胞经离心去上清液，加入 4 mL 冰生理盐水，1 800 r/min 离心 1 min，制成肝细胞匀浆，分别测 MDA(TBA发光法)，总蛋白含量(Folln-酚法)及尿素氮含量。于培养板各孔底预先置一小块盖玻片，终止培养后取出，制成扫描电镜标本。
, 百拇医药
生化测定结果见表3～5。可见 CCl4 中毒肝细胞谷丙转氢酶释放明显增加，MDA 生成显著增多，尿蛋白质及铜蓝蛋白的合成明显减少。加入肝脾康胶囊药液谷丙转氨酶释放减少，MDA 生成减少，尿素蛋白质及铜蓝蛋白的合成明显增加。
表3 对培养肝细胞谷丙转氨酶释放及 MDA
生成的影响(n=10，
±s) 组 别谷丙转氨酶
悬液 MDA
细胞内 MDA
模型组
476.8±10.8**
, http://www.100md.com
0.308±0.059
18.4±6.5**
肝脾康胶囊组
421.4±11.2△△
0.206±0.078△△
8.4±3.9△△
正常对照组
421.2±10.9
0.245±0.031
11.8±2.6
与正常对照组比：*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
与模型组比：△P<0.05 △△P<0.01(下表同)表4 对 CCl4 损伤肝细胞蛋白质及铜蓝蛋白
含量的影响(n=10，
±s) 组 别总蛋白
(mg/5×108 细胞)
铜蓝蛋白
(μg/5×108 细胞)
模型组
95.6±8.6**
, 百拇医药
175.5±13.2*
肝脾康胶囊组
120.1±11.4△△
212.9±19.5△△
正常对照组
114.7±11.3
213.4±20.2
表5 对 CCl4 损伤肝细胞尿素代谢的影响
(n=10，
±s) 组 别, http://www.100md.com
悬液尿素
(μg/5×108细胞)
胞内尿素
(μg/5×108细胞)
总尿素
(μg/5×108细胞)
模型组
86.4±2.3*
17.9±4.9**
101.4±5.5**
, 百拇医药
肝脾康胶囊组
65.9±1.4△△
50.2±11.2△△
122.6±11.3△△
正常对照组
82.4±2.6
42.8±8.2
125.1±4.1
电镜下形态：①正常肝细胞膜表面绒毛致密，呈规则指状突起，纹理清楚。②CCl4 中毒细胞表面绒毛稀疏，排列紊乱，甚至绒毛完全脱失，呈光板状。③加入肝脾康胶囊后可明显减轻肝细胞膜表面的损伤。
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2.4 肝脾康胶囊对肝硬化模型的影响：取雄性 Wistar 大鼠50只，体重 180～220 g，分为5组，即正常对照组、肝硬化对照组、联苯双酯组、护肝片组、肝脾康胶囊组，每组10只。除正常组外其余4组均采用复合病因(CCl4 高脂低蛋白膳食及饮酒等刺激)复制肝硬化模型，给药组于实验第 2 天开始 ig 给药，每日1次，共6周，剂量见表6，容积为 1 mL/100 g，正常对照组、肝硬化对照组给予等体积的生理盐水。实验第6周末处死动物。取血清做蛋白电泳，肝左叶固定于10%福尔马林液中，石蜡包埋切片，H.E 及 V.G 染色，进行组织学观察，其余肝组织留作羟脯氨酸测定。处死前收集 16 h 尿，测定尿羟脯氨酸含量。详见表6，7。表6 对肝硬化形成率的影响 组别
剂量
(g/kg)
肝纤维化程度
, 百拇医药 一 十 廿 卅
肝胶原蛋白含量
(mg/g干肝)
血清r球蛋白量
(%)
正常对照
-
10 0 0 0
18.4±0.53**
19.50±1.40*
肝硬化对照
-
, 百拇医药
0 4 3 3
33.2±3.26
20.6±0.51
联苯双酯
0.05
4 3 3 0
22.8±2.27**
18.2±0.52**
护肝片
2.0
2 3 3 2
26.3±1.51**
, 百拇医药
19.42±0.88**
肝脾康胶囊
2.0
6 3 1 0
20.4±1.91**
16.44±0.65**
与肝硬化对照比较：*P<0.05 **P<0.01表7 对尿羟脯氨酸排出量的影响(
±s) 组 别剂量
(g/kg)
, http://www.100md.com
尿羟脯氨酸含量
(μg/mL)
正常对照
-
1.92±0.31*
肝硬化对照
-
1.28±0.21
联苯双酯
0.05
1.79±0.34*
护肝片
, 百拇医药
2.0
1.94±0.72*
肝脾康胶囊
2.0
3.40±0.37*
与肝硬化对照组比较：*P<0.01
2.5 肝脾康胶囊对家兔胆汁流量的影响：取新西兰种家兔36只，体重(3±0.5) kg，雌雄不拘，随机分为6组，分别 ig 给药，给药后 1.5 h，以3%戊巴比妥钠静脉麻醉，仰卧行剑突下正中偏右全层切一6 cm 长切口，找出胆总管及十二指肠，在胆总管中段切一小口插入内径 1 mm 塑料管，结扎固定，在塑料管下连记滴装置使胆汁流量平衡 10 min，记录胆汁流量(滴/min)共60 min，结果见表8。
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表8 对家兔胆汁流量的影响 组 别
剂量
(g/kg)
给药后(min)胆汁流量(滴)
10
20
30
40
50
60
生理盐水
-
6.12±0.30
, 百拇医药
6.34±0.22
6.75±0.40
5.36±0.25
6.00±0.30
5.70±0.22
联苯双酯
0.05
9.33±0.31
11.31±0.40
12.24±1.08
11.75±0.21
11.00±0.04
, 百拇医药
11.00±0.03
护肝片
1.0
12.30±0.42
12.47±0.51
12.00±2.35
11.25±0.42
9.00±1.40
9.50±1.03
肝脾康胶囊
2.0
14.33±1.10
, 百拇医药
14.17±1.10
13.33±1.13
13.50±0.70
12.67±1.13
10.64±1.06
1.0
14.40±0.54
13.42±0.55
12.21±0.50
11.44±0.64
11.34±0.62
12.00±0.73
, 百拇医药
0.5
12.50±0.87
12.25±1.02
12.50±1.02
10.00±1.00
11.75±1.12
10.20±2.50
2.6 对小鼠单核吞噬细胞功能的影响：取18～22 g 小鼠48只，随机分成6组，正常对照组、联苯双酯(200 mg/kg)组、护肝片(2 g/kg)组、肝脾康胶囊(4，2，1 g/kg)3个剂量组，ig 给药，每日1次，共给10 d，容积为 0.5 mL/20 g，于末次给药后 3 min，尾部 iv 印度墨汁 0.1 mL/20 g，注射后 2、10 min，分别从眼眶后静脉丛取血 20 mL，处理后测 OD 值，计算廓清指数，结果见表9。表9 对小鼠单核吞噬细胞功能的影响(
±s) 组别, 百拇医药
剂量
(g/kg)
动物数
(只)
廓清指数
(×10-3)
正常对照
-
8
5.02±0.84
联苯双酯
0.2
8
, 百拇医药
12.35±3.76**
护肝片
2
8
8.34±2.08**
肝脾康胶囊
4
8
10.23±3.43**
2
8
9.74±2.56**
, 百拇医药
1
8
9.69±3.32**
与正常对照比较：**P<0.01
3 讨论
实验结果表明，肝脾康胶囊口服 5 g/kg 组对鸭乙型肝炎病毒感染鸭血清 DHBV-DNA 有显著的抑制作用。肝脾康胶囊对 CCl4 所致小鼠肝损伤有良好的保护作用，能显著降低血清谷丙转氨酶和肝脏甘油三酯含量，增加肝糖元含量；能明显降低模型大鼠的肝硬化形成率，降低肝胶原蛋白和血清 r 球蛋白含量，增加尿羟脯氨酸含量；具有良好的增加家兔胆汁流量作用，能提高小鼠单核吞噬细胞功能。提示肝脾康胶囊具有抗乙肝病毒、修复肝损伤、抑制肝纤维化进程、利胆、增强机体免疫力等作用。这与临床用于治疗慢性乙型肝炎、肝硬化等病的效果是完全一致的，为该药的临床应用提供了可靠的药理学实验依据。
致谢：肝脾康胶囊在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒感染的实验由中国医学科学院医药生物技术研究所完成。
收稿日期：1999-08-30, http://www.100md.com