复方桔梗止咳滴丸的制备和质量标准研究
作者：石林平 姚立娟
单位：(石林平)天津市第六中药厂(300401)；(姚立娟)天津市儿童医院
关键词：大孔吸附树脂；薄层层析；甘草酸；HPLC法
中草药991211摘 要 采用大孔吸附树脂提取桔梗、远志、款冬花、甘草等的有效成分，制成滴丸，以薄层层析法对桔梗、远志进行鉴别，并采用 HPLC 法对甘草酸进行含量测定，结果表明该制剂工艺稳定，质量可靠。
复方桔梗片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第四册，原方由桔梗、远志、款冬花、甘草等组成，具有良好的止咳祛痰功效。但由于片剂的崩解时间长，起效慢，生物利用度低，本文依新药研制办法将其改制为滴丸制剂，并经相应的提取试验及质量标准研究，表明新剂型提取工艺稳定，质量可靠，具有剂量小、起效快、服用方便等特点。
, 百拇医药 1 仪器与试药
日本岛津公司 LC-9A 高效液相色谱仪，SPD-6AV 紫外检测器，CR-4A 数据处理机，岛津 DGU-4A 脱气机，超声波清洗机，P-C18 预处理小柱：河北津杨滤材厂，大孔吸附树脂：南开大学化工厂，甘草酸单胺盐：购自中国药品生物制品检定所，纯度为 98.86%；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为重蒸馏水，冰乙酸为分析纯；桔梗、远志、款冬花、甘草均购自天津市药材公司，经鉴定符合中国药典1995年版一部各项下有关规定。
2 制备工艺
取桔梗、远志、款冬花、甘草等4味，加入5倍量水，煎煮2.5 h，滤过；药渣同法分别加入4倍、3倍量水，煎煮2 h，1 h，合并3次水提液，浓缩至相对体积质量 1.15，放冷后加入3倍量95%乙醇，充分搅拌后，静置24 h，滤过，滤液浓缩至相对体积质量1.10，加入3倍量水于浓缩膏中，搅拌溶解完全后，通过预先处理过的大孔吸附树脂柱，并以水洗脱至流出液无色后，以80%乙醇洗脱，收集洗脱液至无色后，浓缩得膏。将所得膏加入适量熔融的 PEG-6000 中，分散均后，滴入10 ℃～15 ℃的液体石蜡中，取出滴丸，擦干石蜡即得。
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3 鉴别
3.1 桔梗的鉴别：取本品 1 g，研成粉末，加乙醚 30 mL，加热回流 90 min，分取乙醚液，浓缩至 2 mL，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材 1 g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中华人民共和国药典1995年版附录35页)试验。吸取上述两种溶液 5～10 μL,分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%的硫酸溶液，120 ℃烘5 min，日光(或365 nm紫外灯)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的黄绿色荧光斑点。如图1-A。
A-桔梗 B-远志
1-空白 2-药材 3-样品
图1 样品薄层图
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3.2 远志的鉴别：取本品 1 g，研成粉末后，加入 5 mL 甲醇溶解，作为供试品溶液；另取远志对照药材 1 g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中华人民共和国药典1995 版附录35页)试验，吸取上述2种溶液 5～10 μL，分别点于同一硅胶 G 板上，以正丁醇-醋酸-水(5∶1∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 1% 香草醛硫酸溶液，110 ℃烘 5 min，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的3个紫色斑点。如图1-B。
4 含量测定
4.1 色谱条件：色谱柱：C18柱(7.8 mm×150 mm,5 μ)；流动相：乙腈(1→15)-冰乙酸液(30∶70)；检测波长：248 nm；流量：1.5 mL/min；衰减：2；纸速：2 mm/min；AUFS 0.08。
4.2 对照品溶液的制备：精密称取甘草酸单胺盐对照品适量加入甲醇溶解，制成 0.147 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。
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空白对照溶液的制备：精密称取缺甘草的样品 450 mg，按供试品溶液制备方法制备，作为空白对照溶液。
4.3 供试品溶液的制备：取样品约 450 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶中，50%甲醇超声波振荡溶解，冷却，定容至刻度。取此液 5 mL，用1%冰乙酸冲洗，上述样品上预处理小柱，先用 15 mL～20 mL 甲醇(1→15)-冰乙酸液(30∶70)洗去干扰物，然后用 5 mL 甲醇洗掉被测定甘草酸于 5 mL 量瓶中，得供试品溶液。
4.4 标准曲线：精密称取 17.2 mg 甘草酸单铵盐对照品于 100 mL 量瓶中，甲醇溶解定容，分别取1，2，4，6，8，10 mL 于 10 mL 量瓶中，甲醇定容，分别进样5 μL，得回归方程为Y=-1642.38+902438.68X，r=0.999(X为浓度，Y为峰面积)，甘草酸在0.0172～0.172 mg/mL 具有良好的线性关系。
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4.5 精密度实验：精密吸取同一浓度对照品溶液，重复进样5次，RSD=0.31%。
4.6 空白实验及样品、对照品谱图：取不同甘草酸样品约 450 mg，按样品处理项下处理进样，得图2。
A-甘草酸单胺盐 B-样品 C-阴性对照
图2 样品 HPLC 图
4.7 重现性实验：取同一批号样品6份，按样品测试条件测定，甘草酸含量的 RSD 0.36%。
4.8 回收率实验：1)预处理柱回收率：取对照品 17.2 mg，于 100 mL 量瓶中，超声波溶解，以甲醇定容至刻度，分别取 2，4，6，8，10 mL 于 10 mL 量瓶中，取 5 mL 用1%冰乙酸稀释5倍，同样品处理项下方法处理，得待测液，分别进样 3 次 5 μL，得峰面积，此峰面积与未经上柱液的峰面积相比即得柱回收率 99.7%，RSD=0.28%(n=5)。
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2)样品回收率：取样品约 400 mg，精密称定 10 份，每份加入一定浓度对照品(浓度为 0.099 mg/mL)，50% 甲醇液超声波振荡溶解，定容，取液 2 mL，稀释 5 倍，上预柱，得待测液；另取约 400 mg 样品，处理同样品处理项下，作为空白，测回收率，结果为 97.87%，RSD=1.7%(n=10)。
4.9 样品的测定及初步稳定性测定：3批样品测定结果见表1。
表1 样品测定结果(含量 mg/g) 时间
批 号
980509
980518
980528
原 测
, http://www.100md.com
2.252
2.508
2.412
1998-06-29
2.244
2.523
2.431
1998-09-30
2.255
2.491
2.417
1999-02-14
, http://www.100md.com
2.238
2.496
2.422
5 讨论
5.1 试验中采用大孔吸附树脂对方中四味药材分别作了提取试验，并作了不同型号的大孔吸附树脂吸附率的对比试验，结果表明，AB-8 型大孔吸附树脂对方中的皂苷类有效成分吸附效果最佳。
5.2 由于款冬花成分不明确，无特征性斑点，故文中未对其作鉴别。
5.3 用大孔吸附树脂提取桔梗、远志、款冬花、甘草的有效成分，经制备成具有高效、速效特点滴丸制剂，获得满意效果，并制定出相应的定性鉴别及含量测定指标，可作为该制剂的质量标准。
参考文献
1 日本药局方.第十二改正
2 杨胜华.药物分析杂志，1993，13(2)：136
3 廖工铁，等.药物分析杂志，1992，12(4)：237
4 李俊，等.中成药，1994，16(6)：13
6 李国峰.现代应用药学，1996，13(2)：33
收稿日期：1999-05-24, http://www.100md.com
单位：(石林平)天津市第六中药厂(300401)；(姚立娟)天津市儿童医院
关键词：大孔吸附树脂；薄层层析；甘草酸；HPLC法
中草药991211摘 要 采用大孔吸附树脂提取桔梗、远志、款冬花、甘草等的有效成分，制成滴丸，以薄层层析法对桔梗、远志进行鉴别，并采用 HPLC 法对甘草酸进行含量测定，结果表明该制剂工艺稳定，质量可靠。
复方桔梗片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第四册，原方由桔梗、远志、款冬花、甘草等组成，具有良好的止咳祛痰功效。但由于片剂的崩解时间长，起效慢，生物利用度低，本文依新药研制办法将其改制为滴丸制剂，并经相应的提取试验及质量标准研究，表明新剂型提取工艺稳定，质量可靠，具有剂量小、起效快、服用方便等特点。
, 百拇医药 1 仪器与试药
日本岛津公司 LC-9A 高效液相色谱仪，SPD-6AV 紫外检测器，CR-4A 数据处理机，岛津 DGU-4A 脱气机，超声波清洗机，P-C18 预处理小柱：河北津杨滤材厂，大孔吸附树脂：南开大学化工厂，甘草酸单胺盐：购自中国药品生物制品检定所，纯度为 98.86%；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为重蒸馏水，冰乙酸为分析纯；桔梗、远志、款冬花、甘草均购自天津市药材公司，经鉴定符合中国药典1995年版一部各项下有关规定。
2 制备工艺
取桔梗、远志、款冬花、甘草等4味，加入5倍量水，煎煮2.5 h，滤过；药渣同法分别加入4倍、3倍量水，煎煮2 h，1 h，合并3次水提液，浓缩至相对体积质量 1.15，放冷后加入3倍量95%乙醇，充分搅拌后，静置24 h，滤过，滤液浓缩至相对体积质量1.10，加入3倍量水于浓缩膏中，搅拌溶解完全后，通过预先处理过的大孔吸附树脂柱，并以水洗脱至流出液无色后，以80%乙醇洗脱，收集洗脱液至无色后，浓缩得膏。将所得膏加入适量熔融的 PEG-6000 中，分散均后，滴入10 ℃～15 ℃的液体石蜡中，取出滴丸，擦干石蜡即得。
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3 鉴别
3.1 桔梗的鉴别：取本品 1 g，研成粉末，加乙醚 30 mL，加热回流 90 min，分取乙醚液，浓缩至 2 mL，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材 1 g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中华人民共和国药典1995年版附录35页)试验。吸取上述两种溶液 5～10 μL,分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%的硫酸溶液，120 ℃烘5 min，日光(或365 nm紫外灯)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的黄绿色荧光斑点。如图1-A。
A-桔梗 B-远志
1-空白 2-药材 3-样品
图1 样品薄层图
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3.2 远志的鉴别：取本品 1 g，研成粉末后，加入 5 mL 甲醇溶解，作为供试品溶液；另取远志对照药材 1 g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中华人民共和国药典1995 版附录35页)试验，吸取上述2种溶液 5～10 μL，分别点于同一硅胶 G 板上，以正丁醇-醋酸-水(5∶1∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 1% 香草醛硫酸溶液，110 ℃烘 5 min，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的3个紫色斑点。如图1-B。
4 含量测定
4.1 色谱条件：色谱柱：C18柱(7.8 mm×150 mm,5 μ)；流动相：乙腈(1→15)-冰乙酸液(30∶70)；检测波长：248 nm；流量：1.5 mL/min；衰减：2；纸速：2 mm/min；AUFS 0.08。
4.2 对照品溶液的制备：精密称取甘草酸单胺盐对照品适量加入甲醇溶解，制成 0.147 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。
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空白对照溶液的制备：精密称取缺甘草的样品 450 mg，按供试品溶液制备方法制备，作为空白对照溶液。
4.3 供试品溶液的制备：取样品约 450 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶中，50%甲醇超声波振荡溶解，冷却，定容至刻度。取此液 5 mL，用1%冰乙酸冲洗，上述样品上预处理小柱，先用 15 mL～20 mL 甲醇(1→15)-冰乙酸液(30∶70)洗去干扰物，然后用 5 mL 甲醇洗掉被测定甘草酸于 5 mL 量瓶中，得供试品溶液。
4.4 标准曲线：精密称取 17.2 mg 甘草酸单铵盐对照品于 100 mL 量瓶中，甲醇溶解定容，分别取1，2，4，6，8，10 mL 于 10 mL 量瓶中，甲醇定容，分别进样5 μL，得回归方程为Y=-1642.38+902438.68X，r=0.999(X为浓度，Y为峰面积)，甘草酸在0.0172～0.172 mg/mL 具有良好的线性关系。
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4.5 精密度实验：精密吸取同一浓度对照品溶液，重复进样5次，RSD=0.31%。
4.6 空白实验及样品、对照品谱图：取不同甘草酸样品约 450 mg，按样品处理项下处理进样，得图2。
A-甘草酸单胺盐 B-样品 C-阴性对照
图2 样品 HPLC 图
4.7 重现性实验：取同一批号样品6份，按样品测试条件测定，甘草酸含量的 RSD 0.36%。
4.8 回收率实验：1)预处理柱回收率：取对照品 17.2 mg，于 100 mL 量瓶中，超声波溶解，以甲醇定容至刻度，分别取 2，4，6，8，10 mL 于 10 mL 量瓶中，取 5 mL 用1%冰乙酸稀释5倍，同样品处理项下方法处理，得待测液，分别进样 3 次 5 μL，得峰面积，此峰面积与未经上柱液的峰面积相比即得柱回收率 99.7%，RSD=0.28%(n=5)。
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2)样品回收率：取样品约 400 mg，精密称定 10 份，每份加入一定浓度对照品(浓度为 0.099 mg/mL)，50% 甲醇液超声波振荡溶解，定容，取液 2 mL，稀释 5 倍，上预柱，得待测液；另取约 400 mg 样品，处理同样品处理项下，作为空白，测回收率，结果为 97.87%，RSD=1.7%(n=10)。
4.9 样品的测定及初步稳定性测定：3批样品测定结果见表1。
表1 样品测定结果(含量 mg/g) 时间
批 号
980509
980518
980528
原 测
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2.252
2.508
2.412
1998-06-29
2.244
2.523
2.431
1998-09-30
2.255
2.491
2.417
1999-02-14
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2.238
2.496
2.422
5 讨论
5.1 试验中采用大孔吸附树脂对方中四味药材分别作了提取试验，并作了不同型号的大孔吸附树脂吸附率的对比试验，结果表明，AB-8 型大孔吸附树脂对方中的皂苷类有效成分吸附效果最佳。
5.2 由于款冬花成分不明确，无特征性斑点，故文中未对其作鉴别。
5.3 用大孔吸附树脂提取桔梗、远志、款冬花、甘草的有效成分，经制备成具有高效、速效特点滴丸制剂，获得满意效果，并制定出相应的定性鉴别及含量测定指标，可作为该制剂的质量标准。
参考文献
1 日本药局方.第十二改正
2 杨胜华.药物分析杂志，1993，13(2)：136
3 廖工铁，等.药物分析杂志，1992，12(4)：237
4 李俊，等.中成药，1994，16(6)：13
6 李国峰.现代应用药学，1996，13(2)：33
收稿日期：1999-05-24, http://www.100md.com