复方大黄涂膜剂中助透剂选择的研究
作者：曾诠 黄诘迪 刘灿红 郑顺利 叶少兵
单位：中国药科大学(南京 210009)
关键词：大黄；涂膜剂；紫外分光光度法；比色法；透皮吸收
中草药991210 摘 要 采用小鼠体外透皮实验，摸索复方大黄涂膜剂成膜材料及助透剂。结果表明：成膜材料、助透剂种类及浓度，影响透皮吸收，其中尤以5%油酸作助透剂、PVA作成膜材料，效果更佳。
复方大黄散是治疗疼痛外敷有效方剂，由大黄、乳香、芒硝等中药组成。具有清热解毒，破积滞、行瘀血之功效。经多年实验研究，并用均匀设计法优选成膜工艺，现已制成易流动、易涂布、成膜时间短、膜表面光滑易揭的涂膜剂。本文重点研究涂膜剂的处方组成，用小鼠体外透皮实验[1，2]和测蒽醌含量的方法[3]研究成膜材料、不同种类、不同浓度的助透剂对涂膜剂中有效成分透过量的影响，从而确定其在处方中的用量。
, 百拇医药
1 实验材料
1.1 仪器：UV-752型分光光度计，单室扩散池，磁力搅拌器，501型超级恒温器，电子分析天平。
1.2 药品：药材：均购于南京市药业股份有限公司，经鉴定为正品；大黄素对照品：楼凤昌教授赠送；复方大黄涂膜剂：按设计处方自制；试剂：0.9%生理盐水，自制；其它试剂均为分析纯。动物：体重为25 g左右的昆明种小白鼠，购于中国药科大学动物房。
2 实验方法
2.1 涂膜剂中蒽醌的含量测定
2.1.1 测定波长的选择
1)标准液的制备：精密称取大黄素对照品，加乙醚制成每1 mL含0.1 mg的溶液，摇匀。
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2)样品液的制备：取复方大黄涂膜剂药液，按膜剂测定项下方法制得乙酸乙酯液，回收至小体积并转移至10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀备用。
3)空白液的制备：按涂膜剂处方比例，取除去大黄的其他中药，制成模拟空白药液。精密称定该药液0.1 g，按膜剂测定项下方法制得乙酸乙酯液，以下操作同样品液的制备。
取上述3种溶液各1 mL，挥去溶剂，加0.5%醋酸镁甲醇液定容至10 mL，显色摇匀，以0.5%醋酸镁甲醇液为空白对照，在500～520 nm波长范围内测定其吸收度，除空白溶液外，其它均在513 nm波长处有最大吸收，在此波长处样品的吸收度为0.418，而空白液的吸收度几乎为零，说明空白液(除大黄外其它中药)对样品的测定基本上无影响，故测定波长选择为513 nm。
2.1.2 标准曲线的制备：精密吸取浓度为0.0948 mg/mL的标准液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.5，2.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，水浴挥去乙醚，残渣用0.5%醋酸镁甲醇液溶解并稀释至刻度，摇匀，以0.5%醛酸镁甲醇液为空白对照，于513 nm波长测其吸收度。得回归方程为：A=0.004981+4.03057C，r=0.9999。
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2.1.3 膜剂中蒽醌的测定：取复方大黄涂膜剂药液约0.16 g，精密称定，水浴蒸干。加30 mL蒸馏水溶解，过滤。滤液用乙酸乙酯萃取6次(15 mL×3，10 mL×3)，合并乙酸乙酯液，用10 mL蒸馏水洗，水洗液再用10 mL乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯液，加无水硫酸钠脱水，过滤回收乙酸乙酯至干，加0.5%醋酸镁甲醇液定容至10 mL，摇匀，精密吸取上述溶液1 mL置于10 mL量瓶中，加0.5%醋酸镁甲醇液至刻度，摇匀。以下操作同标准曲线，结果见表1。
表1 膜剂含量测定 取样量
吸收值(A)
蒽醌含量(%)
平均含量
RSD%
0.1629
, 百拇医药
0.421
0.5069
0.1615
0.418
0.5076
0.5073
0.07
0.1616
0.418
0.5073
2.1.4 加样回收实验：精密称定已知蒽醌含量的复方大黄涂膜剂药液约0.16 g，精确加入大黄素对照液4.0 mL，从“水蒸干”起，按膜剂测定项下操作、定容测定，计算含量及回收率，结果平均回收率96.12%，RSD=0.55%(n=3)。
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2.1.5 稳定性实验：精确称取复方大黄涂膜剂药液约0.16 g，按膜剂测定项下操作、显色，测定吸收度，每隔10 min测定一次，结果表明，蒽醌化合物显色在1 h内稳定。
2.2 涂膜剂透皮实验
2.2.1 涂膜剂的制备
1)成膜材料的选择：在药膏、溶剂及其它添加剂用量完全相同情况下，选用PVA，PVA-CMC-Na(2∶1)，PVA-CMC-Na(1∶1)，分别制备涂膜剂，8 h蒽醌透过量分别为0.0274，0.0233，0.0201 mg，以PVA为优。
2)涂膜剂的制备：称取PVA，加5倍量水使其充分溶胀，于90 ℃水浴中搅拌使成匀浆状，加入药液及其它添加剂，再按表2，3设计方案加入不同种类、浓度的助透剂，脱气备用。
2.2.2 透皮实验方法[3]：取体重20～25 g的健康小鼠，雌雄兼用。脱毛后断颈处死，分离腹部皮肤，剔除脂肪及皮下组织，制成约4 cm2大小的鼠皮，用生理盐水冲洗干净。取鼠皮置于扩散池口，角质层面向上，真皮面向下，接受室中加满生理盐水，样品室中加入涂膜剂，夹层通37 ℃的恒温水，在持续搅拌下于4，8，12，16，20，24 h定时取出全部接受介质(供测定蒽醌含量)，并立即向接受室加入新的生理盐水。
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2.2.3 接收样品液的制备与测定：每次定时取出的接受介质，用乙酸乙酯萃取后，按膜剂测定项下操作，显色、测定，计算含量，结果见表2，3。表2 不同浓度的氮酮对透皮吸收的影响 助透剂浓度(%)
1
2
3
4
蒽醌量(mg)
1.9136
1.9872
2.3920
1.6928
4
, 百拇医药
0.0077
0.0293
0.0310
0.0268
8
0.0079
0.0221
0.0300
0.0268
12
0.0077
0.0169
0.0263
, 百拇医药
0.0266
16
0.0067
0.0156
0.0273
0.0268
20
0.0050
0.0164
060213
0.0199
24
0.0067
, http://www.100md.com
0.0149
0.0258
0.0266
透过总量(mg)
0.0417
0.1152
0.1617
0.1535
透皮率(%)
2.2
5.8
6.8
9.2
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表3 不同浓度的油酸对透皮吸收的影响 助透剂浓度(%)
1
2
3
4
蒽醌量(mg)
1.9136
1.8400
1.7660
1.766
4
0.0132
, http://www.100md.com 0.0119
0.0206
0.0315
8
0.0092
0.0129
0.0213
0.0310
12
0.0079
0.0097
0.0181
0.0263
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16
0.0084
0.0119
0.0184
0.0337
20
0.0070
0.0114
0.0189
0.0226
24
0.0067
0.0141
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0.0191
0.0328
透过总量(mg)
0.0524
0.0719
0.1164
0.1779
透皮率(%)
2.8
4.1
6.3
10.1
3 讨论
, 百拇医药
3.1 对于膜剂中蒽醌的测定，曾采用碱化有机溶剂法去杂质，酸化有机溶剂萃取蒽醌的方法来测定含量。实验中发现碱液酸化时产生沉淀，难以处理而采用本实验方法。用此法，复方中其它中药成分对测定几乎无干扰。
3.2 制备离体小鼠皮时，毛要刮净，脂肪和皮下组织也要剔除干净，不能损伤鼠皮，尽量使用同一部位的鼠皮，以减少误差。
3.3 在向扩散池中装接受介质时，要排除气泡，同时介质必须与皮肤充分接触。
3.4 实验结果表明：成膜材料、助透剂的种类及其加入量，均影响透过率。氮酮和油酸均随着浓度的增加而透皮率增大。若由该实验选择处方组成，以5%油酸作助透剂，PVA作成膜材料效果可能较好些。透皮实验影响因素极其复杂，该项研究仍需进一步探讨。
参考文献
1 梁秉文.经皮给药制剂.北京：中国医药科技出版社，1992：250
2 常天辉，等.中国医科大学学报，1992，21(1)：18
3 孙小萍，等.中草药，1983，14(6)：15
收稿日期：1999-05-13, 百拇医药
单位：中国药科大学(南京 210009)
关键词：大黄；涂膜剂；紫外分光光度法；比色法；透皮吸收
中草药991210 摘 要 采用小鼠体外透皮实验，摸索复方大黄涂膜剂成膜材料及助透剂。结果表明：成膜材料、助透剂种类及浓度，影响透皮吸收，其中尤以5%油酸作助透剂、PVA作成膜材料，效果更佳。
复方大黄散是治疗疼痛外敷有效方剂，由大黄、乳香、芒硝等中药组成。具有清热解毒，破积滞、行瘀血之功效。经多年实验研究，并用均匀设计法优选成膜工艺，现已制成易流动、易涂布、成膜时间短、膜表面光滑易揭的涂膜剂。本文重点研究涂膜剂的处方组成，用小鼠体外透皮实验[1，2]和测蒽醌含量的方法[3]研究成膜材料、不同种类、不同浓度的助透剂对涂膜剂中有效成分透过量的影响，从而确定其在处方中的用量。
, 百拇医药
1 实验材料
1.1 仪器：UV-752型分光光度计，单室扩散池，磁力搅拌器，501型超级恒温器，电子分析天平。
1.2 药品：药材：均购于南京市药业股份有限公司，经鉴定为正品；大黄素对照品：楼凤昌教授赠送；复方大黄涂膜剂：按设计处方自制；试剂：0.9%生理盐水，自制；其它试剂均为分析纯。动物：体重为25 g左右的昆明种小白鼠，购于中国药科大学动物房。
2 实验方法
2.1 涂膜剂中蒽醌的含量测定
2.1.1 测定波长的选择
1)标准液的制备：精密称取大黄素对照品，加乙醚制成每1 mL含0.1 mg的溶液，摇匀。
, 百拇医药
2)样品液的制备：取复方大黄涂膜剂药液，按膜剂测定项下方法制得乙酸乙酯液，回收至小体积并转移至10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀备用。
3)空白液的制备：按涂膜剂处方比例，取除去大黄的其他中药，制成模拟空白药液。精密称定该药液0.1 g，按膜剂测定项下方法制得乙酸乙酯液，以下操作同样品液的制备。
取上述3种溶液各1 mL，挥去溶剂，加0.5%醋酸镁甲醇液定容至10 mL，显色摇匀，以0.5%醋酸镁甲醇液为空白对照，在500～520 nm波长范围内测定其吸收度，除空白溶液外，其它均在513 nm波长处有最大吸收，在此波长处样品的吸收度为0.418，而空白液的吸收度几乎为零，说明空白液(除大黄外其它中药)对样品的测定基本上无影响，故测定波长选择为513 nm。
2.1.2 标准曲线的制备：精密吸取浓度为0.0948 mg/mL的标准液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.5，2.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，水浴挥去乙醚，残渣用0.5%醋酸镁甲醇液溶解并稀释至刻度，摇匀，以0.5%醛酸镁甲醇液为空白对照，于513 nm波长测其吸收度。得回归方程为：A=0.004981+4.03057C，r=0.9999。
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2.1.3 膜剂中蒽醌的测定：取复方大黄涂膜剂药液约0.16 g，精密称定，水浴蒸干。加30 mL蒸馏水溶解，过滤。滤液用乙酸乙酯萃取6次(15 mL×3，10 mL×3)，合并乙酸乙酯液，用10 mL蒸馏水洗，水洗液再用10 mL乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯液，加无水硫酸钠脱水，过滤回收乙酸乙酯至干，加0.5%醋酸镁甲醇液定容至10 mL，摇匀，精密吸取上述溶液1 mL置于10 mL量瓶中，加0.5%醋酸镁甲醇液至刻度，摇匀。以下操作同标准曲线，结果见表1。
表1 膜剂含量测定 取样量
吸收值(A)
蒽醌含量(%)
平均含量
RSD%
0.1629
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0.421
0.5069
0.1615
0.418
0.5076
0.5073
0.07
0.1616
0.418
0.5073
2.1.4 加样回收实验：精密称定已知蒽醌含量的复方大黄涂膜剂药液约0.16 g，精确加入大黄素对照液4.0 mL，从“水蒸干”起，按膜剂测定项下操作、定容测定，计算含量及回收率，结果平均回收率96.12%，RSD=0.55%(n=3)。
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2.1.5 稳定性实验：精确称取复方大黄涂膜剂药液约0.16 g，按膜剂测定项下操作、显色，测定吸收度，每隔10 min测定一次，结果表明，蒽醌化合物显色在1 h内稳定。
2.2 涂膜剂透皮实验
2.2.1 涂膜剂的制备
1)成膜材料的选择：在药膏、溶剂及其它添加剂用量完全相同情况下，选用PVA，PVA-CMC-Na(2∶1)，PVA-CMC-Na(1∶1)，分别制备涂膜剂，8 h蒽醌透过量分别为0.0274，0.0233，0.0201 mg，以PVA为优。
2)涂膜剂的制备：称取PVA，加5倍量水使其充分溶胀，于90 ℃水浴中搅拌使成匀浆状，加入药液及其它添加剂，再按表2，3设计方案加入不同种类、浓度的助透剂，脱气备用。
2.2.2 透皮实验方法[3]：取体重20～25 g的健康小鼠，雌雄兼用。脱毛后断颈处死，分离腹部皮肤，剔除脂肪及皮下组织，制成约4 cm2大小的鼠皮，用生理盐水冲洗干净。取鼠皮置于扩散池口，角质层面向上，真皮面向下，接受室中加满生理盐水，样品室中加入涂膜剂，夹层通37 ℃的恒温水，在持续搅拌下于4，8，12，16，20，24 h定时取出全部接受介质(供测定蒽醌含量)，并立即向接受室加入新的生理盐水。
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2.2.3 接收样品液的制备与测定：每次定时取出的接受介质，用乙酸乙酯萃取后，按膜剂测定项下操作，显色、测定，计算含量，结果见表2，3。表2 不同浓度的氮酮对透皮吸收的影响 助透剂浓度(%)
1
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蒽醌量(mg)
1.9136
1.9872
2.3920
1.6928
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0.0077
0.0293
0.0310
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060213
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0.0149
0.0258
0.0266
透过总量(mg)
0.0417
0.1152
0.1617
0.1535
透皮率(%)
2.2
5.8
6.8
9.2
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表3 不同浓度的油酸对透皮吸收的影响 助透剂浓度(%)
1
2
3
4
蒽醌量(mg)
1.9136
1.8400
1.7660
1.766
4
0.0132
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0.0206
0.0315
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0.0129
0.0213
0.0310
12
0.0079
0.0097
0.0181
0.0263
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0.0084
0.0119
0.0184
0.0337
20
0.0070
0.0114
0.0189
0.0226
24
0.0067
0.0141
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0.0191
0.0328
透过总量(mg)
0.0524
0.0719
0.1164
0.1779
透皮率(%)
2.8
4.1
6.3
10.1
3 讨论
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3.1 对于膜剂中蒽醌的测定，曾采用碱化有机溶剂法去杂质，酸化有机溶剂萃取蒽醌的方法来测定含量。实验中发现碱液酸化时产生沉淀，难以处理而采用本实验方法。用此法，复方中其它中药成分对测定几乎无干扰。
3.2 制备离体小鼠皮时，毛要刮净，脂肪和皮下组织也要剔除干净，不能损伤鼠皮，尽量使用同一部位的鼠皮，以减少误差。
3.3 在向扩散池中装接受介质时，要排除气泡，同时介质必须与皮肤充分接触。
3.4 实验结果表明：成膜材料、助透剂的种类及其加入量，均影响透过率。氮酮和油酸均随着浓度的增加而透皮率增大。若由该实验选择处方组成，以5%油酸作助透剂，PVA作成膜材料效果可能较好些。透皮实验影响因素极其复杂，该项研究仍需进一步探讨。
参考文献
1 梁秉文.经皮给药制剂.北京：中国医药科技出版社，1992：250
2 常天辉，等.中国医科大学学报，1992，21(1)：18
3 孙小萍，等.中草药，1983，14(6)：15
收稿日期：1999-05-13, 百拇医药