白头翁体内抗肿瘤作用的实验研究
作者：蔡鹰 陆瑜 梁秉文 余国祥 谢瑛 张能方 亢寿海
单位：(蔡鹰 陆瑜 梁秉文 余国祥 谢瑛)解放军第四五四医院(南京 210002)；(张能方 亢寿海)江苏省肿瘤医院
关键词：白头翁；抗肿瘤作用；胸腺指数；脾指数
中草药991221 摘 要 以荷S180瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠为模型，研究了白头翁注射液(PWAE)的体内抗肿瘤作用。PWAE有明显的抗体内移植瘤和延长荷瘤小鼠存活期作用，并且PWAE还能降低荷瘤小鼠脾指数，升高胸腺指数，使之趋向正常值。提示PWAE不仅能抑制体内肿瘤生长，还能提高机体的免疫能力。
白头翁为毛茛科植物Pulsatilla chinensis Regel，已发现其水提液(PWE)、醇提液(PAE)在体外能显著抑制7721、HeLa、MKN-45细胞的生长[1]，笔者对其体内抗肿瘤作用进行了实验研究。
, 百拇医药
1 材料
白头翁：本院中药房提供。白头翁水提取2次，4层纱布过滤，滤液浓缩，加入95%酒精使含醇量达70%，置冰箱过夜，取上清液，回收酒精，再配成含醇量80%混悬液，置冰箱过夜，取上清液，回收酒精和水至干，加蒸馏水配成0.5 g生药/mL溶液，3号垂熔漏斗过滤，高温高压灭菌，即为白头翁注射液(PWAE)。环磷酰胺：上海华联制药有限公司产品，批号980612。
S180及艾氏腹水瘤株：江苏省肿瘤医院定期传代瘤株。
昆明种小鼠，18～22 g，购自南京医科大学实验动物中心。
2 方法
2.1 小鼠荷瘤：取接种6 d的S180及艾氏腹水型小鼠腹水，用灭菌生理盐水(1：3)稀释，经右上肢靠右肩甲骨处sc或ip 0.2 mL (4×106～6×106个瘤细胞，活细胞率>95%)，制成实体瘤型或腹水型荷瘤小鼠模型。
, 百拇医药
2.2 药物剂量与给药途径：按实验设计剂量ip(实体瘤型)或im(腹水瘤型)给药，阴性对照组用生理盐水ip或im，阳性对照组用环磷酰胺ip或im，每只小鼠每天用药1次。
2.3 抑瘤率、脾指数和胸腺指数的计算：荷S180实体瘤型小鼠于接种后24 h随机分组，连续给药8 d，8 d后称重、处死，分别取瘤、脾和胸腺，体重，计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数并进行统计学处理[2]。
2.4 存活率的计算：艾氏腹水型小鼠于接种后24 h随机分组，连续给药8 d，停药后继续观察，直到自然死亡，计算其存活延长率。
3 结果
3.1 对荷S180瘤小鼠的抑瘤作用：见表1。
表1 对荷S180小鼠肿瘤的抑制作用(
±s) 组别
, 百拇医药
剂量
(g生药/kg.d)
动物数
(只)
体重变化(g)
瘤重
抑瘤率
疗前
疗后
对照
-
15
19.4±1.8
, http://www.100md.com
28.9±0.7
2.47±1.02
0
PWAE
3
12
19.5±0.9
27.1±0.5
0.91±0.49
63.2**
1
12
, http://www.100md.com 19.1±0.6
28.2±0.4
1.33±1.26
46.2**
0.3
12
18.9±1.3
29.4±0.8
1.91±0.47
22.6*
环磷酰胺
0.01
, http://www.100md.com
12
19.3±0.7
29.6±1.3
1.03±0.57
58.3**
与对照组相比：*P<0.05 **P<0.013.2 对艾氏腹水型小鼠存活期的影响:见表2。
表2 对艾氏腹水型小鼠存活期的影响(±s) 组 别
剂量
(g生药/kg.d)
, 百拇医药
动物数
(只)
存活
(d)
延长率
(%)
对照
-
14
12.57±1.21
0
PWAE
3
, 百拇医药
10
18.60±0.76
48.0**△
1
10
17.40±1.32
38.4**
0.3
10
14.70±0.54
16.9*
环磷酰胺
, 百拇医药
0.01
10
16.30±0.87
29.7**
与对照组相比：*P<0.05 **P<0.01
与环磷酰胺组相比：△P<0.05
3.3 对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响：见表3。结果表明，PWAE 3 g生药/kg.d有明显抑瘤作用(63.2 %)，且能明显延长艾氏腹水型小鼠的存活期(48.0 %)，随着剂量减小，抑瘤率和存活期也减小。PWAE 3 g生药/kg.d与阳性对照组环磷酰胺组相比，抑瘤率与后者(58.3 %)相近(P>0.05)，存活期延长率比后者(29.7 %)高(P<0.05)。小鼠荷瘤后，引起免疫指标不正常，表现为脾指数升高，为正常鼠的198.1 %，胸腺指数下降，为正常鼠的56.5 %，PWAE不同剂量组均能使荷瘤小鼠脾指数降低，胸腺指数升高，向正常值靠拢。3 g生药/kg.d剂量组降低脾指数最显著(127.8 %)，与对照组相比有显著差异(P<0.01)，与环磷酰胺组相比无显著差异(P>0.05)。1 g生药/kg.d剂量组上升胸腺指数最显著，与对照组相比有显著差异(P<0.01)，与环磷酰胺组(69.4 %)相比有显著差异(P<0.01)，说明其效果比后者强。综上所述，PWAE不仅能抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，延长小鼠生命，而且有改善荷瘤小鼠免疫机能的作用。
, 百拇医药
表3 对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响(±s) 组 别
剂 量
(g生药/kg.d)
动物数
(只)
脾指数
比率＃
(%)
胸腺指数
比率＃＃
, 百拇医药
(%)
正常组
-
12
6.76±0.58
2.32±0.43
对照
-
18
13.39±0.45
198.1
1.31±0.57
56.5
, 百拇医药
PWAE
3
12
8.63±0.62*
127.8
1.70±0.95
73.3
1
12
9.86±0.52
145.9
1.92±0.24△*
, 百拇医药
78.6
0.3
12
10.23±1.36
151.3
1.55±0.37
66.8
环磷酰胺
0.01
12
9.32±0.87
137.9
1.61±0.69
, 百拇医药
69.4
＃空白对照组、各用药组与正常组脾指数比率； ##空白对照组、各用药组与正常组胸腺指数比率。
与对照组相比：*P<0.01；与环磷酰胺组相比：△P<0.01
4 讨论
4.1 白头翁含皂苷，虽然有报道白头翁煎剂及白头翁皂苷毒性都很低，后者溶血指数仅1∶666[3]，考虑到用药安全性，故实验时暂未采用静脉给药。由于笔者在白头翁体外抗肿瘤实验研究[1]时，发现白头翁抗肿瘤活性成分易溶于水，亦能溶于醇，所以，采用水提醇沉法制成注射剂腹腔给药观察其抗移植瘤作用。口服给药是否有效有待于进一步研究。
4.2 有报道白头翁皂苷A3 100 μg/mL在体外对P388细胞有抑制生长作用(抑制率53.7 %)，白头翁粉末乙醇提取物经乙醚脱脂、脱色素后，分别用乙酸乙酯及正丁醇萃取，得到皂苷A和B[4]，故笔者曾用白头翁乙酸乙酯(50，10，5 g生药/kg.d)、正丁醇(12.5，5，1.25 g生药/kg.d)提取物ip给药未发现有明显抗S180移植瘤作用。说明其体内有效抗肿瘤成分不是白头翁皂苷A，B。还有报道从白头翁根中提取到一种新的多环烷类三萜酸：白头翁酸，并且体外实验结果表明白头翁酸有抗P388、Lewis肺癌和人大细胞肺癌的作用[5]，本实验水提醇沉提取物有效，至少说明抗肿瘤成分极性较大，是否是白头翁酸有待进一步证实。
, http://www.100md.com
4.3 体外实验结果[1]提示PAE、PWE有直接杀灭瘤细胞的作用，体内实验结果则说明PWAE还能通过提高机体免疫力来达到抗肿瘤作用。至于其具体作用机制以及作用细胞周期的哪一阶段有待进一步研究。
作者简介：蔡鹰，女，32岁，南京中医药大学中药学项士研究生毕业，现丰解放军
第四五四医院工作，任主管药师，从呈新药开发质量标准制订研究工作，近年来从事于抗肿瘤中草药筛选工作，发表论文10余篇.
参考文献
1 蔡鹰，等.中草药，1999，30(6)：441
2 徐叔云，等.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1982：363
3 江苏新医学院编.中药大辞典.上册.上海：上海人民出版社，1977：703
4 陈文侃，等.化学学报，1990，48(7)：501
5 Ye W C, et al. Phytochemistry, 1996，42(3):799
(1999-04-08 收稿, http://www.100md.com
单位：(蔡鹰 陆瑜 梁秉文 余国祥 谢瑛)解放军第四五四医院(南京 210002)；(张能方 亢寿海)江苏省肿瘤医院
关键词：白头翁；抗肿瘤作用；胸腺指数；脾指数
中草药991221 摘 要 以荷S180瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠为模型，研究了白头翁注射液(PWAE)的体内抗肿瘤作用。PWAE有明显的抗体内移植瘤和延长荷瘤小鼠存活期作用，并且PWAE还能降低荷瘤小鼠脾指数，升高胸腺指数，使之趋向正常值。提示PWAE不仅能抑制体内肿瘤生长，还能提高机体的免疫能力。
白头翁为毛茛科植物Pulsatilla chinensis Regel，已发现其水提液(PWE)、醇提液(PAE)在体外能显著抑制7721、HeLa、MKN-45细胞的生长[1]，笔者对其体内抗肿瘤作用进行了实验研究。
, 百拇医药
1 材料
白头翁：本院中药房提供。白头翁水提取2次，4层纱布过滤，滤液浓缩，加入95%酒精使含醇量达70%，置冰箱过夜，取上清液，回收酒精，再配成含醇量80%混悬液，置冰箱过夜，取上清液，回收酒精和水至干，加蒸馏水配成0.5 g生药/mL溶液，3号垂熔漏斗过滤，高温高压灭菌，即为白头翁注射液(PWAE)。环磷酰胺：上海华联制药有限公司产品，批号980612。
S180及艾氏腹水瘤株：江苏省肿瘤医院定期传代瘤株。
昆明种小鼠，18～22 g，购自南京医科大学实验动物中心。
2 方法
2.1 小鼠荷瘤：取接种6 d的S180及艾氏腹水型小鼠腹水，用灭菌生理盐水(1：3)稀释，经右上肢靠右肩甲骨处sc或ip 0.2 mL (4×106～6×106个瘤细胞，活细胞率>95%)，制成实体瘤型或腹水型荷瘤小鼠模型。
, 百拇医药
2.2 药物剂量与给药途径：按实验设计剂量ip(实体瘤型)或im(腹水瘤型)给药，阴性对照组用生理盐水ip或im，阳性对照组用环磷酰胺ip或im，每只小鼠每天用药1次。
2.3 抑瘤率、脾指数和胸腺指数的计算：荷S180实体瘤型小鼠于接种后24 h随机分组，连续给药8 d，8 d后称重、处死，分别取瘤、脾和胸腺，体重，计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数并进行统计学处理[2]。
2.4 存活率的计算：艾氏腹水型小鼠于接种后24 h随机分组，连续给药8 d，停药后继续观察，直到自然死亡，计算其存活延长率。
3 结果
3.1 对荷S180瘤小鼠的抑瘤作用：见表1。
表1 对荷S180小鼠肿瘤的抑制作用(
±s) 组别, 百拇医药
剂量
(g生药/kg.d)
动物数
(只)
体重变化(g)
瘤重
抑瘤率
疗前
疗后
对照
-
15
19.4±1.8
, http://www.100md.com
28.9±0.7
2.47±1.02
0
PWAE
3
12
19.5±0.9
27.1±0.5
0.91±0.49
63.2**
1
12
, http://www.100md.com 19.1±0.6
28.2±0.4
1.33±1.26
46.2**
0.3
12
18.9±1.3
29.4±0.8
1.91±0.47
22.6*
环磷酰胺
0.01
, http://www.100md.com
12
19.3±0.7
29.6±1.3
1.03±0.57
58.3**
与对照组相比：*P<0.05 **P<0.013.2 对艾氏腹水型小鼠存活期的影响:见表2。
表2 对艾氏腹水型小鼠存活期的影响(
±s) 组 别剂量
(g生药/kg.d)
, 百拇医药
动物数
(只)
存活
(d)
延长率
(%)
对照
-
14
12.57±1.21
0
PWAE
3
, 百拇医药
10
18.60±0.76
48.0**△
1
10
17.40±1.32
38.4**
0.3
10
14.70±0.54
16.9*
环磷酰胺
, 百拇医药
0.01
10
16.30±0.87
29.7**
与对照组相比：*P<0.05 **P<0.01
与环磷酰胺组相比：△P<0.05
3.3 对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响：见表3。结果表明，PWAE 3 g生药/kg.d有明显抑瘤作用(63.2 %)，且能明显延长艾氏腹水型小鼠的存活期(48.0 %)，随着剂量减小，抑瘤率和存活期也减小。PWAE 3 g生药/kg.d与阳性对照组环磷酰胺组相比，抑瘤率与后者(58.3 %)相近(P>0.05)，存活期延长率比后者(29.7 %)高(P<0.05)。小鼠荷瘤后，引起免疫指标不正常，表现为脾指数升高，为正常鼠的198.1 %，胸腺指数下降，为正常鼠的56.5 %，PWAE不同剂量组均能使荷瘤小鼠脾指数降低，胸腺指数升高，向正常值靠拢。3 g生药/kg.d剂量组降低脾指数最显著(127.8 %)，与对照组相比有显著差异(P<0.01)，与环磷酰胺组相比无显著差异(P>0.05)。1 g生药/kg.d剂量组上升胸腺指数最显著，与对照组相比有显著差异(P<0.01)，与环磷酰胺组(69.4 %)相比有显著差异(P<0.01)，说明其效果比后者强。综上所述，PWAE不仅能抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，延长小鼠生命，而且有改善荷瘤小鼠免疫机能的作用。
, 百拇医药
表3 对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响(
±s) 组 别剂 量
(g生药/kg.d)
动物数
(只)
脾指数
比率＃
(%)
胸腺指数
比率＃＃
, 百拇医药
(%)
正常组
-
12
6.76±0.58
2.32±0.43
对照
-
18
13.39±0.45
198.1
1.31±0.57
56.5
, 百拇医药
PWAE
3
12
8.63±0.62*
127.8
1.70±0.95
73.3
1
12
9.86±0.52
145.9
1.92±0.24△*
, 百拇医药
78.6
0.3
12
10.23±1.36
151.3
1.55±0.37
66.8
环磷酰胺
0.01
12
9.32±0.87
137.9
1.61±0.69
, 百拇医药
69.4
＃空白对照组、各用药组与正常组脾指数比率； ##空白对照组、各用药组与正常组胸腺指数比率。
与对照组相比：*P<0.01；与环磷酰胺组相比：△P<0.01
4 讨论
4.1 白头翁含皂苷，虽然有报道白头翁煎剂及白头翁皂苷毒性都很低，后者溶血指数仅1∶666[3]，考虑到用药安全性，故实验时暂未采用静脉给药。由于笔者在白头翁体外抗肿瘤实验研究[1]时，发现白头翁抗肿瘤活性成分易溶于水，亦能溶于醇，所以，采用水提醇沉法制成注射剂腹腔给药观察其抗移植瘤作用。口服给药是否有效有待于进一步研究。
4.2 有报道白头翁皂苷A3 100 μg/mL在体外对P388细胞有抑制生长作用(抑制率53.7 %)，白头翁粉末乙醇提取物经乙醚脱脂、脱色素后，分别用乙酸乙酯及正丁醇萃取，得到皂苷A和B[4]，故笔者曾用白头翁乙酸乙酯(50，10，5 g生药/kg.d)、正丁醇(12.5，5，1.25 g生药/kg.d)提取物ip给药未发现有明显抗S180移植瘤作用。说明其体内有效抗肿瘤成分不是白头翁皂苷A，B。还有报道从白头翁根中提取到一种新的多环烷类三萜酸：白头翁酸，并且体外实验结果表明白头翁酸有抗P388、Lewis肺癌和人大细胞肺癌的作用[5]，本实验水提醇沉提取物有效，至少说明抗肿瘤成分极性较大，是否是白头翁酸有待进一步证实。
, http://www.100md.com
4.3 体外实验结果[1]提示PAE、PWE有直接杀灭瘤细胞的作用，体内实验结果则说明PWAE还能通过提高机体免疫力来达到抗肿瘤作用。至于其具体作用机制以及作用细胞周期的哪一阶段有待进一步研究。
作者简介：蔡鹰，女，32岁，南京中医药大学中药学项士研究生毕业，现丰解放军
第四五四医院工作，任主管药师，从呈新药开发质量标准制订研究工作，近年来从事于抗肿瘤中草药筛选工作，发表论文10余篇.
参考文献
1 蔡鹰，等.中草药，1999，30(6)：441
2 徐叔云，等.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1982：363
3 江苏新医学院编.中药大辞典.上册.上海：上海人民出版社，1977：703
4 陈文侃，等.化学学报，1990，48(7)：501
5 Ye W C, et al. Phytochemistry, 1996，42(3):799
(1999-04-08 收稿, http://www.100md.com