血清脯肽酶与肝纤维化
作者：胡大荣 杨伟
单位：胡大荣 (中国人民解放军北京军区总医院肝病研究所 北京市 100700)； 杨 伟 (中国人民解放军89医院 山东省潍坊市 261000)
关键词：肝硬化/诊断；肝炎/诊断；脯肽酶
世界华人消化杂志991239 中国图书馆分类号 R575.2
Subject headings liver cirrhosis/diagnosis; hepatitis/diagnosis
脯肽酶(PLD)参与胶原蛋白降解，是反映肝纤维化进展的良好指标[1].血清PLD测定已被《病毒性肝炎防治方案》推荐为慢性肝病常规检测项目[2].本文在已报道的基础上[3]，进一步评价PLD在慢性肝病诊断中的意义.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 昆明小鼠130只，鼠龄8wk～10wk，体质量25g～40g.肝纤维化模型采用间断腹腔注射CCl4建立.采集血液和肝组织标本在末次注射CCl4后96h进行.根据注射CCl4周数(1，3，6，9，12wk)分5组，每组20只.另30只以生理盐水替代CCl4作正常对照(对照组).测定血清PLD及ALT水平.参照Schvacz标准对肝纤维化分级[4].Ⅰ级：无明显胶原纤维和成纤维细胞增生；Ⅱ级：胶原纤维由汇管区或中央静脉向外轻度延伸，成纤维细胞轻度增生；Ⅲ级：为假小叶雏型形成，成纤维细胞活跃增生；Ⅳ级：典型假小叶形成.Ⅰ～Ⅳ级分别计1～4分.根据分级计算各组肝纤维化总积分(Tf)和平均积分(Mf).Mf=Tf/n(n为每组动物数).
1.2 临床应用 轻度慢性肝炎127例，中度慢性肝炎456例，肝硬变241例，分别提供184例、796和639份共1619份血标本.164例诊断经组织学证实，其中132例进行了纤维染色，评定其纤维化程度.测定患者PLD，ALT和部分患者的HA和PCⅢ水平.
, 百拇医药
统计学处理 均数比较t检验，百分率比较χ2检验，相关性分析相关检验.
2 结果
2.1 动物模型 肝硬变的形成分3个阶段，1wk～6wk为胶原纤维增生阶段，6wk～9wk为肝硬变雏型形成阶段，9wk～12wk为典型肝硬变阶段.各时相点的PLD和ALT及肝纤维化分级评定结果见表1.
表1 血清PLD，ALT水平及肝纤维化分级 (
±s,U/L) 组别
n
PLD(±s)
, 百拇医药 ALT(±s)
肝纤维化(级)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Tf
Mf
对照组
30
1042.4±287.2
14.2±8.6
, 百拇医药
30
—
—
—
30
1.00
wk1
18
1663.3±296.0a
110.6±59.4b
4
14
—
, 百拇医药
—
32
1.78
wk3
17
2409.9±249.1b
22.9±43.5b
—
2
15
—
49
2.88
, 百拇医药
wk6
17
2305.6±393.5b
132.1±24.0b
—
1
15
1
50
2.94
wk9
17
1452.2±187.4
, 百拇医药
99.4±3.5b
—
—
2
15
66
3.88
wk12
19
1427.1±244.8
115.9±20.1b
—
, http://www.100md.com —
—
19
76
4.00
n为动物数，12只中途死亡未列入统计. aP<0.05，bP<0.01，vs对照组.
PLD变化与Mf呈“剪刀差”改变，6wk前PLD随Mf增加而升高；6wk后Mf继续增加，而PLD逐渐降至正常.ALT在各阶段均明显升高.
2.2 临床应用 患者PLD及ALT测定结果见表2.
表2 患者PLD及ALT的同步检测结果 (±s,%) 组别
, 百拇医药
n
PLD (U/L)
ALT (U/L)
健康人
168
986.9±213.3
1.2
25.4±5.7
0
轻度慢性肝炎
184
1572.5±256.7b
, http://www.100md.com
77.3
112.5±23.7b
85.2
中度慢性肝炎
769
2476.5±310.4b
93.3
150.6±45.3b
96.4
肝炎肝硬变
639
2238.3±413.4b
, 百拇医药
63.4a
30.4±15.8
26.4
aP<0.05，vs ALT异常率；bP<0.01，vs健康人.%为异常率.
各组PLD均显著升高，中度慢性肝炎和肝硬变组PLD显著高于轻度慢性肝炎组.肝硬变组PLD异常率明显高于ALT.
2.3 PLD水平与肝纤维化程度 结果见表3.
表3 患者PLD水平与肝纤维化程度 (±s,%) 纤维化(期)
n
, 百拇医药
PLD(U/L)
1
17
1787.9±210.4b
47.5
2
34
2079.5±215.3b
57.8
3
40
2453.4±203.7b
, 百拇医药
92.3
4
41
1024.3±235.8
8.7
bP<0.01，vs 健康人(986.9±213.3). %为异常率.
PLD随纤维化进展而升高，但当肝硬变形成时(4期)，PLD降至正常.
2.4 PLD变化与HA和PCⅢ的相关性分析 结果见表4.
表4 PLD变化与HA及PCⅢ水平的相关性分析 组别
n
, 百拇医药
HA(μg/L)
PCⅢ(μg/L)
PLD(U/L)±s±s
r1
P±s
r2
P
健康人
30
, 百拇医药
52.4±20.5
—
—
89.7±23.4
—
—
1917.6±250.3
轻度慢性肝炎
24
210.5±147.6
0.384
>0.05
197.8±87.6
, 百拇医药
0.363
>0.05
1687.3±231.2
中度慢性肝炎
61
287.4±119.6
0.359
<0.01
242.3±101.2
0.432
<0.01
2276.6±340.7
, 百拇医药
肝炎肝硬变
45
547.3±125.8
0.412
<0.01
314.7±88.5
0.441
<0.01
2554.9±403.3
其中32例肝纤维化分级为3期；r1,r2分别代表HA和PCⅢ与PLD的相关系数.
患者HA，PCⅢ及PLD均高于健康人(P<0.01)，升高幅度均以肝硬变组最高.除轻度慢性肝炎组外，中度慢性肝炎及肝硬变组HA和PCⅢ的变化与PLD的变化均呈显著正相关.
, 百拇医药
3 讨论
开展特异性好、易推广的肝纤维化生化指标一直为临床所关注.在与之相关的报道中，多集中在反映胶原蛋白合成指标的研究，而研究反映降解的生化指标甚少.动物采血时间是在末次注射CCl4后96h，约2倍于PLD的血浆T1/2，因此PLD升高并非CCl4肝毒性所致，而与胶原蛋白的合成和降解增加有关.wk1末PLD开始升高，肝内出现胶原纤维和成纤维细胞增生，随着注射CCl4时间的延长，胶原纤维和成纤维细胞增生更趋活跃，PLD升至峰值；9wk后典型肝硬变形成，虽Mf继续增加，但PLD却逐渐降至正常.慢性肝病患者PLD与同期肝纤维化程度比较也获得了与动物实验类似的结果，呈4级改变时，PLD无明显变化，表明PLD主要反映肝纤维化的进展，并不反映肝纤维化量的多少.血清HA和PCⅢ测定是目前认为反映肝纤维化进展的较好指标[5].本研究的同步检测结果发现，中度慢性肝炎及肝硬变患者，PLD变化与HA和PCⅢ呈显著正相关，提示PLD与HA，PCⅢ共同组成肝纤维化谱能更准确反映肝纤维化的进展.
, 百拇医药
通讯作者 胡大荣
参考文献
1 Brosset B，Myara I，Fabre M.Plasma prolidase and prolinase activity in alcoholic liver disease.Clin Chim Acta，1988;175:291-296
2 中华医学会.病毒性肝炎防治方案.中华内科杂志，1995；34：788-791
3 胡大荣，李梦东，陈国致.血浆脯肽酶活性测定及其初步应用.中华医学检验杂志，1992；15：270-273
4 Schvacz R，Glaumann H，Weiland O.Survival and histological resolution of fibrosis in patients with autoimmune chronic active hepatitis.J Hepatol，1993;18:15-23
5 王宝恩.肝纤维化的诊断与严重度评估.中华肝脏病杂志，1998；6：193-194
收稿日期 1999-07-11 修回日期 1999-11-08, http://www.100md.com
单位：胡大荣 (中国人民解放军北京军区总医院肝病研究所 北京市 100700)； 杨 伟 (中国人民解放军89医院 山东省潍坊市 261000)
关键词：肝硬化/诊断；肝炎/诊断；脯肽酶
世界华人消化杂志991239 中国图书馆分类号 R575.2
Subject headings liver cirrhosis/diagnosis; hepatitis/diagnosis
脯肽酶(PLD)参与胶原蛋白降解，是反映肝纤维化进展的良好指标[1].血清PLD测定已被《病毒性肝炎防治方案》推荐为慢性肝病常规检测项目[2].本文在已报道的基础上[3]，进一步评价PLD在慢性肝病诊断中的意义.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 昆明小鼠130只，鼠龄8wk～10wk，体质量25g～40g.肝纤维化模型采用间断腹腔注射CCl4建立.采集血液和肝组织标本在末次注射CCl4后96h进行.根据注射CCl4周数(1，3，6，9，12wk)分5组，每组20只.另30只以生理盐水替代CCl4作正常对照(对照组).测定血清PLD及ALT水平.参照Schvacz标准对肝纤维化分级[4].Ⅰ级：无明显胶原纤维和成纤维细胞增生；Ⅱ级：胶原纤维由汇管区或中央静脉向外轻度延伸，成纤维细胞轻度增生；Ⅲ级：为假小叶雏型形成，成纤维细胞活跃增生；Ⅳ级：典型假小叶形成.Ⅰ～Ⅳ级分别计1～4分.根据分级计算各组肝纤维化总积分(Tf)和平均积分(Mf).Mf=Tf/n(n为每组动物数).
1.2 临床应用 轻度慢性肝炎127例，中度慢性肝炎456例，肝硬变241例，分别提供184例、796和639份共1619份血标本.164例诊断经组织学证实，其中132例进行了纤维染色，评定其纤维化程度.测定患者PLD，ALT和部分患者的HA和PCⅢ水平.
, 百拇医药
统计学处理 均数比较t检验，百分率比较χ2检验，相关性分析相关检验.
2 结果
2.1 动物模型 肝硬变的形成分3个阶段，1wk～6wk为胶原纤维增生阶段，6wk～9wk为肝硬变雏型形成阶段，9wk～12wk为典型肝硬变阶段.各时相点的PLD和ALT及肝纤维化分级评定结果见表1.
表1 血清PLD，ALT水平及肝纤维化分级 (
±s,U/L) 组别n
PLD(
±s), 百拇医药 ALT(
±s)肝纤维化(级)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Tf
Mf
对照组
30
1042.4±287.2
14.2±8.6
, 百拇医药
30
—
—
—
30
1.00
wk1
18
1663.3±296.0a
110.6±59.4b
4
14
—
, 百拇医药
—
32
1.78
wk3
17
2409.9±249.1b
22.9±43.5b
—
2
15
—
49
2.88
, 百拇医药
wk6
17
2305.6±393.5b
132.1±24.0b
—
1
15
1
50
2.94
wk9
17
1452.2±187.4
, 百拇医药
99.4±3.5b
—
—
2
15
66
3.88
wk12
19
1427.1±244.8
115.9±20.1b
—
, http://www.100md.com —
—
19
76
4.00
n为动物数，12只中途死亡未列入统计. aP<0.05，bP<0.01，vs对照组.
PLD变化与Mf呈“剪刀差”改变，6wk前PLD随Mf增加而升高；6wk后Mf继续增加，而PLD逐渐降至正常.ALT在各阶段均明显升高.
2.2 临床应用 患者PLD及ALT测定结果见表2.
表2 患者PLD及ALT的同步检测结果 (
±s,%) 组别, 百拇医药
n
PLD (U/L)
ALT (U/L)
健康人
168
986.9±213.3
1.2
25.4±5.7
0
轻度慢性肝炎
184
1572.5±256.7b
, http://www.100md.com
77.3
112.5±23.7b
85.2
中度慢性肝炎
769
2476.5±310.4b
93.3
150.6±45.3b
96.4
肝炎肝硬变
639
2238.3±413.4b
, 百拇医药
63.4a
30.4±15.8
26.4
aP<0.05，vs ALT异常率；bP<0.01，vs健康人.%为异常率.
各组PLD均显著升高，中度慢性肝炎和肝硬变组PLD显著高于轻度慢性肝炎组.肝硬变组PLD异常率明显高于ALT.
2.3 PLD水平与肝纤维化程度 结果见表3.
表3 患者PLD水平与肝纤维化程度 (
±s,%) 纤维化(期)n
, 百拇医药
PLD(U/L)
1
17
1787.9±210.4b
47.5
2
34
2079.5±215.3b
57.8
3
40
2453.4±203.7b
, 百拇医药
92.3
4
41
1024.3±235.8
8.7
bP<0.01，vs 健康人(986.9±213.3). %为异常率.
PLD随纤维化进展而升高，但当肝硬变形成时(4期)，PLD降至正常.
2.4 PLD变化与HA和PCⅢ的相关性分析 结果见表4.
表4 PLD变化与HA及PCⅢ水平的相关性分析 组别
n
, 百拇医药
HA(μg/L)
PCⅢ(μg/L)
PLD(U/L)
±s±sr1
P
±sr2
P
健康人
30
, 百拇医药
52.4±20.5
—
—
89.7±23.4
—
—
1917.6±250.3
轻度慢性肝炎
24
210.5±147.6
0.384
>0.05
197.8±87.6
, 百拇医药
0.363
>0.05
1687.3±231.2
中度慢性肝炎
61
287.4±119.6
0.359
<0.01
242.3±101.2
0.432
<0.01
2276.6±340.7
, 百拇医药
肝炎肝硬变
45
547.3±125.8
0.412
<0.01
314.7±88.5
0.441
<0.01
2554.9±403.3
其中32例肝纤维化分级为3期；r1,r2分别代表HA和PCⅢ与PLD的相关系数.
患者HA，PCⅢ及PLD均高于健康人(P<0.01)，升高幅度均以肝硬变组最高.除轻度慢性肝炎组外，中度慢性肝炎及肝硬变组HA和PCⅢ的变化与PLD的变化均呈显著正相关.
, 百拇医药
3 讨论
开展特异性好、易推广的肝纤维化生化指标一直为临床所关注.在与之相关的报道中，多集中在反映胶原蛋白合成指标的研究，而研究反映降解的生化指标甚少.动物采血时间是在末次注射CCl4后96h，约2倍于PLD的血浆T1/2，因此PLD升高并非CCl4肝毒性所致，而与胶原蛋白的合成和降解增加有关.wk1末PLD开始升高，肝内出现胶原纤维和成纤维细胞增生，随着注射CCl4时间的延长，胶原纤维和成纤维细胞增生更趋活跃，PLD升至峰值；9wk后典型肝硬变形成，虽Mf继续增加，但PLD却逐渐降至正常.慢性肝病患者PLD与同期肝纤维化程度比较也获得了与动物实验类似的结果，呈4级改变时，PLD无明显变化，表明PLD主要反映肝纤维化的进展，并不反映肝纤维化量的多少.血清HA和PCⅢ测定是目前认为反映肝纤维化进展的较好指标[5].本研究的同步检测结果发现，中度慢性肝炎及肝硬变患者，PLD变化与HA和PCⅢ呈显著正相关，提示PLD与HA，PCⅢ共同组成肝纤维化谱能更准确反映肝纤维化的进展.
, 百拇医药
通讯作者 胡大荣
参考文献
1 Brosset B，Myara I，Fabre M.Plasma prolidase and prolinase activity in alcoholic liver disease.Clin Chim Acta，1988;175:291-296
2 中华医学会.病毒性肝炎防治方案.中华内科杂志，1995；34：788-791
3 胡大荣，李梦东，陈国致.血浆脯肽酶活性测定及其初步应用.中华医学检验杂志，1992；15：270-273
4 Schvacz R，Glaumann H，Weiland O.Survival and histological resolution of fibrosis in patients with autoimmune chronic active hepatitis.J Hepatol，1993;18:15-23
5 王宝恩.肝纤维化的诊断与严重度评估.中华肝脏病杂志，1998；6：193-194
收稿日期 1999-07-11 修回日期 1999-11-08, http://www.100md.com