炎症性肠病患者外周血可溶性CD44v6检测
作者：江学良 权启镇 孙自勤 王要军 齐风 王东 张修礼
单位：中国人民解放军济南军区总医院消化科 山东省济南市 250031
关键词：结肠炎，溃疡性/诊断；克隆病/诊断
世界华人消化杂志991225
中国图书馆分类号 R574.62
Subject headings colitis，ulcerative/diagnosis; Crohn disease/diagnosis; CD44V6/analysis
1 材料和方法
1.1 材料 溃疡性结肠炎(UC)患者34例，男14例，女20例，平均年龄31.4岁，均符合1993年太原全国慢性非感染性肠道疾病学术研讨会制订的溃疡性结肠炎诊断标准.其中轻度16例，中度10例，重度8例，有16例患者近期用过皮质激素(泼尼松或地塞米松)治疗.克隆病(CD)8例，男6例，女2例，平均年龄32.3岁，2例患者近期用过皮质激素治疗.正常人对照组20例，男8例，女12例，平均年龄30.6岁，均为健康查体者.异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人CD44V6(CD44V6-FITC，同种荧光素标记的阴性对照羊抗鼠IgG1-FITC均由法国国际免疫公司生产；淋巴细胞分离液由中国医学科学院血液研究所生产.流式细胞仪为FACScan型，美国Becton Dickinson生产.
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1.2 方法 晨取肘静脉血2mL，20g/L EDTA抗凝(抗凝剂∶血=1∶9)，悬浮于淋巴细胞分离液上，1500r/min离心15min，提取其中的淋巴细胞，加PBS 2mL漂洗，同速离心弃上清，备用.免疫反应前调整细胞数至1012/L，分取100μL放入2支试管内，试管内分别加20μL CD44V6-FITC和IgG1-FITC，室温避光反应30min，上机前先以标准荧光微球调整仪器变异系数在2.0%以内，上机后收集10000个细胞，荧光强度以对数放大，测定光散射数据，结果采用Macintosh 650型计算机及Cell Quest Plot软件进行数据分析，以阳性细胞百分数表示.
统计学处理 采用两样本均数的t检验和等级资料的Ridit分析.
2 结果
UC患者CD44V6(4.84%±1.62%)与正常人(5.16%±2.11%)及CD患者(5.09%±1.87%)相比差异无显著性(P>0.05)；UC患者CD44V6在轻度(4.91%±1.23%)，中度(4.86%±1.19%)及重度(4.77%±1.13%)之间表达也无显著性差异(P>0.05).
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3 讨论
CD44分子最初由Dzlchau于1980年用单克隆抗体确定并描述，是淋巴细胞归巢受体，其基因定位于11号染色体短臂上.由于基因转录过程中mRNA选择性剪接而形成标准型CD44及变异型CD44(V1～10)，主要参与淋巴细胞归巢，上皮细胞增生，肿瘤转移和非霍奇金淋巴瘤分型等.炎症性肠病患者肠活检组织中标准型CD44及变异型CD44V6，V3表达已有研究[1-6]，Rosenberg et al[6]发现CD44V6及V3在UC患者中有高强度表达，而CD患者则无，认为这有助于区别这两种疾病，并可作为一个重要的鉴别诊断指标，而Reinisch et al[2]则认为CD44V6表达与结肠粘膜隐窝上皮细胞增生有关，而非特异性改变，不能作为CD和UC鉴别诊断指标.由于肠活检标本只有通过介入性方法才可获得，另外CD44原位检测是一种复杂而昂贵的技术方法，并且对免疫组化获得结果的解释有一定的主观性，为了避免这些问题，我们采用灵敏先进的流式细胞技术，以单克隆抗体作分子探针，检测了血液中循环的可溶性CD44V6，观察其是否对UC和CD的鉴别诊断有一定帮助.结果提示，CD44V6在UC和CD患者中的表达无显著性差异，不足以作为二者鉴别诊断指标，而且可溶性CD44V6在轻中重度UC患者中的表达也无显著性差异，说明其与炎症程度无关.这些结果的差异可能与抗体不同，检测方法不一致及是否应用皮质激素治疗等多因素有关，对其临床意义还需做进一步研究.
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致谢 本研究得到本院流式细胞室尹格平博士及孙晓明主管技师的帮助，特此致谢!
通讯作者 江学良
参考文献
1 江学良，权启镇，孙自勤，王要军，齐风.溃疡性结肠炎患者粘附分子表达的变化.华人消化杂志，1998；6：54-55
2 Reinisch W，Heider KH，Oberhuber G，Dejaco C，Mullner M，Adolf GR，Gasche C.Poor diagnostic value of colonic CD44V6 expression and serum concentrations of its soluble form in the differentiation of ulcerative colitis from Crohn＇s disease.Gut，1998;43:375-382
, 百拇医药
3 Fromont Hankard G，Cezard JP，Aigrain Y，Navarro J，Peuchmaur M.CD44 variant expression in inflammatory colonic mucosa is not disease specific but associated with increased cyprt cell proliferation.Histopathology，1998;32:317-321
4 Rogler G，Andus T，Aschenbrenner E，Vogl D，Falk W，Scholmerich J，Gross V.Alterations of the phenotype of colonic macrophages in inflammatory bowel disease.Eur J Gastroenterol Hepatol，1997;9:893-899
5 Papadogiannakis N，Gad A，Chenard MP，Bellocq JP，Duclos B.Expression of CD44 variants in differential diagnosis of ulcerative colitis and Crohn＇s disease.Lancet，1996;347:1413-1414
6 Rosenberg WM，Prince C，Kaklamanis L，Fox SB，Jackson DG，Simmons DL，Chapman RW，Trowell JM，Jewell DP，Bell JI.Increased expression of CD44V6 and CD44V3 in ulcerative colitis but not colonic Crohn＇s disease.Lancet，1995;345:1205-1209
收稿日期 1999-09-22, 百拇医药
单位：中国人民解放军济南军区总医院消化科 山东省济南市 250031
关键词：结肠炎，溃疡性/诊断；克隆病/诊断
世界华人消化杂志991225
中国图书馆分类号 R574.62
Subject headings colitis，ulcerative/diagnosis; Crohn disease/diagnosis; CD44V6/analysis
1 材料和方法
1.1 材料 溃疡性结肠炎(UC)患者34例，男14例，女20例，平均年龄31.4岁，均符合1993年太原全国慢性非感染性肠道疾病学术研讨会制订的溃疡性结肠炎诊断标准.其中轻度16例，中度10例，重度8例，有16例患者近期用过皮质激素(泼尼松或地塞米松)治疗.克隆病(CD)8例，男6例，女2例，平均年龄32.3岁，2例患者近期用过皮质激素治疗.正常人对照组20例，男8例，女12例，平均年龄30.6岁，均为健康查体者.异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人CD44V6(CD44V6-FITC，同种荧光素标记的阴性对照羊抗鼠IgG1-FITC均由法国国际免疫公司生产；淋巴细胞分离液由中国医学科学院血液研究所生产.流式细胞仪为FACScan型，美国Becton Dickinson生产.
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1.2 方法 晨取肘静脉血2mL，20g/L EDTA抗凝(抗凝剂∶血=1∶9)，悬浮于淋巴细胞分离液上，1500r/min离心15min，提取其中的淋巴细胞，加PBS 2mL漂洗，同速离心弃上清，备用.免疫反应前调整细胞数至1012/L，分取100μL放入2支试管内，试管内分别加20μL CD44V6-FITC和IgG1-FITC，室温避光反应30min，上机前先以标准荧光微球调整仪器变异系数在2.0%以内，上机后收集10000个细胞，荧光强度以对数放大，测定光散射数据，结果采用Macintosh 650型计算机及Cell Quest Plot软件进行数据分析，以阳性细胞百分数表示.
统计学处理 采用两样本均数的t检验和等级资料的Ridit分析.
2 结果
UC患者CD44V6(4.84%±1.62%)与正常人(5.16%±2.11%)及CD患者(5.09%±1.87%)相比差异无显著性(P>0.05)；UC患者CD44V6在轻度(4.91%±1.23%)，中度(4.86%±1.19%)及重度(4.77%±1.13%)之间表达也无显著性差异(P>0.05).
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3 讨论
CD44分子最初由Dzlchau于1980年用单克隆抗体确定并描述，是淋巴细胞归巢受体，其基因定位于11号染色体短臂上.由于基因转录过程中mRNA选择性剪接而形成标准型CD44及变异型CD44(V1～10)，主要参与淋巴细胞归巢，上皮细胞增生，肿瘤转移和非霍奇金淋巴瘤分型等.炎症性肠病患者肠活检组织中标准型CD44及变异型CD44V6，V3表达已有研究[1-6]，Rosenberg et al[6]发现CD44V6及V3在UC患者中有高强度表达，而CD患者则无，认为这有助于区别这两种疾病，并可作为一个重要的鉴别诊断指标，而Reinisch et al[2]则认为CD44V6表达与结肠粘膜隐窝上皮细胞增生有关，而非特异性改变，不能作为CD和UC鉴别诊断指标.由于肠活检标本只有通过介入性方法才可获得，另外CD44原位检测是一种复杂而昂贵的技术方法，并且对免疫组化获得结果的解释有一定的主观性，为了避免这些问题，我们采用灵敏先进的流式细胞技术，以单克隆抗体作分子探针，检测了血液中循环的可溶性CD44V6，观察其是否对UC和CD的鉴别诊断有一定帮助.结果提示，CD44V6在UC和CD患者中的表达无显著性差异，不足以作为二者鉴别诊断指标，而且可溶性CD44V6在轻中重度UC患者中的表达也无显著性差异，说明其与炎症程度无关.这些结果的差异可能与抗体不同，检测方法不一致及是否应用皮质激素治疗等多因素有关，对其临床意义还需做进一步研究.
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致谢 本研究得到本院流式细胞室尹格平博士及孙晓明主管技师的帮助，特此致谢!
通讯作者 江学良
参考文献
1 江学良，权启镇，孙自勤，王要军，齐风.溃疡性结肠炎患者粘附分子表达的变化.华人消化杂志，1998；6：54-55
2 Reinisch W，Heider KH，Oberhuber G，Dejaco C，Mullner M，Adolf GR，Gasche C.Poor diagnostic value of colonic CD44V6 expression and serum concentrations of its soluble form in the differentiation of ulcerative colitis from Crohn＇s disease.Gut，1998;43:375-382
, 百拇医药
3 Fromont Hankard G，Cezard JP，Aigrain Y，Navarro J，Peuchmaur M.CD44 variant expression in inflammatory colonic mucosa is not disease specific but associated with increased cyprt cell proliferation.Histopathology，1998;32:317-321
4 Rogler G，Andus T，Aschenbrenner E，Vogl D，Falk W，Scholmerich J，Gross V.Alterations of the phenotype of colonic macrophages in inflammatory bowel disease.Eur J Gastroenterol Hepatol，1997;9:893-899
5 Papadogiannakis N，Gad A，Chenard MP，Bellocq JP，Duclos B.Expression of CD44 variants in differential diagnosis of ulcerative colitis and Crohn＇s disease.Lancet，1996;347:1413-1414
6 Rosenberg WM，Prince C，Kaklamanis L，Fox SB，Jackson DG，Simmons DL，Chapman RW，Trowell JM，Jewell DP，Bell JI.Increased expression of CD44V6 and CD44V3 in ulcerative colitis but not colonic Crohn＇s disease.Lancet，1995;345:1205-1209
收稿日期 1999-09-22, 百拇医药