失代偿期肝硬化病人的血小板与T细胞活化及内皮细胞损伤的测定及其临床意义
作者：顾静雄 李小雯 唐建英 朱晓红
单位：顾静雄(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)； 李小雯(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)； 唐建英(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)； 朱晓红(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)
关键词：
江苏医药000133 近来我们试图通过对失代偿期肝硬化病人的活化血小板(CD62p)、活化T细胞(CD3+/HLA-DR+)以及血清内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)的测定来探讨重症肝病凝血机制异常的病理原因，报告如下。
一、材料与方法
1.对象：临床确诊为肝硬化失代偿期的住院病人39例，年龄32～73岁；对照组为正常献血员，30例，年龄20～35岁。
, 百拇医药
2.检测方法
1.活化血小板：取新鲜血液的血浆加等量2%的多聚甲醛固定10分钟；1000转离心5分钟，沉淀用PBS(0.01mol/L PB，7.93g/L NaCl，0.04g/L KCl)溶解，洗涤离心，最后PBS溶解，调正细胞浓度106/ml；取100μl细胞悬液加20μl荧光标记CD62p抗体(pharmingen)，室温反应30分钟，加1ml PBS震荡洗涤，1000转离心5分钟，加PBS溶解，流式细胞仪检测。
2.活化T细胞：取100μl全血加20μl荧光标记抗体(PHARMINGEN)，室温反应15分钟，加500μl Opitlyte-C(COULTER)裂解红细胞，加1ml PBS震荡洗涤，1000转离心5分钟，加PBS溶解，流式细胞仪检测。
3.ET-1、CGRP：取静脉血2ml，加10%EDTA二钠30μl和抑肽酶40μl，4℃，3000rpm离心10min，取血浆；用放免试剂盒(ET RIA Kit北京东亚免疫技术研究所)均相竞争法直接测定ET、CGRP含量。
, 百拇医药
3.结果统计：结果采用t检验统计分析。
二、结果
检测结果表明失代偿期肝硬化病人的血小板CD62p、活化T细胞CD+3/HLA-DR+比例显著升高(P<0.001)，血清内皮素-1(ET-1)明显增高(P<0.001)，血清降钙素基因相关肽(CGRP)明显降低(P<0.001)(见表1)。
表1 失代偿期肝硬化病人的CD62p、CD+3/HLA-DR+、ET-1、CGRP的测定
CD62p(%)
CD+3/HLA-DR+(%)
ET-1(pg/ml)
, 百拇医药
CGRP(pg/ml)
肝硬化病人
18.00±8.80***
20.83±10.33***
82.21±45.12***
62.17±36.11***
正常对照
1.37±0.54
11.35±4.60
53.64±14.16
, 百拇医药
117.10±33.80
注：与正常对照比 ***P<0.001
三、讨论
肝病患者凝血功能减弱，造成出血是临床常见症状，这主要是由于病人肝细胞受损，产生的凝血因子减少等病理原因引起的。然而在重症肝病患者如失代偿期肝硬化病人肝脏也存在血管微循环障碍，有些甚至会并发DIC。这除了外界引发因素外，可能与病人机体白细胞、血小板的活化及肝脏血管的损伤和舒张调节异常有关。
从本文的检测结果来看，失代偿期肝硬化病人的血小板、白细胞显著活化(P<0.001)，而血清内皮素明显升高(P<0.001)，降钙素基因相关肽明显降低(P<0.001)。血小板活化有利于粘附到损伤的血管内皮并发生聚集，引发血栓；白细胞活化除了与肝脏炎性病变的发生发展有关外，也有利于血栓的形成；而内皮素-1是内皮细胞损伤的标记物，肝硬化病人的血清内皮素-1显著升高表明其肝脏的血管内皮严重受损，受损的血管内皮不但是血小板聚集和形成血栓的位点，而且内皮素-1引起的血管严重收缩也是微循环障碍及易发生血栓的原因之一；降钙素基因相关肽是内源性血管舒张物质，它可通过舒张血管来保护血管内皮细胞不受损伤，病人血清降钙素基因相关肽的降低造成血管舒张不良，血管内皮更易受损，这也是失代偿期肝硬化病人血管循环不良，易发生血栓的病因之一。
综上所述，失代偿期肝硬化病人的这些病理、生理的改变可能是其微循环障碍以及发生DIC的重要原因。■, http://www.100md.com
单位：顾静雄(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)； 李小雯(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)； 唐建英(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)； 朱晓红(214002 无锡市第一人民医院中心实验室)
关键词：
江苏医药000133 近来我们试图通过对失代偿期肝硬化病人的活化血小板(CD62p)、活化T细胞(CD3+/HLA-DR+)以及血清内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)的测定来探讨重症肝病凝血机制异常的病理原因，报告如下。
一、材料与方法
1.对象：临床确诊为肝硬化失代偿期的住院病人39例，年龄32～73岁；对照组为正常献血员，30例，年龄20～35岁。
, 百拇医药
2.检测方法
1.活化血小板：取新鲜血液的血浆加等量2%的多聚甲醛固定10分钟；1000转离心5分钟，沉淀用PBS(0.01mol/L PB，7.93g/L NaCl，0.04g/L KCl)溶解，洗涤离心，最后PBS溶解，调正细胞浓度106/ml；取100μl细胞悬液加20μl荧光标记CD62p抗体(pharmingen)，室温反应30分钟，加1ml PBS震荡洗涤，1000转离心5分钟，加PBS溶解，流式细胞仪检测。
2.活化T细胞：取100μl全血加20μl荧光标记抗体(PHARMINGEN)，室温反应15分钟，加500μl Opitlyte-C(COULTER)裂解红细胞，加1ml PBS震荡洗涤，1000转离心5分钟，加PBS溶解，流式细胞仪检测。
3.ET-1、CGRP：取静脉血2ml，加10%EDTA二钠30μl和抑肽酶40μl，4℃，3000rpm离心10min，取血浆；用放免试剂盒(ET RIA Kit北京东亚免疫技术研究所)均相竞争法直接测定ET、CGRP含量。
, 百拇医药
3.结果统计：结果采用t检验统计分析。
二、结果
检测结果表明失代偿期肝硬化病人的血小板CD62p、活化T细胞CD+3/HLA-DR+比例显著升高(P<0.001)，血清内皮素-1(ET-1)明显增高(P<0.001)，血清降钙素基因相关肽(CGRP)明显降低(P<0.001)(见表1)。
表1 失代偿期肝硬化病人的CD62p、CD+3/HLA-DR+、ET-1、CGRP的测定
CD62p(%)
CD+3/HLA-DR+(%)
ET-1(pg/ml)
, 百拇医药
CGRP(pg/ml)
肝硬化病人
18.00±8.80***
20.83±10.33***
82.21±45.12***
62.17±36.11***
正常对照
1.37±0.54
11.35±4.60
53.64±14.16
, 百拇医药
117.10±33.80
注：与正常对照比 ***P<0.001
三、讨论
肝病患者凝血功能减弱，造成出血是临床常见症状，这主要是由于病人肝细胞受损，产生的凝血因子减少等病理原因引起的。然而在重症肝病患者如失代偿期肝硬化病人肝脏也存在血管微循环障碍，有些甚至会并发DIC。这除了外界引发因素外，可能与病人机体白细胞、血小板的活化及肝脏血管的损伤和舒张调节异常有关。
从本文的检测结果来看，失代偿期肝硬化病人的血小板、白细胞显著活化(P<0.001)，而血清内皮素明显升高(P<0.001)，降钙素基因相关肽明显降低(P<0.001)。血小板活化有利于粘附到损伤的血管内皮并发生聚集，引发血栓；白细胞活化除了与肝脏炎性病变的发生发展有关外，也有利于血栓的形成；而内皮素-1是内皮细胞损伤的标记物，肝硬化病人的血清内皮素-1显著升高表明其肝脏的血管内皮严重受损，受损的血管内皮不但是血小板聚集和形成血栓的位点，而且内皮素-1引起的血管严重收缩也是微循环障碍及易发生血栓的原因之一；降钙素基因相关肽是内源性血管舒张物质，它可通过舒张血管来保护血管内皮细胞不受损伤，病人血清降钙素基因相关肽的降低造成血管舒张不良，血管内皮更易受损，这也是失代偿期肝硬化病人血管循环不良，易发生血栓的病因之一。
综上所述，失代偿期肝硬化病人的这些病理、生理的改变可能是其微循环障碍以及发生DIC的重要原因。■, http://www.100md.com