阿霉素对小鼠骨髓和外周血红细胞微核率的影响
作者：付小锁 颜宜茞 韩丽
单位：付小锁(北京职工医学院生理教研室 邮政编码100036)；颜宜茞(北京职工医学院生理教研室 邮政编码100036)；韩丽(内蒙古巴盟马拉特前旗妇幼保健医院)
关键词：
北京医学000135 自骨髓和外周血微核试验建立以来，由于其试验操作简单，又可做连续地动态观察，因而已被广泛地作为检测体细胞染色体畸变的常规手法。阿霉素是一种新型的强力抗癌药物，其作用机制是镶嵌在肿瘤细胞的DNA分子之间形成复合物，抑制DNA的复制及RNA的转录，同时还可在体内产生自由基，对肿瘤起杀伤作用。但目前所知，一般的抗肿瘤药物如环磷酰胺、丝裂霉素等都有诱发体细胞染色体畸变的毒副作用，已有研究报道，阿霉素也具有致畸变效应。本实验通过观察阿霉素对小鼠外周血嗜多染红细胞(PCE)、正染红细胞(NCE)及骨髓PCE微核率的影响，证实其有致染色体畸变效应。
, 百拇医药
材料和方法
阿霉素为广东汕头明治医药有限公司产品，使用时用蒸馏水配制。
动物选用健康昆明小鼠，体重20～25g。将动物随机分为12组，每组8只，雌雄各半。第1组腹腔注射蒸馏水做对照，第2～5组分别按每公斤2.0、2.5、3.0、3.5mg腹腔注射阿霉素，间隔12小时后再注射一次，24小时后断尾取血10μl，加等量灭活小牛血清混匀后推制外周血片，然后用断颈法处死动物，分离其股骨，按常规方法制备骨髓片，甲醇固定后Giemsa染色。第6组动物腹腔注射蒸馏水，第7～12组动物，按每公斤体重2.5mg，两次注射阿霉素(间隔12小时)，分别在24、48、72、96、120及144小时后断尾取血和处死取股骨，按上述方法制备外周血片和骨髓片，在油镜下分别计数每只动物骨髓PCE和外周血PCE、NCE各1 000个，再分别统计其微核发生率，结果以平均值±标准差表示。
统计方法按泊松分布进行U检验，P<0.05为有统计学意义。
, 百拇医药
结 果
本实验首先观察了不同剂量的阿霉素两次染毒小鼠后，其骨髓PCE和外周血PCE及NCE中微核率的变化。结果显示，不同剂量的阿霉素均可引起骨髓PCE和外周血PCE中微核率明显升高，与对照组相比，有极显著性差异，且微核率与给药量呈剂量相关。但在每一剂量中，外周血NCE微核率升高不明显(P>0.05)。
本实验还观察了阿霉素(2.5mg/kg)两次染毒小鼠后，在不同时间骨髓PCE、外周血PCE及NCE微核率的发生情况。结果表明，小鼠染毒24小时后，骨髓PCE、外周血PCE的微核率明显升高，48小时达最高值，其后随时间推移又逐渐降低。但即使6天后，也明显高于对照组。而外周血NCE微核率最初升高并不明显(P>0.05)，以后随时间推移逐渐升高，76小时后明显高于对照组，至第6天甚至超过外周血PCE微核率。
小鼠外周血PCE微核率在48小时与骨髓PCE微核率相近，然后两者几乎平行下降，但骨髓PCE微核率始终高于外周血PCE微核率，采用相关性统计学处理，骨髓PCE与外周血PCE微核率的变化呈直线相关，相关系数r=0.96，有高度显著性(P<0.01)，其回归方程为Y=3.8+1.1X。
, 百拇医药
讨 论
Schlegel于1982年提出小鼠外周血中含微核的NCE并不会被选择性地从外周血中清除，含微核的NCE可在外周血中积累，可作为检测慢性染色体损伤的一项指标。Styles等认为，小鼠外周血PCE和骨髓PCE的微核实验敏感性相似，也可作为检测染色体畸变的常规手段，只是外周血PCE中微核率出现峰值的时间比骨髓PCE晚24小时，但其峰值可达到骨髓PCE微核率的最大值。近年来一些学者用平阳霉素、丝裂霉素及环磷酰胺诱导小鼠骨髓及外周血PCE的微核，都得出了类似结果。
阿霉素又称羟基柔红霉素，得自松链丝菌浅灰色变株的培养液中，其对多种实验肿瘤都有杀伤作用，且毒性较低，化疗指数较高，故临床应用较为普遍。近来有人发现，阿霉素可透过胎盘影响胎儿发育。从本实验结果看，不同剂量的阿霉素均有升高骨髓及外周血PCE中微核率的效应，且与剂量相关，同时在给药后相当时间内(6天)，阿霉素的这种作用仍然存在，提示在临床用药时要注意它的蓄积毒性效应。虽然外周血NCE微核率在各取样时间均较PCE低(第6天除外)，但随染毒时间的延长有持续上升的趋势，说明含微核的NCE可以在外周血中积累。本实验结果还表明，阿霉素染毒小鼠后，骨髓及外周血PCE微核率都明显升高，虽然外周血PCE微核率的升高幅度低于骨髓PCE微核率，但两者的变化却呈高度直线正相关，提示可用外周血PCE微核率的变化来反映骨髓PCE微核率的变化。由于小鼠外周血微核实验与骨髓微核实验相比有许多优点，即操作简便，用血量较少，可以对同一动物连续采样观测，减少实验动物需要量，消除个体变异差别，增加实验结果的一致性，因此是一种切实可行的检测手段。■
收稿日期：1998-03-25
修改日期：1998-10-26, 百拇医药
单位：付小锁(北京职工医学院生理教研室 邮政编码100036)；颜宜茞(北京职工医学院生理教研室 邮政编码100036)；韩丽(内蒙古巴盟马拉特前旗妇幼保健医院)
关键词：
北京医学000135 自骨髓和外周血微核试验建立以来，由于其试验操作简单，又可做连续地动态观察，因而已被广泛地作为检测体细胞染色体畸变的常规手法。阿霉素是一种新型的强力抗癌药物，其作用机制是镶嵌在肿瘤细胞的DNA分子之间形成复合物，抑制DNA的复制及RNA的转录，同时还可在体内产生自由基，对肿瘤起杀伤作用。但目前所知，一般的抗肿瘤药物如环磷酰胺、丝裂霉素等都有诱发体细胞染色体畸变的毒副作用，已有研究报道，阿霉素也具有致畸变效应。本实验通过观察阿霉素对小鼠外周血嗜多染红细胞(PCE)、正染红细胞(NCE)及骨髓PCE微核率的影响，证实其有致染色体畸变效应。
, 百拇医药
材料和方法
阿霉素为广东汕头明治医药有限公司产品，使用时用蒸馏水配制。
动物选用健康昆明小鼠，体重20～25g。将动物随机分为12组，每组8只，雌雄各半。第1组腹腔注射蒸馏水做对照，第2～5组分别按每公斤2.0、2.5、3.0、3.5mg腹腔注射阿霉素，间隔12小时后再注射一次，24小时后断尾取血10μl，加等量灭活小牛血清混匀后推制外周血片，然后用断颈法处死动物，分离其股骨，按常规方法制备骨髓片，甲醇固定后Giemsa染色。第6组动物腹腔注射蒸馏水，第7～12组动物，按每公斤体重2.5mg，两次注射阿霉素(间隔12小时)，分别在24、48、72、96、120及144小时后断尾取血和处死取股骨，按上述方法制备外周血片和骨髓片，在油镜下分别计数每只动物骨髓PCE和外周血PCE、NCE各1 000个，再分别统计其微核发生率，结果以平均值±标准差表示。
统计方法按泊松分布进行U检验，P<0.05为有统计学意义。
, 百拇医药
结 果
本实验首先观察了不同剂量的阿霉素两次染毒小鼠后，其骨髓PCE和外周血PCE及NCE中微核率的变化。结果显示，不同剂量的阿霉素均可引起骨髓PCE和外周血PCE中微核率明显升高，与对照组相比，有极显著性差异，且微核率与给药量呈剂量相关。但在每一剂量中，外周血NCE微核率升高不明显(P>0.05)。
本实验还观察了阿霉素(2.5mg/kg)两次染毒小鼠后，在不同时间骨髓PCE、外周血PCE及NCE微核率的发生情况。结果表明，小鼠染毒24小时后，骨髓PCE、外周血PCE的微核率明显升高，48小时达最高值，其后随时间推移又逐渐降低。但即使6天后，也明显高于对照组。而外周血NCE微核率最初升高并不明显(P>0.05)，以后随时间推移逐渐升高，76小时后明显高于对照组，至第6天甚至超过外周血PCE微核率。
小鼠外周血PCE微核率在48小时与骨髓PCE微核率相近，然后两者几乎平行下降，但骨髓PCE微核率始终高于外周血PCE微核率，采用相关性统计学处理，骨髓PCE与外周血PCE微核率的变化呈直线相关，相关系数r=0.96，有高度显著性(P<0.01)，其回归方程为Y=3.8+1.1X。
, 百拇医药
讨 论
Schlegel于1982年提出小鼠外周血中含微核的NCE并不会被选择性地从外周血中清除，含微核的NCE可在外周血中积累，可作为检测慢性染色体损伤的一项指标。Styles等认为，小鼠外周血PCE和骨髓PCE的微核实验敏感性相似，也可作为检测染色体畸变的常规手段，只是外周血PCE中微核率出现峰值的时间比骨髓PCE晚24小时，但其峰值可达到骨髓PCE微核率的最大值。近年来一些学者用平阳霉素、丝裂霉素及环磷酰胺诱导小鼠骨髓及外周血PCE的微核，都得出了类似结果。
阿霉素又称羟基柔红霉素，得自松链丝菌浅灰色变株的培养液中，其对多种实验肿瘤都有杀伤作用，且毒性较低，化疗指数较高，故临床应用较为普遍。近来有人发现，阿霉素可透过胎盘影响胎儿发育。从本实验结果看，不同剂量的阿霉素均有升高骨髓及外周血PCE中微核率的效应，且与剂量相关，同时在给药后相当时间内(6天)，阿霉素的这种作用仍然存在，提示在临床用药时要注意它的蓄积毒性效应。虽然外周血NCE微核率在各取样时间均较PCE低(第6天除外)，但随染毒时间的延长有持续上升的趋势，说明含微核的NCE可以在外周血中积累。本实验结果还表明，阿霉素染毒小鼠后，骨髓及外周血PCE微核率都明显升高，虽然外周血PCE微核率的升高幅度低于骨髓PCE微核率，但两者的变化却呈高度直线正相关，提示可用外周血PCE微核率的变化来反映骨髓PCE微核率的变化。由于小鼠外周血微核实验与骨髓微核实验相比有许多优点，即操作简便，用血量较少，可以对同一动物连续采样观测，减少实验动物需要量，消除个体变异差别，增加实验结果的一致性，因此是一种切实可行的检测手段。■
收稿日期：1998-03-25
修改日期：1998-10-26, 百拇医药