应用PCR快速检测临床标本中肺炎衣原体DNA
作者：张宗芬 安晓霞 黄啸原 韦建霞 鲍垂 褚为靖 刘玉涛
单位：张宗芬(北京积水潭医院耳鼻咽喉科 邮政编码100035)；安晓霞(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)；黄啸原(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)；韦建霞(北京积水潭医院耳鼻咽喉科 邮政编码100035)；鲍垂(北京积水潭医院耳鼻咽喉科 邮政编码100035)；褚为靖(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)；刘玉涛(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)
关键词：
北京医学000122 肺炎衣原体(CP)主要引起急性呼吸道感染，其诊断学过去主要依靠细胞培养、血清学试验。CP培养条件高，时间长，方法也不完善；血清学检测也因特异性抗体上升缓慢给早期诊断带来一定的困难而影响预后。我们采用聚合酶链反应(PCR)方法，直接扩增咽拭子标本中的微量CP DNA，使之能达到特异、灵敏、快速和早期诊断的目的。
材料和方法
标本采自1997年2～7月我科门、急诊和住院的耳鼻咽喉急性和亚急性感染者190例，并随访1个月。健康对照72例。用棉拭子用力刮取受试者咽后壁，以不见血丝为宜。一份标本备做PCR之用，另一份涂片做CP免疫荧光检验。CP标准株由北京协和医科大学病毒室提供。MP、LP、解脲衣原体、鹦鹉热衣原体、砂眼衣原体A-L3共15个血清型株，肺炎双球菌、大肠杆菌均由北京鼎国生物技术发展中心提供。引物参照Campbell方法加以改进，并由北京鼎国生物技术发展中心合成。其序列为：5’>CGCCTCTCTCCTATAAAT<3'；5’>ATTTATAGGAGAGAGGCG<3'。TWAR免疫荧光试剂盒购自美国Sigma公司。按说明进行PCR扩增及PCR扩增产物的鉴定。阳性结果为一条450bp片段。
CP直接免疫荧光试验采用TWAR单抗结合上荧光素后检测咽拭子涂片中的CP包涵体。
结 果
CP标准株DNA经PCR检测时可见有CP特异的450bp片段被扩增，而非CP衣原体及其它菌株的PCR检测结果均为阴性。实验组和对照组PCR阳性率分别为28.4%(54例)、11.1%(8例)。两组经χ2检验，P<0.005。
实验组直接免疫荧光试验CP包涵体阳性者31例，其中PCR阳性而CP包涵体阴性者23例。对照组PCR阳性者CP包涵体全部阴性。两组PCR阴性者，CP包涵体均阴性。PCR阳性者经重复实验仍为阳性。
讨 论
CP主要引起呼吸道的感染，但临床表现以肺炎为主，上呼吸道的炎症表现可为其前驱症状或伴随症状，若能早期诊断及时处理可防止肺炎的发生。
过去CP的诊断方法主要为细胞培养和血清学检查及直接免疫荧光试验，但均难以做到早期诊断。PCR技术能快速特异地扩增所希望的目标基因或DNA片段。我们采用PCR技术对CP的检测水平为1pg CP DNA。实验组190例中PCR检测，CP阳性54例，对照组72例PCR阳性仅8例(P<0.005)。试验组由此可见PCR技术把CP的诊断提高到了分子和基因水平，从而在诊断CP方面比传统的细胞培养和血清学检测、直接免疫荧光试验具有更高的敏感性和特异性，而整个过程仅需数小时，有利于CP的早期诊断。■
收稿日期：1998-01-04
修改日期：1998-11-23, http://www.100md.com
单位：张宗芬(北京积水潭医院耳鼻咽喉科 邮政编码100035)；安晓霞(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)；黄啸原(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)；韦建霞(北京积水潭医院耳鼻咽喉科 邮政编码100035)；鲍垂(北京积水潭医院耳鼻咽喉科 邮政编码100035)；褚为靖(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)；刘玉涛(北京市创伤骨科研究所基因诊断室)
关键词：
北京医学000122 肺炎衣原体(CP)主要引起急性呼吸道感染，其诊断学过去主要依靠细胞培养、血清学试验。CP培养条件高，时间长，方法也不完善；血清学检测也因特异性抗体上升缓慢给早期诊断带来一定的困难而影响预后。我们采用聚合酶链反应(PCR)方法，直接扩增咽拭子标本中的微量CP DNA，使之能达到特异、灵敏、快速和早期诊断的目的。
材料和方法
标本采自1997年2～7月我科门、急诊和住院的耳鼻咽喉急性和亚急性感染者190例，并随访1个月。健康对照72例。用棉拭子用力刮取受试者咽后壁，以不见血丝为宜。一份标本备做PCR之用，另一份涂片做CP免疫荧光检验。CP标准株由北京协和医科大学病毒室提供。MP、LP、解脲衣原体、鹦鹉热衣原体、砂眼衣原体A-L3共15个血清型株，肺炎双球菌、大肠杆菌均由北京鼎国生物技术发展中心提供。引物参照Campbell方法加以改进，并由北京鼎国生物技术发展中心合成。其序列为：5’>CGCCTCTCTCCTATAAAT<3'；5’>ATTTATAGGAGAGAGGCG<3'。TWAR免疫荧光试剂盒购自美国Sigma公司。按说明进行PCR扩增及PCR扩增产物的鉴定。阳性结果为一条450bp片段。
CP直接免疫荧光试验采用TWAR单抗结合上荧光素后检测咽拭子涂片中的CP包涵体。
结 果
CP标准株DNA经PCR检测时可见有CP特异的450bp片段被扩增，而非CP衣原体及其它菌株的PCR检测结果均为阴性。实验组和对照组PCR阳性率分别为28.4%(54例)、11.1%(8例)。两组经χ2检验，P<0.005。
实验组直接免疫荧光试验CP包涵体阳性者31例，其中PCR阳性而CP包涵体阴性者23例。对照组PCR阳性者CP包涵体全部阴性。两组PCR阴性者，CP包涵体均阴性。PCR阳性者经重复实验仍为阳性。
讨 论
CP主要引起呼吸道的感染，但临床表现以肺炎为主，上呼吸道的炎症表现可为其前驱症状或伴随症状，若能早期诊断及时处理可防止肺炎的发生。
过去CP的诊断方法主要为细胞培养和血清学检查及直接免疫荧光试验，但均难以做到早期诊断。PCR技术能快速特异地扩增所希望的目标基因或DNA片段。我们采用PCR技术对CP的检测水平为1pg CP DNA。实验组190例中PCR检测，CP阳性54例，对照组72例PCR阳性仅8例(P<0.005)。试验组由此可见PCR技术把CP的诊断提高到了分子和基因水平，从而在诊断CP方面比传统的细胞培养和血清学检测、直接免疫荧光试验具有更高的敏感性和特异性，而整个过程仅需数小时，有利于CP的早期诊断。■
收稿日期：1998-01-04
修改日期：1998-11-23, http://www.100md.com