自拟排石汤防治豚鼠胆石症的实验研究
作者：陈涛 陈良金 谭德福 卢训丛 黄利鸣 吴昌会
单位：陈涛 陈良金 谭德福 卢训丛(湖北三峡学院医学院中医系 (宜昌 443003))；黄利鸣(病理学教研室)；吴昌会(宜昌卫生学校)
关键词：胆囊结石；肝脏；胆汁酸；胆固醇；中药；豚鼠；实验研究；
实用医学进修杂志000109
摘 要：目的：研究自拟排石汤防治胆囊结石的疗效与机理。方法：用致石饲料诱发豚鼠胆囊结石模型，随机分为对照组和用药组，每组20只，从胆汁生化、肝胆病理形态及血清微量元素等方面，进行比较观察。结果：用药组成石率仅为36.8%，明显低于对照组(70%，P<0.05)。用药组胆汁中胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)，而胆汁酸含量显著高于对照组(P<0.05)。血Ca较对照组低，血Zn、Fe、Cu较对照组高。肝脏脂肪样变和水样变较对照组轻或缺如，胆囊粘膜上皮病理性粘液明显减少。结论：该方法能防治豚鼠胆囊结石的形成。
, http://www.100md.com
The Experiment Study of Self-made Porescription
Preventing and Curing Cholecystolithiasis
Chen Tao Chen Liangjin Tan Defu,et al
(Hubei Three Gorges University Medical College,Yichang 443003)
Abstract：Objective:Curative effect and mechanism of cholithiasis cholecystolithiasis explored the self-made lithagogue soup to prophylaxis cure.Method:Oatterns of the guinea pig's cholelithiasis cholecystolithiasis were evoked were evoked by forage resulting cholecy stolithiasis,then were devided into control group and experiment group randomly,and each group was constained by twenty ones.With bile biochemistry,pathologic picture of hepar and gallbladder,serum micro-element and ect,each group have been observed by comparative method.Result:Formative cholecystolithiasis rate in the esperimental group was 36.8% which was obviously lower than the control group(70%,P<0.05),and the cholesteral content in the bile was remarkably lower(P<0.05),hower,the content of bile acid remarkably higher than the control group,but serum zine,iron and copper are higher.Liver's adipose change and hyctropic change were more slight or deficiency than the control group.The pathological phlegm of the cholelitiasis epithelium mucosae obviously reduced.Conclusion:This precripgion can prophylaxis cure guinea pig's formation of cholelithiasis cholecystolithiasis.
, http://www.100md.com
Key Words：cholelithiasis cholecystolithiasis;hepar;bile acid;cholesterol;Chinese medicinal herb;guinea pig;experimental study▲
临床资料表明，自拟排石汤治疗胆石症有良好的效果[1]。为了探讨其作用机理，我们采用致石饲料诱发豚鼠胆囊结石模型为实验对象，从胆汁生化、肝胆病理形态及血清微量元素等方面进一步研究了自拟排石汤防治胆石症的效果和机理，现将部分观察结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验分组与造模
取雌性豚鼠40只，重300～400g。随机分为2组。对照组20只，每日予致石饲料(按徐长生法配制，参阅文献[2])和适量青饲料喂养，复制胆囊结石模型。用药组20只，在复制胆囊结石模型的同时，将自拟排石汤(金钱草30g、鸡内金30g、柴胡10、白芍15g、石见穿30g、茵陈30g、大黄10g、青皮12g)按成人每公斤体重的10倍量换算成动物剂量，粉碎后掺入饲料中喂养。
, http://www.100md.com
1.2 标本采集
两组动物均经第9周实验后，禁食24h，再行颈动脉放血处死。离心分离血清。剖腹，用血管钳夹住胆囊颈，剪断胆管，取出胆囊，在强光下观察胆囊成石情况，然后用注射器抽取胆液，切取部分肝、胆组织留作病理学观察。
1.3 观察指标
①成石情况：观察各组织动物胆囊的成石数量，计算成石率；②胆液中胆固醇含量的测定：硫磷铁法；③胆液中胆汁酸含量测定：紫外分光光度法；④血清无机元素测定：用WTF-ID型原子吸收分光光度计测定；⑤病理组织观察：用10%福尔马林固定、石腊包埋切片、HE染色、奥辛蓝(AB)-过碘雪夫氏(BAS)染色；将部分新鲜组织冰冻切片、用乳酸脱氢酸(LDH)染色和三磷酸腺苷酶(ATPase)染色，显微镜下观察。
2 实验结果
2.1 成石情况
, 百拇医药
实验组成石率显著低于对照组(P<0.05)，见表1。
表1 两组豚鼠胆囊结石成石率比较 组别
例数
成石数
成石率(%)
对照组
20
14
70.0
用药组
19
7
, 百拇医药
36.8*
注：与对照组比较，*P<0.05
2.2 胆汁酸和胆固醇的含量
用药组胆汁中胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)，而胆汁酸的含量显著高于对照组(P<0.05)，见表2。
表2 两组豚鼠胆汁成份比较(
±s) 组别
胆固醇
(mg/mg Pro)
胆汁酸
(mg/mg Pro)
, 百拇医药
对照组
2.15±0.68
1.99±1.13
用药组
1.56±0.45*
3.05±1.45*
注：与对照组比较，*P<0.05
2.3 血清微量元素含水量
用药组血清Zn、Cn、Fe含量显著高于对照组(P>0.05)，而血清Ca显著低于对照组(P<0.05)，见表3。
表3 两组豚鼠血清无机元素含量比较(μg/ml，±s) 组别
, 百拇医药
Zn
Cu
Mg
Ca
Fa
对照组
用药组
1.29±0.31
1.52±0.34*
1.04±0.26
1.27±0.45*
31.76±5.41
31.71±7.94
, 百拇医药
155.45±53.62
121.78±25.32*
8.07±2.73
11.73±6.39*
注：与对照组比较，*P<0.05
2.4 病理学观察
2.4.1 HE染色 两组动物的肝细胞，均有不同程度的脂肪变性，但对照组明显重于实验组，有的还见有水样变性。对照动物胆囊的结石粘膜皱壁有呈分枝状粘膜上皮增生，上皮中杯状细胞和粘液细胞多于实验组，粘膜间质水肿和淋巴细胞浸润现象较为常见。
2.4.2 AB-PAS染色 胆囊粘膜深部的腺体呈蓝色泡沫状，部分粘膜上皮细胞浆内见多量蓝色颗粒或紫红色颗粒，或两色颗粒混合，聚成团块状，位于核上区，或呈团状占据整个胞浆。部分上皮细胞游离缘染色呈蓝色。对照组胆囊粘膜中含粘液颗粒(蓝色、紫红色颗粒)的细胞更多，且以蓝色颗粒为主。
, 百拇医药
2.4.3 LDH和ADPase染色 胆囊粘膜上皮染色后均为阳性(+)，但两组动物无明显差异。
3 讨论
胆石症是一种常见病、多发病。属于中医学“胁痛”、“肝胀”、“胆胀”等范畴。其形成机理比较复杂，现代医学认为与胆汁内胆盐、胆固醇成份的改变，胆汁内粘蛋白含量增高，胆囊排空功能障碍，胆汁流体动力学改变，胆固醇合成的遗传因素及药物影响等诸多因素有关。中医学认为，胆为“中精之府”，受“肝之余气”而成，以通降下行为顺。凡情志过用，饮食失节、中焦湿热以及虫积等，可影响肝的疏泄及胆腑的通降，导致胆汁淤积，久经煎熬，则凝为结石。因此，治疗该病总的原则，即疏肝利胆，排石化滞，解痉止痛，此系自拟排石汤的依据。方中用柴胡、青皮、茵陈、金钱草疏利肝胆，促进胆石排泄；鸡内金、石见穿、大黄消石攻积；白芍解痉止痛。
实验表明，该方有抑制致石饲料诱发豚鼠胆囊结石形成的作用，其成石率仅为36.8%，明显低于对照组(70%，P<0.05)，从实验研究上肯定了其治疗胆石症的疗效。同时，通过实验也进一步阐明了自拟排石汤抑制胆囊结石形成的部分作用机理：①调节肝脏代谢，维持肝脏正常胆汁分泌。本实验观察发现，对照组动物的肝细胞有明显的脂肪变性和水样变性，胆液中胆汁酸含量降低，而胆固醇增加，提示肝脏代谢和功能受干扰，胆汁分泌异常。而用药后的动物肝脏病理改变较对照组轻，甚或缺如，胆液中胆汁酸明显提高，胆固醇有所降低，这说明自拟 排石汤不仅有保护、调节和促进肝脏代谢的作用，而且尚能提高胆液中胆汁酸的含量，来促进胆固醇的溶解，防止其过饱和而形成结石；②保护胆囊粘膜上皮，减少其粘液的合成与分泌。观察发现，对照组胆囊粘膜上皮粘液样细胞明显增多，粘液样颗粒增加。病理性胆囊粘液过量分泌，特别是酸性粘液(AB染色着蓝色)，可作为特异的成核物质，易与胆液中的胆固醇、胆红素及钙、镁等形成高分子聚合物，共同沉淀形成结石。用药组动物胆囊粘膜上皮的改变较对照组轻或缺如，从而揭示自拟 排石汤可通过保护膜上皮，减少其病理性粘液分泌来抑制结石形成；③降低血钙，减少结石形成的机率。胆液中的钙离子与钙敏离子——碳酸根、磷酸根、胆色素、棕榈酸结合成钙盐而沉淀，有助于结石形成。用药组动物的血清发生变化，尤其血钙降低(P<0.05)，则有助于减少结石形成的机率。此外，自拟排石汤还能提高豚鼠血清锌、铁、铜等微量元素的含量。锌、铁、铜是人体多种酶的激活剂，对机体生长发育、免疫功能、神经内分泌等各系统都有调节作用。■
参考文献：
[1]陈良金.自拟排石汤治疗胆囊结石70例疗效观察.实用中西医结合杂志，1991；4(7)：411
[2]徐长生，等.胆色素结石的动物模型及药防治的实验研究.中华消化杂志，1982；2(1)：34
收稿日期：1999-12-15, http://www.100md.com
单位：陈涛 陈良金 谭德福 卢训丛(湖北三峡学院医学院中医系 (宜昌 443003))；黄利鸣(病理学教研室)；吴昌会(宜昌卫生学校)
关键词：胆囊结石；肝脏；胆汁酸；胆固醇；中药；豚鼠；实验研究；
实用医学进修杂志000109
摘 要：目的：研究自拟排石汤防治胆囊结石的疗效与机理。方法：用致石饲料诱发豚鼠胆囊结石模型，随机分为对照组和用药组，每组20只，从胆汁生化、肝胆病理形态及血清微量元素等方面，进行比较观察。结果：用药组成石率仅为36.8%，明显低于对照组(70%，P<0.05)。用药组胆汁中胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)，而胆汁酸含量显著高于对照组(P<0.05)。血Ca较对照组低，血Zn、Fe、Cu较对照组高。肝脏脂肪样变和水样变较对照组轻或缺如，胆囊粘膜上皮病理性粘液明显减少。结论：该方法能防治豚鼠胆囊结石的形成。
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The Experiment Study of Self-made Porescription
Preventing and Curing Cholecystolithiasis
Chen Tao Chen Liangjin Tan Defu,et al
(Hubei Three Gorges University Medical College,Yichang 443003)
Abstract：Objective:Curative effect and mechanism of cholithiasis cholecystolithiasis explored the self-made lithagogue soup to prophylaxis cure.Method:Oatterns of the guinea pig's cholelithiasis cholecystolithiasis were evoked were evoked by forage resulting cholecy stolithiasis,then were devided into control group and experiment group randomly,and each group was constained by twenty ones.With bile biochemistry,pathologic picture of hepar and gallbladder,serum micro-element and ect,each group have been observed by comparative method.Result:Formative cholecystolithiasis rate in the esperimental group was 36.8% which was obviously lower than the control group(70%,P<0.05),and the cholesteral content in the bile was remarkably lower(P<0.05),hower,the content of bile acid remarkably higher than the control group,but serum zine,iron and copper are higher.Liver's adipose change and hyctropic change were more slight or deficiency than the control group.The pathological phlegm of the cholelitiasis epithelium mucosae obviously reduced.Conclusion:This precripgion can prophylaxis cure guinea pig's formation of cholelithiasis cholecystolithiasis.
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Key Words：cholelithiasis cholecystolithiasis;hepar;bile acid;cholesterol;Chinese medicinal herb;guinea pig;experimental study▲
临床资料表明，自拟排石汤治疗胆石症有良好的效果[1]。为了探讨其作用机理，我们采用致石饲料诱发豚鼠胆囊结石模型为实验对象，从胆汁生化、肝胆病理形态及血清微量元素等方面进一步研究了自拟排石汤防治胆石症的效果和机理，现将部分观察结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验分组与造模
取雌性豚鼠40只，重300～400g。随机分为2组。对照组20只，每日予致石饲料(按徐长生法配制，参阅文献[2])和适量青饲料喂养，复制胆囊结石模型。用药组20只，在复制胆囊结石模型的同时，将自拟排石汤(金钱草30g、鸡内金30g、柴胡10、白芍15g、石见穿30g、茵陈30g、大黄10g、青皮12g)按成人每公斤体重的10倍量换算成动物剂量，粉碎后掺入饲料中喂养。
, http://www.100md.com
1.2 标本采集
两组动物均经第9周实验后，禁食24h，再行颈动脉放血处死。离心分离血清。剖腹，用血管钳夹住胆囊颈，剪断胆管，取出胆囊，在强光下观察胆囊成石情况，然后用注射器抽取胆液，切取部分肝、胆组织留作病理学观察。
1.3 观察指标
①成石情况：观察各组织动物胆囊的成石数量，计算成石率；②胆液中胆固醇含量的测定：硫磷铁法；③胆液中胆汁酸含量测定：紫外分光光度法；④血清无机元素测定：用WTF-ID型原子吸收分光光度计测定；⑤病理组织观察：用10%福尔马林固定、石腊包埋切片、HE染色、奥辛蓝(AB)-过碘雪夫氏(BAS)染色；将部分新鲜组织冰冻切片、用乳酸脱氢酸(LDH)染色和三磷酸腺苷酶(ATPase)染色，显微镜下观察。
2 实验结果
2.1 成石情况
, 百拇医药
实验组成石率显著低于对照组(P<0.05)，见表1。
表1 两组豚鼠胆囊结石成石率比较 组别
例数
成石数
成石率(%)
对照组
20
14
70.0
用药组
19
7
, 百拇医药
36.8*
注：与对照组比较，*P<0.05
2.2 胆汁酸和胆固醇的含量
用药组胆汁中胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)，而胆汁酸的含量显著高于对照组(P<0.05)，见表2。
表2 两组豚鼠胆汁成份比较(
±s) 组别胆固醇
(mg/mg Pro)
胆汁酸
(mg/mg Pro)
, 百拇医药
对照组
2.15±0.68
1.99±1.13
用药组
1.56±0.45*
3.05±1.45*
注：与对照组比较，*P<0.05
2.3 血清微量元素含水量
用药组血清Zn、Cn、Fe含量显著高于对照组(P>0.05)，而血清Ca显著低于对照组(P<0.05)，见表3。
表3 两组豚鼠血清无机元素含量比较(μg/ml，
±s) 组别, 百拇医药
Zn
Cu
Mg
Ca
Fa
对照组
用药组
1.29±0.31
1.52±0.34*
1.04±0.26
1.27±0.45*
31.76±5.41
31.71±7.94
, 百拇医药
155.45±53.62
121.78±25.32*
8.07±2.73
11.73±6.39*
注：与对照组比较，*P<0.05
2.4 病理学观察
2.4.1 HE染色 两组动物的肝细胞，均有不同程度的脂肪变性，但对照组明显重于实验组，有的还见有水样变性。对照动物胆囊的结石粘膜皱壁有呈分枝状粘膜上皮增生，上皮中杯状细胞和粘液细胞多于实验组，粘膜间质水肿和淋巴细胞浸润现象较为常见。
2.4.2 AB-PAS染色 胆囊粘膜深部的腺体呈蓝色泡沫状，部分粘膜上皮细胞浆内见多量蓝色颗粒或紫红色颗粒，或两色颗粒混合，聚成团块状，位于核上区，或呈团状占据整个胞浆。部分上皮细胞游离缘染色呈蓝色。对照组胆囊粘膜中含粘液颗粒(蓝色、紫红色颗粒)的细胞更多，且以蓝色颗粒为主。
, 百拇医药
2.4.3 LDH和ADPase染色 胆囊粘膜上皮染色后均为阳性(+)，但两组动物无明显差异。
3 讨论
胆石症是一种常见病、多发病。属于中医学“胁痛”、“肝胀”、“胆胀”等范畴。其形成机理比较复杂，现代医学认为与胆汁内胆盐、胆固醇成份的改变，胆汁内粘蛋白含量增高，胆囊排空功能障碍，胆汁流体动力学改变，胆固醇合成的遗传因素及药物影响等诸多因素有关。中医学认为，胆为“中精之府”，受“肝之余气”而成，以通降下行为顺。凡情志过用，饮食失节、中焦湿热以及虫积等，可影响肝的疏泄及胆腑的通降，导致胆汁淤积，久经煎熬，则凝为结石。因此，治疗该病总的原则，即疏肝利胆，排石化滞，解痉止痛，此系自拟排石汤的依据。方中用柴胡、青皮、茵陈、金钱草疏利肝胆，促进胆石排泄；鸡内金、石见穿、大黄消石攻积；白芍解痉止痛。
实验表明，该方有抑制致石饲料诱发豚鼠胆囊结石形成的作用，其成石率仅为36.8%，明显低于对照组(70%，P<0.05)，从实验研究上肯定了其治疗胆石症的疗效。同时，通过实验也进一步阐明了自拟排石汤抑制胆囊结石形成的部分作用机理：①调节肝脏代谢，维持肝脏正常胆汁分泌。本实验观察发现，对照组动物的肝细胞有明显的脂肪变性和水样变性，胆液中胆汁酸含量降低，而胆固醇增加，提示肝脏代谢和功能受干扰，胆汁分泌异常。而用药后的动物肝脏病理改变较对照组轻，甚或缺如，胆液中胆汁酸明显提高，胆固醇有所降低，这说明自拟 排石汤不仅有保护、调节和促进肝脏代谢的作用，而且尚能提高胆液中胆汁酸的含量，来促进胆固醇的溶解，防止其过饱和而形成结石；②保护胆囊粘膜上皮，减少其粘液的合成与分泌。观察发现，对照组胆囊粘膜上皮粘液样细胞明显增多，粘液样颗粒增加。病理性胆囊粘液过量分泌，特别是酸性粘液(AB染色着蓝色)，可作为特异的成核物质，易与胆液中的胆固醇、胆红素及钙、镁等形成高分子聚合物，共同沉淀形成结石。用药组动物胆囊粘膜上皮的改变较对照组轻或缺如，从而揭示自拟 排石汤可通过保护膜上皮，减少其病理性粘液分泌来抑制结石形成；③降低血钙，减少结石形成的机率。胆液中的钙离子与钙敏离子——碳酸根、磷酸根、胆色素、棕榈酸结合成钙盐而沉淀，有助于结石形成。用药组动物的血清发生变化，尤其血钙降低(P<0.05)，则有助于减少结石形成的机率。此外，自拟排石汤还能提高豚鼠血清锌、铁、铜等微量元素的含量。锌、铁、铜是人体多种酶的激活剂，对机体生长发育、免疫功能、神经内分泌等各系统都有调节作用。■
参考文献：
[1]陈良金.自拟排石汤治疗胆囊结石70例疗效观察.实用中西医结合杂志，1991；4(7)：411
[2]徐长生，等.胆色素结石的动物模型及药防治的实验研究.中华消化杂志，1982；2(1)：34
收稿日期：1999-12-15, http://www.100md.com