环氧树脂包埋半薄切片脱树脂新方法
作者：蒋海鹰 沈明 冯德云
单位：蒋海鹰(病理学教研室 长沙 410078)；沈明(病理学教研室 长沙 410078)；冯德云(病理学教研室 长沙 410078)
关键词：组织学；环氧树脂*；方法学
湖南医科大学学报000129 摘 要：用环氧树脂包埋的半薄切片作HE染色，特殊染色或 免疫组化染色，必须预先脱树脂。传统的脱树脂方法所需时间长达24h，且易掉片。作者 介绍一种新的脱树脂方法，该法 只需5min即可将半薄切片上的树脂完全脱净，可避免掉片且染色效果佳，图像清楚。
分类号：R331 文献标识码：A
文章编号：1000-5625(2000)01-0085-02
, 百拇医药
An improved deresining method for semithin sections embedded-e poxy resin
JIANG Hai-ying, SHEN Ming, FENG De-yun
Department of Pathology, Hunan Medical University(Changsha 410078)
Abstract：Deresining must be performed for HE, specific histo chemical staining and immunohistochemical detection on semithin-sections embedd ed-epoxy resin. The deresining process in general methods had to take 24 hours, and the semithin-sections were easily separated from slides. An improved metho d was introduced in this paper, by which deresining time was only 5 minutes, and it could also avoid the separation of semithin-sections from the slides. The s taining result was very good, and the resolving power of images was high.
, 百拇医药
Key words：histology;xpoxy resin*;methodology▲
环氧树脂是透射电子显微镜超薄切片制样中常用的 包埋介质，亦可用于光镜半薄切片的制备[1]。半薄切片能提供普通石蜡切片难以 达到的分辨率，更清晰地显示组织和细胞结构，特别是细胞成分丰富的组织，如淋巴结、胎 肝、肾组织等，因此在病理研究中应用较多。但环氧树脂包埋的半薄切片作HE染色、特殊染 色或免疫组化前必须先脱掉树脂，否则试剂不易渗入，影响染色效果。经典的脱树脂方法是 将半薄切片置含氢氧化钠的无水酒精饱和溶液中浸泡24h，然后再充分水洗。该法不但耗 时长，且容易脱片。笔者在实验中摸索出一种简易、快捷的脱树脂方法，现推介如下。
1 材料与方法
1.1 材料 肾穿刺、淋巴结标本均取自湘雅医院；氢氧化钠、无水乙醇、 甲苯、丙酮等均系市售分析纯试剂。环氧树脂812系日本产品。
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1.2 方法
1.2.1 半薄切片制备 按常规环氧树脂包埋法将肾组织和淋巴结组织制成包埋块 ，在半薄切片机上切成0.5μm的半薄切片。
1.2.2 试剂配制 首先配制饱和氢氧化钠无水乙醇溶液，静置过夜，使溶 液呈黄褐色。取上述溶液与甲苯按3∶1(V/V)混合成工作液(临用前配制)。
1.2.3 脱环氧树脂及染色 将半薄切片置工作液中5min；无水酒精清洗 5min×3次，经梯度酒精至水；然后按常规方法进行HE，PAS和六胺银染色[2]。 与石蜡包埋的肾及淋巴组织作对照。
2 结 果
HE染色显示肾组织和淋巴组织半薄切片的着色强度与石蜡切片无异，但组织结构保存极好， 分辨率高、图像更清晰，特别是肾小球毛细血管袢(图1)和肾小管微绒毛清晰可见。过碘酸 雪夫氏染色和六胺银染色显示肾组织半薄切片的肾小球基底膜十分清楚，着色深，背景浅， 透明度好(图2，3)。
, http://www.100md.com
图1 肾脏半薄切片，HE染色示肾小球毛细 血管袢非常清楚 ×400
Fig. 1 Renal semi-thin section, HE staining showing clear glomerular loop
图2 肾脏半薄切片，PASM染色示肾小球毛细 血管基底膜(▲)和肾小球基底膜(
)×400
Fig. 2 Renal semi-thin section, PASM st aining showing glomerular basement membrane(GBM)(▲) and tubule basement membran e(TBM)()
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图3 肾脏半薄切片，PAS染色示肾小球毛细血 管基底膜(▲)和肾小管基底膜() ×400
Fig. 3 Renal semi-thin section, PAS sta ining showing GBM(▲) and TBM ()
3 讨 论
半薄切片具有普通石蜡切片难以达到的分辨率，在病理诊断和病理研究中应用较普遍。半薄 切片的制备可采用环氧树脂和塑料包埋介质。由于后者对组织和细胞结构的保存较差，难以 达到电镜观察的要求。同一样本若要作电镜观察又须行光镜检查，则环氧树脂包埋组织的方 法能达到上述目的。
环氧树脂包埋的半薄切片在进行HE，PAS和六胺银等染色前必须脱掉树脂。既往脱树脂是 把切片置饱和氢氧化钠或氢氧化钾无水乙醇液中24h，然后用无水乙醇清洗，再梯度酒精 至水。该法脱树脂时间长，极易引起切片脱落。笔者用饱和氢氧化钠无水乙醇液与甲苯按3 ∶1混合制成的工作液脱树脂，所需时间仅5min，树脂完全脱净，且解决了脱片的难题。H E染色显示其着色强度与石蜡切片无异，但图像的清晰度和分辨率大大提高。用显示基底膜 的特殊染色亦发现基底膜着色深、背景浅、透明度好。该法特别适用于肾脏、肝脏、淋巴结 和鼻咽部等细胞丰富的组织的病理学研究以及临床病理诊断，故值得推广。
作者简介：蒋海鹰(1967-)，女，实验师
参考文献：
[1]杭振镳，蔡文琴.电子显微镜术在临床医学的应用[M].重庆 ：重庆出版社，1988：20.
[2]凌启波.实用病理特殊染色和组化技术[M].广州：广东高教出版社，1989：48-5 6.
收稿日期：1999-03-09, http://www.100md.com
单位：蒋海鹰(病理学教研室 长沙 410078)；沈明(病理学教研室 长沙 410078)；冯德云(病理学教研室 长沙 410078)
关键词：组织学；环氧树脂*；方法学
湖南医科大学学报000129 摘 要：用环氧树脂包埋的半薄切片作HE染色，特殊染色或 免疫组化染色，必须预先脱树脂。传统的脱树脂方法所需时间长达24h，且易掉片。作者 介绍一种新的脱树脂方法，该法 只需5min即可将半薄切片上的树脂完全脱净，可避免掉片且染色效果佳，图像清楚。
分类号：R331 文献标识码：A
文章编号：1000-5625(2000)01-0085-02
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An improved deresining method for semithin sections embedded-e poxy resin
JIANG Hai-ying, SHEN Ming, FENG De-yun
Department of Pathology, Hunan Medical University(Changsha 410078)
Abstract：Deresining must be performed for HE, specific histo chemical staining and immunohistochemical detection on semithin-sections embedd ed-epoxy resin. The deresining process in general methods had to take 24 hours, and the semithin-sections were easily separated from slides. An improved metho d was introduced in this paper, by which deresining time was only 5 minutes, and it could also avoid the separation of semithin-sections from the slides. The s taining result was very good, and the resolving power of images was high.
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Key words：histology;xpoxy resin*;methodology▲
环氧树脂是透射电子显微镜超薄切片制样中常用的 包埋介质，亦可用于光镜半薄切片的制备[1]。半薄切片能提供普通石蜡切片难以 达到的分辨率，更清晰地显示组织和细胞结构，特别是细胞成分丰富的组织，如淋巴结、胎 肝、肾组织等，因此在病理研究中应用较多。但环氧树脂包埋的半薄切片作HE染色、特殊染 色或免疫组化前必须先脱掉树脂，否则试剂不易渗入，影响染色效果。经典的脱树脂方法是 将半薄切片置含氢氧化钠的无水酒精饱和溶液中浸泡24h，然后再充分水洗。该法不但耗 时长，且容易脱片。笔者在实验中摸索出一种简易、快捷的脱树脂方法，现推介如下。
1 材料与方法
1.1 材料 肾穿刺、淋巴结标本均取自湘雅医院；氢氧化钠、无水乙醇、 甲苯、丙酮等均系市售分析纯试剂。环氧树脂812系日本产品。
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1.2 方法
1.2.1 半薄切片制备 按常规环氧树脂包埋法将肾组织和淋巴结组织制成包埋块 ，在半薄切片机上切成0.5μm的半薄切片。
1.2.2 试剂配制 首先配制饱和氢氧化钠无水乙醇溶液，静置过夜，使溶 液呈黄褐色。取上述溶液与甲苯按3∶1(V/V)混合成工作液(临用前配制)。
1.2.3 脱环氧树脂及染色 将半薄切片置工作液中5min；无水酒精清洗 5min×3次，经梯度酒精至水；然后按常规方法进行HE，PAS和六胺银染色[2]。 与石蜡包埋的肾及淋巴组织作对照。
2 结 果
HE染色显示肾组织和淋巴组织半薄切片的着色强度与石蜡切片无异，但组织结构保存极好， 分辨率高、图像更清晰，特别是肾小球毛细血管袢(图1)和肾小管微绒毛清晰可见。过碘酸 雪夫氏染色和六胺银染色显示肾组织半薄切片的肾小球基底膜十分清楚，着色深，背景浅， 透明度好(图2，3)。
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图1 肾脏半薄切片，HE染色示肾小球毛细 血管袢非常清楚 ×400
Fig. 1 Renal semi-thin section, HE staining showing clear glomerular loop
图2 肾脏半薄切片，PASM染色示肾小球毛细 血管基底膜(▲)和肾小球基底膜(
)×400Fig. 2 Renal semi-thin section, PASM st aining showing glomerular basement membrane(GBM)(▲) and tubule basement membran e(TBM)(
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图3 肾脏半薄切片，PAS染色示肾小球毛细血 管基底膜(▲)和肾小管基底膜(
) ×400Fig. 3 Renal semi-thin section, PAS sta ining showing GBM(▲) and TBM (
)3 讨 论
半薄切片具有普通石蜡切片难以达到的分辨率，在病理诊断和病理研究中应用较普遍。半薄 切片的制备可采用环氧树脂和塑料包埋介质。由于后者对组织和细胞结构的保存较差，难以 达到电镜观察的要求。同一样本若要作电镜观察又须行光镜检查，则环氧树脂包埋组织的方 法能达到上述目的。
环氧树脂包埋的半薄切片在进行HE，PAS和六胺银等染色前必须脱掉树脂。既往脱树脂是 把切片置饱和氢氧化钠或氢氧化钾无水乙醇液中24h，然后用无水乙醇清洗，再梯度酒精 至水。该法脱树脂时间长，极易引起切片脱落。笔者用饱和氢氧化钠无水乙醇液与甲苯按3 ∶1混合制成的工作液脱树脂，所需时间仅5min，树脂完全脱净，且解决了脱片的难题。H E染色显示其着色强度与石蜡切片无异，但图像的清晰度和分辨率大大提高。用显示基底膜 的特殊染色亦发现基底膜着色深、背景浅、透明度好。该法特别适用于肾脏、肝脏、淋巴结 和鼻咽部等细胞丰富的组织的病理学研究以及临床病理诊断，故值得推广。
作者简介：蒋海鹰(1967-)，女，实验师
参考文献：
[1]杭振镳，蔡文琴.电子显微镜术在临床医学的应用[M].重庆 ：重庆出版社，1988：20.
[2]凌启波.实用病理特殊染色和组化技术[M].广州：广东高教出版社，1989：48-5 6.
收稿日期：1999-03-09, http://www.100md.com