颌下腺同种异体移植模型的建立
作者：王军 王玉新 郭永峰 张继东
单位：张继东(沈阳市口腔医院口腔外科)；王军(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)；王玉新(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)；郭永峰(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)
关键词：移植；同种异体；颌下腺；兔；猪
中国医科大学学报000121 摘要 目的：建立颌下腺同种异体原位移植的动物实验模型。方法：应用显微外科技术，分别选用猪和兔进行血供重建的颌下腺同种异体移植术。术后 24 h受体兔行同位素扫描，以确定移植物是否成活。结果：猪 3 例手术均失败，移植物存活无一超过 24 h；16 例兔存活 13 例，成功率 81.3%，建立了稳定的模型。结论：为建立颌下腺同种异体移植的模型，必须选择适当的动物。移植手术成功的关键在于熟练的显微外科技术和术后有效的抗感染措施。
, http://www.100md.com
Establishment of Submandibular Gland Allografts Model in Rabbit
Wang Jun Wang Yuxin Guo Yongfeng et al
(Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The First Clinical College, China Medical University, Shenyang,110001)
ABSTRACT Objective:Our purpose was to establish an experimental model of submandibular gland allotransplantation. Methods：Young pigs and adult rabbits were selected, 3 pigs and 16 rabbits were the recipients of orthotopic submandibular gland allotransplants. Results:The successful rate of allografts operation was 0% in pigs and 81.3% in rabbits. Conclusion: Practised technic of microsurgery, operation time, and powerful antiinfective measures were essential for obtaining success.
, 百拇医药
KEY WORDS transplantation; allogenetic; submandibular gland; rabbit；pig
颌下腺自体游离移植治疗干眼症的动物实验选用的是兔[1，2]。本实验以猪和兔作为建立颌下腺同种异体游离移植的实验动物，进行比较，为进一步实验准备条件。
1 材料与方法
1.1 实验动物 长白幼猪6只，体重13.0～15.0 kg，分成供、受体2组；成年健康大耳白兔32只，雄性18只，雌性14只，体重3.0～3.5 kg，随机分成供、受体2组。
1.2 手术
长白幼猪以氯胺酮22 mg/kg腹腔注射，阿托品0.5 mg肌注，0.25%硫喷妥钠耳缘静脉维持静滴。大耳白兔以20 mg/kg氯胺酮肌注。
, 百拇医药
供体手术取左颌下切口，分离显露并游离颌下腺，仔细显露滋养腺体的动静脉及导管，向心性游离动、静脉，长约1.0 cm。动脉追至颈外动脉，直径约1.5 mm；静脉追至颈内静脉，直径约2.0 mm。在颈外动脉近分叉处结扎后，在结扎点远心端穿刺，注入肝素-利多卡因液使局部肝素化[3]，灌洗至腺体发白
后，结扎颈内静脉，准备移植腺体，血管蒂保留长约1.5 cm，导管长2.0 cm。
受体手术同期进行，手术经过相同。在颈外动脉距分叉1 cm处切断，近心端以血管夹止血，远心端结扎。颈内静脉在滋养静脉汇入处切断，远端结扎，近心端以血管夹止血。导管剪断结扎，腺体切除。
应用显微外科技术在显微镜(×10)下用9-0的线吻合移植腺体与受体的静脉、动脉，先静脉后动脉。导管外置，固定于创缘。开放血管夹后见血管迅速充盈，移植腺体很快红润，腺体平均缺血时间1 h。术毕庆大盐水冲洗，严密缝合创口，注意减张，防止腺体受压，创口以胶带严密包扎。
, 百拇医药
1.3 术后处理及观察
动物清醒后即可进食，常规饲料喂养。每天观察记录动物一般情况，如饮食、二便、精神状态等。术后每天青霉素160万U肌注，连用7 d。局部创口每天换药，观察创口颜色，有无渗出，溢脓等。
术后24 h受体兔行同位素扫描，以确定移植物是否成活，同时可观测腺体的功能状态[4]。
术后第7 d，手术取出移植腺体行病理检查。受体兔术后死亡的行尸检，取出腺体以10%福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜观察。
2 结果
长白幼猪存活无一例超过24 h，长白幼猪术后创口很快污染，其中1例术后第2 d创口裂开，腺体外露。大耳白兔移植手术建立了比较稳定的模型，成活13例，手术成功率达81.3%。大耳白兔术后7 d内均未见创口感染迹象，导管仍有分泌。术后第7 d病理所见，其中9例移植腺体呈现部分腺细胞脂肪变性，组织中有散在的单核细胞及淋巴细胞浸润；2例出现局部腺细胞损害，单核细胞和淋巴细胞浸润明显，呈中度排斥反应[5]。另外2例腺细胞部分损害大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润。有3例术后24 h同位素扫描显示移植腺体区核素无浓聚，表明腺体失活。病理证实动脉内血栓，腺体呈缺血性坏死改变。
, 百拇医药
3 讨论
移植研究中模型的遗传背景对结果影响很大[6]，但近交系小鼠不适于行颌下腺移植手术，灵长类动物虽与人接近但价格高。猪和兔是常用的实验动物，本实验结果表明，应用大耳白兔建立颌下腺移植模型成功率较高。猪的消化系统和免疫系统与人相似[7]，但其生活习性难以保证术后创口不感染，同时幼猪颌下区脂肪过多，颌下腺位置较深，不利于手术操作。
颌下腺同种异体移植手术成功的关键在于：(1) 熟悉局部解剖，在短时间内完成颌下腺的分离、显露，处理好血管及导管。(2) 术中血管的分离、制备及吻合均应按照显微外科标准严格要求，以防止术后血栓形成，移植手术失败。(3) 手术应严格遵守无菌操作原则，术中即开始应用抗菌素，术后持续用药。同时术后加强局部换药，预防感染。术后受体兔应单笼饲养，防止动物间咬伤，影响创口愈合。另外，尽量缩短手术时间，术中减少出血量，以及缩短移植物缺血时间也都是非常重要的。
, 百拇医药
吻合血管的颌下腺同种异体移植是开创性的研究，国内、外文献尚未见报道。本实验动物模型的建立，为进一步研究颌下腺同种异体移植免疫排斥反应准备了条件，也为临床颌下腺同种异体移植治疗干眼症提供了依据[8]。
作者单位:张继东(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)
参考文献
1，Kumar PA, Macleod B. Microvascular submandibular gland transfer for the management of xerophthalmia: an experimental study. Br J Plast Surg, 1990,43(4):431_436
2，贾广学，王玉新，韩东升.颌下腺游离移植再造泪腺的实验研究.中国医科大学学报，1994，23()：446～448
, http://www.100md.com
3，陈昭民，韩德恩，吴德全.不灌洗法保存器官的动物实验及在小器官移植中应用体会.中国实用外科杂志，1999，19(5)：267～268
4，Lauer I, Sieg P, Bähre M, et al. Salivary gland scintigraphy using technetium-99m-pertechnetate after autotransplantation of the submandibular salivary gland in the correction of dry eye. Eur J Nucle Med, 1998,25(2):128_131
5，胡敏，张震康，张熙恩，等.犬同种异体下颌区复合器官移植后排斥反应的组织学特征.口腔颌面外科杂志，1998，8(2)：177～180
6，Yaremchuk MJ, Nettelblad H, Randolph MA, et al. Vascularized bone allograft transplantation in a genetically defined rat model. Plast Reconstr Surg, 1985,75:335
7，王爱德.小型猪的利用价值及其品系繁育的进展.上海实验动物科学，1990，10(2)：128
8，贾广学，王玉新，卢利，等.自体颌下腺移植再造泪腺治疗重症干眼病.中华眼科杂志，1998，34：388～390
收稿1999-03-18, http://www.100md.com
单位：张继东(沈阳市口腔医院口腔外科)；王军(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)；王玉新(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)；郭永峰(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)
关键词：移植；同种异体；颌下腺；兔；猪
中国医科大学学报000121 摘要 目的：建立颌下腺同种异体原位移植的动物实验模型。方法：应用显微外科技术，分别选用猪和兔进行血供重建的颌下腺同种异体移植术。术后 24 h受体兔行同位素扫描，以确定移植物是否成活。结果：猪 3 例手术均失败，移植物存活无一超过 24 h；16 例兔存活 13 例，成功率 81.3%，建立了稳定的模型。结论：为建立颌下腺同种异体移植的模型，必须选择适当的动物。移植手术成功的关键在于熟练的显微外科技术和术后有效的抗感染措施。
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Establishment of Submandibular Gland Allografts Model in Rabbit
Wang Jun Wang Yuxin Guo Yongfeng et al
(Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The First Clinical College, China Medical University, Shenyang,110001)
ABSTRACT Objective:Our purpose was to establish an experimental model of submandibular gland allotransplantation. Methods：Young pigs and adult rabbits were selected, 3 pigs and 16 rabbits were the recipients of orthotopic submandibular gland allotransplants. Results:The successful rate of allografts operation was 0% in pigs and 81.3% in rabbits. Conclusion: Practised technic of microsurgery, operation time, and powerful antiinfective measures were essential for obtaining success.
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KEY WORDS transplantation; allogenetic; submandibular gland; rabbit；pig
颌下腺自体游离移植治疗干眼症的动物实验选用的是兔[1，2]。本实验以猪和兔作为建立颌下腺同种异体游离移植的实验动物，进行比较，为进一步实验准备条件。
1 材料与方法
1.1 实验动物 长白幼猪6只，体重13.0～15.0 kg，分成供、受体2组；成年健康大耳白兔32只，雄性18只，雌性14只，体重3.0～3.5 kg，随机分成供、受体2组。
1.2 手术
长白幼猪以氯胺酮22 mg/kg腹腔注射，阿托品0.5 mg肌注，0.25%硫喷妥钠耳缘静脉维持静滴。大耳白兔以20 mg/kg氯胺酮肌注。
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供体手术取左颌下切口，分离显露并游离颌下腺，仔细显露滋养腺体的动静脉及导管，向心性游离动、静脉，长约1.0 cm。动脉追至颈外动脉，直径约1.5 mm；静脉追至颈内静脉，直径约2.0 mm。在颈外动脉近分叉处结扎后，在结扎点远心端穿刺，注入肝素-利多卡因液使局部肝素化[3]，灌洗至腺体发白
后，结扎颈内静脉，准备移植腺体，血管蒂保留长约1.5 cm，导管长2.0 cm。
受体手术同期进行，手术经过相同。在颈外动脉距分叉1 cm处切断，近心端以血管夹止血，远心端结扎。颈内静脉在滋养静脉汇入处切断，远端结扎，近心端以血管夹止血。导管剪断结扎，腺体切除。
应用显微外科技术在显微镜(×10)下用9-0的线吻合移植腺体与受体的静脉、动脉，先静脉后动脉。导管外置，固定于创缘。开放血管夹后见血管迅速充盈，移植腺体很快红润，腺体平均缺血时间1 h。术毕庆大盐水冲洗，严密缝合创口，注意减张，防止腺体受压，创口以胶带严密包扎。
, 百拇医药
1.3 术后处理及观察
动物清醒后即可进食，常规饲料喂养。每天观察记录动物一般情况，如饮食、二便、精神状态等。术后每天青霉素160万U肌注，连用7 d。局部创口每天换药，观察创口颜色，有无渗出，溢脓等。
术后24 h受体兔行同位素扫描，以确定移植物是否成活，同时可观测腺体的功能状态[4]。
术后第7 d，手术取出移植腺体行病理检查。受体兔术后死亡的行尸检，取出腺体以10%福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜观察。
2 结果
长白幼猪存活无一例超过24 h，长白幼猪术后创口很快污染，其中1例术后第2 d创口裂开，腺体外露。大耳白兔移植手术建立了比较稳定的模型，成活13例，手术成功率达81.3%。大耳白兔术后7 d内均未见创口感染迹象，导管仍有分泌。术后第7 d病理所见，其中9例移植腺体呈现部分腺细胞脂肪变性，组织中有散在的单核细胞及淋巴细胞浸润；2例出现局部腺细胞损害，单核细胞和淋巴细胞浸润明显，呈中度排斥反应[5]。另外2例腺细胞部分损害大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润。有3例术后24 h同位素扫描显示移植腺体区核素无浓聚，表明腺体失活。病理证实动脉内血栓，腺体呈缺血性坏死改变。
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3 讨论
移植研究中模型的遗传背景对结果影响很大[6]，但近交系小鼠不适于行颌下腺移植手术，灵长类动物虽与人接近但价格高。猪和兔是常用的实验动物，本实验结果表明，应用大耳白兔建立颌下腺移植模型成功率较高。猪的消化系统和免疫系统与人相似[7]，但其生活习性难以保证术后创口不感染，同时幼猪颌下区脂肪过多，颌下腺位置较深，不利于手术操作。
颌下腺同种异体移植手术成功的关键在于：(1) 熟悉局部解剖，在短时间内完成颌下腺的分离、显露，处理好血管及导管。(2) 术中血管的分离、制备及吻合均应按照显微外科标准严格要求，以防止术后血栓形成，移植手术失败。(3) 手术应严格遵守无菌操作原则，术中即开始应用抗菌素，术后持续用药。同时术后加强局部换药，预防感染。术后受体兔应单笼饲养，防止动物间咬伤，影响创口愈合。另外，尽量缩短手术时间，术中减少出血量，以及缩短移植物缺血时间也都是非常重要的。
, 百拇医药
吻合血管的颌下腺同种异体移植是开创性的研究，国内、外文献尚未见报道。本实验动物模型的建立，为进一步研究颌下腺同种异体移植免疫排斥反应准备了条件，也为临床颌下腺同种异体移植治疗干眼症提供了依据[8]。
作者单位:张继东(中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001)
参考文献
1，Kumar PA, Macleod B. Microvascular submandibular gland transfer for the management of xerophthalmia: an experimental study. Br J Plast Surg, 1990,43(4):431_436
2，贾广学，王玉新，韩东升.颌下腺游离移植再造泪腺的实验研究.中国医科大学学报，1994，23()：446～448
, http://www.100md.com
3，陈昭民，韩德恩，吴德全.不灌洗法保存器官的动物实验及在小器官移植中应用体会.中国实用外科杂志，1999，19(5)：267～268
4，Lauer I, Sieg P, Bähre M, et al. Salivary gland scintigraphy using technetium-99m-pertechnetate after autotransplantation of the submandibular salivary gland in the correction of dry eye. Eur J Nucle Med, 1998,25(2):128_131
5，胡敏，张震康，张熙恩，等.犬同种异体下颌区复合器官移植后排斥反应的组织学特征.口腔颌面外科杂志，1998，8(2)：177～180
6，Yaremchuk MJ, Nettelblad H, Randolph MA, et al. Vascularized bone allograft transplantation in a genetically defined rat model. Plast Reconstr Surg, 1985,75:335
7，王爱德.小型猪的利用价值及其品系繁育的进展.上海实验动物科学，1990，10(2)：128
8，贾广学，王玉新，卢利，等.自体颌下腺移植再造泪腺治疗重症干眼病.中华眼科杂志，1998，34：388～390
收稿1999-03-18, http://www.100md.com