慢性粒细胞白血病染色体分析(附13例报告)
作者：周海岚 胡晓霞 俞康 沈树红
单位：周海岚(浙江省温州医学院附属第一医院 325000)；胡晓霞(浙江省温州医学院附属第一医院 325000)；俞康(浙江省温州医学院附属第一医院 325000)；沈树红(浙江省温州医学院附属第一医院 325000 温州医学院儿童医院血液科)
关键词：白血病；髓性；慢性；染色体
中国现代医学杂志000115目的：研究CML在初治、常规化疗、干扰素治疗、Allo-BMT后染色体的改变。方法：对13例初治CML， 其中7例接受Hu化疗6～12月，4例联用干扰素治疗6～12月，3例行Allo-BMT，后+30天～+18月进行染色体G显带分析(共45例次)，4例同时检测bcr/abl融合基因。结果：13例初治CML检测到100%Ph1染色体,均为标准易位t(9；22)。其中7例接受Hu化疗6～12月复查仍检测到80%～100%Ph1染色体，有2例多倍体和附加染色体异常。4例干扰素治疗6～12月，仅1例达细胞遗传学缓解。3例行Allo-BMT仅1例BMT后后+30天～+60天检测到10%Ph1染色体，随后复查均未检测到。余2例移植后即为供者核型。3例分别在Allo-BMT+4月、+9月、+12月检测bcr/abl融合基因均阳性，至今无临床、血液学、细胞遗传学复发，分别已存活+7月、+18月、+20月。结论：普通染色体分析为CML诊断、观察疗效的可靠指标。
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分类号：R733.7▲
Ph1染色体是慢性髓性白血病(CML)标志染色体，90%以上的CML患者可检测到该染色体[1]。本文对13例(45例次)CML患者在初治、化疗、干扰素治疗后及Allo-BMT后进行染色体分析，其中4例患者同时进行分子生物学检测bcr/abl融合基因，认为染色体分析在CML患者诊断及疗效观察中具有特别重要意义。
1 材料和方法
1.1 研究对象
13例患者均附合慢性髓性白血病诊断标准[1]，均为温医一院门诊及住院病人。其中7例病人单纯接受化疗口服羟基脲(Hu)；4例同时接受干扰素治疗，干扰素(Intron-A先灵-保雅公司生产)剂量300万u，隔日1次～每隔3日1次，疗程6～12月；3例接受Allo-BMT，其中2例赴上级医院行Allo-BMT后又回我院随访至今，这2例中1例先接受Intron-A治疗12月，临床、血液学处于CML加速期时行Allo-BMT。另1例在我院接受Allo-BMT，预处理方案均为Bu-Cy方案。2例女供男，1例男供男。
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1.2 染色体分析实验方法
1.2.1 标本收集 13例病人初诊时，7例Hu治疗后6～12月，4例在干扰素治疗后6～12月，3例在BMT后+30天～+18月。
1.2.2 标本制备与G显带 抽骨髓血5ml，接种于含20%胎牛血清或自体血浆McCoy's培养基(SIGAM公司)37℃温箱经24h短期培养，收获前2h加入秋水仙碱，使其终浓度为0.05ug/ml，收获细胞以37℃氯化钾低渗23min，3∶1甲醇—冰醋酸固定，常规制片，80℃烤片,标本老化后用2.5%胰酶(新疆产)消化，Gimsa染色，普通光学显微镜下镜检，分析20～50个中期分裂相。异常克隆按细胞遗传学国际命名体制(ISCN 1978)。
2 结果
13例病人初诊时处于慢性期，均检测到100%Ph1染色体，且为标准易位t(9;22)。7例Hu治疗后6～12月复查仍检测到80%～100%Ph1染色体，其中2例进入加速期，除上述Ph1染色体外，1例多倍体>10%，另1例附加染色体异常。4例接受Hu联合干扰素治疗，其中1例在6个月后复查未见Ph1染色体，达细胞遗传学缓解，1例6个月复查除Ph染色体外有附加染色体异常，临床和血液学均处于加速期，另2例在12月复查无变化。3例接受Allo-BMT治疗，其中1例先Hu+干扰素治疗12月，染色体分析无变化，但临床和血液学均处于加速期，移植后+30～+60天检测到10%Ph1染色体，随后免疫抑制剂减量后出现I度GVHD症状，+90天～+18月复查均为正常供者核型，至今无临床和血液学复发，无病存活18月。另2例在BMT+30天检测即完全为供者核型，至今无临床、血液学、细胞遗传学复发，分别已存活BMT+7月、+20月。3例接受Allo-BMT，患者在BMT前、BMT后+4月、+9月、12月分别检测bcr/abl融合基因均为阳性。
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3 讨论
CML起源于造血干细胞克隆异常,常规化疗不能使患者达到细胞遗传学缓解，目前认为干扰素是最有效药物，有可能使患者Ph1染以体部分或完全消失，约20%病人达到临床、血液学与细胞遗传学缓解。其机理可能为干扰素INF-a抑制造血细胞增殖或纠正造血干细胞的粘附功能使其归巢于骨髓基质层[2]。本组4例接受干扰素治疗6～12月染色体分析，只有1例达细胞遗传学缓解，完全反应为25%，与文献报导接近。
异基因骨髓移植是当前唯一根治CML方法，可使半数以上病人达到细胞遗传学甚至生物学缓解。故移植后供者骨髓植活，Ph1染色体消失。植活后复发定义，参照Arthur[3]提出的标准，移植后即使发现1个Ph1阳性的中期分裂相即为“复发”，继续追踪未再发现阳性的Ph1阳性细胞列为“暂时性复发”。如果进一步复查Ph1阳性细胞持续存在而又无CML的临床和血液学特征时列为“细胞遗传学复发”。故染色体分析是供者骨髓植活和复发的可靠指标。本组3例接受Allo-BMT，移植后染色体分析2例为供者核型，1列出现短暂细胞遗传学复发，在免疫抑制剂减量诱发I度GVHD后复查Ph1阳性细胞消失，证实有GVL(移植抗白血病)作用，同时也说明染色体分析在CML治疗中起重要作用，在发现异常克隆时应及时采取措施彻底根治白血病。文献报导CML患者接受Allo-BMT后1年内应用分子生物学(RT-PCR)聚合酶联技术检测bcr/abl融合基因64%阳性，5年后仍有22%阳性，而病人无复发[4]。本文3例患者接受Allo-BMT后+4月+9月+12月均检测到bcr/abl融合基因，至今无临床、血液学、细胞遗传学复发，RT-PCR敏感性太高，特异性不强，不能作为CML患者Allo-BMT后微量残留白血病(MRD)和预测预后常规指标，有报道称新的染色体原位抑制杂交技术敏感性10-3～10-4，特异性强，有可能成为Allo-BMT后检测MRD的理想技术[5]。■
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参考文献：
[1]扬天楹，张子南，郝玉书.临床血液学.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1992：249
[2]余寿益.干扰素-a对慢性髓性白血病的作用机制.临床血液学杂志，1997；10(3)：136
[3]Arthur ck, Apperley JF, Guo AP, et al.Cytogentic events after bone marrow transplantation for chronic myloid leukemia in chronic phase.blood,1988；71:1179
[4]Xu-WM,Pia-XH,Addy-L el al.Minimal residual disease in bone marrow transplant recipient with chronic myeloid leukemia.bone-Marrow-Transpiant.1994;14(2):229
[5]El-Rifai-W,Ruutu-T,Vettenranta-K et al.MRD after Allo-BMT for CML:a metaphase study.Br-J-Haematol.1996;92(2):365
谢兆霞审稿 丁丽云编辑
1999-09-26收稿, http://www.100md.com
单位：周海岚(浙江省温州医学院附属第一医院 325000)；胡晓霞(浙江省温州医学院附属第一医院 325000)；俞康(浙江省温州医学院附属第一医院 325000)；沈树红(浙江省温州医学院附属第一医院 325000 温州医学院儿童医院血液科)
关键词：白血病；髓性；慢性；染色体
中国现代医学杂志000115目的：研究CML在初治、常规化疗、干扰素治疗、Allo-BMT后染色体的改变。方法：对13例初治CML， 其中7例接受Hu化疗6～12月，4例联用干扰素治疗6～12月，3例行Allo-BMT，后+30天～+18月进行染色体G显带分析(共45例次)，4例同时检测bcr/abl融合基因。结果：13例初治CML检测到100%Ph1染色体,均为标准易位t(9；22)。其中7例接受Hu化疗6～12月复查仍检测到80%～100%Ph1染色体，有2例多倍体和附加染色体异常。4例干扰素治疗6～12月，仅1例达细胞遗传学缓解。3例行Allo-BMT仅1例BMT后后+30天～+60天检测到10%Ph1染色体，随后复查均未检测到。余2例移植后即为供者核型。3例分别在Allo-BMT+4月、+9月、+12月检测bcr/abl融合基因均阳性，至今无临床、血液学、细胞遗传学复发，分别已存活+7月、+18月、+20月。结论：普通染色体分析为CML诊断、观察疗效的可靠指标。
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Ph1染色体是慢性髓性白血病(CML)标志染色体，90%以上的CML患者可检测到该染色体[1]。本文对13例(45例次)CML患者在初治、化疗、干扰素治疗后及Allo-BMT后进行染色体分析，其中4例患者同时进行分子生物学检测bcr/abl融合基因，认为染色体分析在CML患者诊断及疗效观察中具有特别重要意义。
1 材料和方法
1.1 研究对象
13例患者均附合慢性髓性白血病诊断标准[1]，均为温医一院门诊及住院病人。其中7例病人单纯接受化疗口服羟基脲(Hu)；4例同时接受干扰素治疗，干扰素(Intron-A先灵-保雅公司生产)剂量300万u，隔日1次～每隔3日1次，疗程6～12月；3例接受Allo-BMT，其中2例赴上级医院行Allo-BMT后又回我院随访至今，这2例中1例先接受Intron-A治疗12月，临床、血液学处于CML加速期时行Allo-BMT。另1例在我院接受Allo-BMT，预处理方案均为Bu-Cy方案。2例女供男，1例男供男。
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1.2 染色体分析实验方法
1.2.1 标本收集 13例病人初诊时，7例Hu治疗后6～12月，4例在干扰素治疗后6～12月，3例在BMT后+30天～+18月。
1.2.2 标本制备与G显带 抽骨髓血5ml，接种于含20%胎牛血清或自体血浆McCoy's培养基(SIGAM公司)37℃温箱经24h短期培养，收获前2h加入秋水仙碱，使其终浓度为0.05ug/ml，收获细胞以37℃氯化钾低渗23min，3∶1甲醇—冰醋酸固定，常规制片，80℃烤片,标本老化后用2.5%胰酶(新疆产)消化，Gimsa染色，普通光学显微镜下镜检，分析20～50个中期分裂相。异常克隆按细胞遗传学国际命名体制(ISCN 1978)。
2 结果
13例病人初诊时处于慢性期，均检测到100%Ph1染色体，且为标准易位t(9;22)。7例Hu治疗后6～12月复查仍检测到80%～100%Ph1染色体，其中2例进入加速期，除上述Ph1染色体外，1例多倍体>10%，另1例附加染色体异常。4例接受Hu联合干扰素治疗，其中1例在6个月后复查未见Ph1染色体，达细胞遗传学缓解，1例6个月复查除Ph染色体外有附加染色体异常，临床和血液学均处于加速期，另2例在12月复查无变化。3例接受Allo-BMT治疗，其中1例先Hu+干扰素治疗12月，染色体分析无变化，但临床和血液学均处于加速期，移植后+30～+60天检测到10%Ph1染色体，随后免疫抑制剂减量后出现I度GVHD症状，+90天～+18月复查均为正常供者核型，至今无临床和血液学复发，无病存活18月。另2例在BMT+30天检测即完全为供者核型，至今无临床、血液学、细胞遗传学复发，分别已存活BMT+7月、+20月。3例接受Allo-BMT，患者在BMT前、BMT后+4月、+9月、12月分别检测bcr/abl融合基因均为阳性。
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3 讨论
CML起源于造血干细胞克隆异常,常规化疗不能使患者达到细胞遗传学缓解，目前认为干扰素是最有效药物，有可能使患者Ph1染以体部分或完全消失，约20%病人达到临床、血液学与细胞遗传学缓解。其机理可能为干扰素INF-a抑制造血细胞增殖或纠正造血干细胞的粘附功能使其归巢于骨髓基质层[2]。本组4例接受干扰素治疗6～12月染色体分析，只有1例达细胞遗传学缓解，完全反应为25%，与文献报导接近。
异基因骨髓移植是当前唯一根治CML方法，可使半数以上病人达到细胞遗传学甚至生物学缓解。故移植后供者骨髓植活，Ph1染色体消失。植活后复发定义，参照Arthur[3]提出的标准，移植后即使发现1个Ph1阳性的中期分裂相即为“复发”，继续追踪未再发现阳性的Ph1阳性细胞列为“暂时性复发”。如果进一步复查Ph1阳性细胞持续存在而又无CML的临床和血液学特征时列为“细胞遗传学复发”。故染色体分析是供者骨髓植活和复发的可靠指标。本组3例接受Allo-BMT，移植后染色体分析2例为供者核型，1列出现短暂细胞遗传学复发，在免疫抑制剂减量诱发I度GVHD后复查Ph1阳性细胞消失，证实有GVL(移植抗白血病)作用，同时也说明染色体分析在CML治疗中起重要作用，在发现异常克隆时应及时采取措施彻底根治白血病。文献报导CML患者接受Allo-BMT后1年内应用分子生物学(RT-PCR)聚合酶联技术检测bcr/abl融合基因64%阳性，5年后仍有22%阳性，而病人无复发[4]。本文3例患者接受Allo-BMT后+4月+9月+12月均检测到bcr/abl融合基因，至今无临床、血液学、细胞遗传学复发，RT-PCR敏感性太高，特异性不强，不能作为CML患者Allo-BMT后微量残留白血病(MRD)和预测预后常规指标，有报道称新的染色体原位抑制杂交技术敏感性10-3～10-4，特异性强，有可能成为Allo-BMT后检测MRD的理想技术[5]。■
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参考文献：
[1]扬天楹，张子南，郝玉书.临床血液学.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1992：249
[2]余寿益.干扰素-a对慢性髓性白血病的作用机制.临床血液学杂志，1997；10(3)：136
[3]Arthur ck, Apperley JF, Guo AP, et al.Cytogentic events after bone marrow transplantation for chronic myloid leukemia in chronic phase.blood,1988；71:1179
[4]Xu-WM,Pia-XH,Addy-L el al.Minimal residual disease in bone marrow transplant recipient with chronic myeloid leukemia.bone-Marrow-Transpiant.1994;14(2):229
[5]El-Rifai-W,Ruutu-T,Vettenranta-K et al.MRD after Allo-BMT for CML:a metaphase study.Br-J-Haematol.1996;92(2):365
谢兆霞审稿 丁丽云编辑
1999-09-26收稿, http://www.100md.com