前列腺增生和癌变组织中c-met蛋白表达的意义*
作者：谢庆祥 汪鸿 缪友仁 李金雨
单位：解放军第175中心医院泌尿外科 漳州 363000
关键词：前列腺增生；前列腺肿瘤；c-met蛋白；增殖细胞核抗原；血管形成
中国现代医学杂志000112目的：探讨肝细胞生长因子受体(c-met)蛋白在前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PC)中表达及其与细胞增殖和血管形成之间的关系。方法：应用免疫组化SP方法检测18例正常前列腺(NP)、62例BPH和33例PC组织中c-met蛋白的表达及其PCNA指数和微血管密度(MVD)。结果：PC组织中c-met表达显著高于BPH和NP上皮细胞中表达，后两者之间比较也有显著性差异。但两者间质组织中表达无显著差异。BPH上皮细胞和PC组织中c-met表达与PCNA指数正相关，但与MVD之间均无显著相关性。c-met表达与肿瘤病理分化分期之间密切相关。结论：c-met可能通过促进细胞增殖增加的途径而在前列腺上皮细胞增生和癌变的发生发展过程中起重要作用，并且可作为肿瘤生物学行为标记物。
, 百拇医药
分类号：R697 R737.2▲
间质-上皮相互作用在良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PC)的发病机制中作用已受到人们重视，其中起主要介导作用的是多肽生长因子。肝细胞生长因子(HGF)是一种具有多种生物学功能的多肽生长因子，其在前列腺发育、生长及癌变过程中的作用近年来已受人们重视，但目前对其受体c-met蛋白研究的较少，国内尚未见报道[1，2]。本组应用免疫组化方法检测c-met蛋白在正常、增生和癌变前列腺组织中分布表达并探讨其与细胞增殖和血管形成之间的关系。
1 材料与方法
1.1 组织标本
62例BPH，年龄51～80岁，平均63.3岁；33例PC，年龄58～72岁，平均66岁，其中按Mostofi分级：高分化10例、中分化14例、低分化9例，按Jewett-Whitmore-Prout分期：A期15例、B期14例、C期和D期各2例。18例正常前列腺(NP)标本作为对照。石蜡包埋，切片厚4μm。所有标本均常规HE染色，病理组织学证实。
, 百拇医药
1.2 免疫组化采用SP方法
c-met(1∶30)和第Ⅷ抗原相关因子(1∶100)均为兔抗多克隆抗体，PCNA(1∶50)为鼠抗单克隆抗体，DAB显色，苏木素复染。PBS替代—抗作为阴性对照。
1.3 结果判定
c-met判定标准：根据染色程度、分布和范围综合判断，分为阴性(-)和阳性(+)、(++)及(+++)，共四个等级。微血管密度(MVD)的计数：第Ⅷ抗原相关因子阳性染色的即为微血管，低倍镜下观察并选择了5个MVD最高的区域而后高倍镜(×400)下计数，取平均值。PCNA指数的计数：高倍镜下分别计数间质和上皮中阳性细胞百分比，其中至少计数500个间质细胞和500个上皮细胞。
1.4 统计方法
χ2检验和t检验。
, 百拇医药
2 结果
c-met蛋白主要分布于前列腺良恶性上皮细胞浆和胞膜，部分NP和BPH间质细胞中可见散在阳性染色。BPH的上皮细胞中c-met蛋白表达显著高于NP(P<0.05)，但间质中两者表达并无显著差异性(P>0.05)。BPH上皮细胞中c-met蛋白表达显著高于间质细胞(P<0.05)，而NP中两者之间并无显著差异性(P>0.05)。PC组织中c-met蛋白表达显著高于NP和BPH(P<0.01)。具体表达见表1。
表1 前列腺组织中c-met蛋白表达的结果 组织
n
上皮细胞
间质细胞
-
+
, 百拇医药
++
+++
-
+
++
+++
NP
18
12
3
3
0
10
5
, 百拇医药
2
1
BPH
62
19
18
23
2
42
7
10
3
PC
33
, http://www.100md.com
8
6
12
7
c-met蛋白表达与PCNA指数及MVD之间关系：BPH上皮细胞中c-met蛋白阴性表达和阳性表达的PCNA指数分别为12.7±6.0和22.8±14.3，P<0.001；PC组织中c-met蛋白阴性和阳性表达的PCNA指数分别为27.9±12.1和41.5±17.2，P<0.05。BPH间质细胞及NP中两者表达之间均无相关性(P>0.05)。NP和BPH中c-met蛋白表达与MVD之间也均无显著相关性(P>0.05)。
c-met蛋白表达与肿瘤分化分期之间关系：高分化+中分化PC组织中c-met蛋白表达显著低于低分化肿瘤的表达(P<0.05)。A期+B期的PC组织中c-met蛋白表达显著低于C期+D期(P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
研究表达HGF广泛分布于体内多种组织中，具有促进细胞有丝分裂、细胞运动、血管形成和上皮形态形成等多种生物学性能[1，4]。HGF受体c-met蛋白为原癌基因c-met拷贝产物，分子量为190KD，属于具有酪氨酸激酶活性的跨膜生长因子受体家庭，也发现其广泛存在于体内多种组织中[3，4]。
实验已表明HGF与上皮形态形成有密切关系，而且以旁分泌方式促进前列腺上皮细胞增殖[2，4]。本组结果则显示c-met蛋白主要分布于前列腺上皮细胞，而且部分标本中可见基底细胞染色增强，这与其它研究结果相似[5～7]，提示c-met参与前列腺上皮细胞生长发育过程。但本组同时发现部分间质组织中c-met蛋白也呈阳性表达，在NP组织中其表达程度甚至略高于上皮细胞，但在BPH组织中却显著低于上皮细胞表达，PC组织中则仅见于癌细胞，因此推测c-met性质、合成部位及分泌途径在前列腺增生、癌变过程中发生了某种改变，这可能与HGF主要促进上皮细胞增殖、增生及癌变有关。
, 百拇医药
对于c-met在BPH发病中详尽作用尚不清楚。本组发现BPH上皮细胞中c-met蛋白表达显著高于NP，但两者间质组织中表达并无显著差异性，提示BPH发生与上皮细胞c-met表达异常有密切关系，上皮细胞c-met蛋白异常高表达表明了其在上皮细胞增生的发生发展过程中起着重要作用，而且HGF-c-met系统可能是间质-上皮相互作用机制中重要的介质因子。
研究已表明c-met异常表达与许多肿瘤发生发展有密切关系。本组结果显示PC组织c-met蛋白表达显著高于NP和BPH组织，而且仅分布于癌细胞中。其它研究也报道了类似结果[5～7]。研究已表明HGF仅分布于PC组织中间质细胞[5，6]，提示HGF-c-met系统可能通过旁分泌途径促进PC的发生发展。Humphrey等[6]研究发现转移的PC组织中c-met蛋白表达明显增高，同时雄激素拮抗的PC细胞株中c-met基因和蛋白表达显著高于雄激素敏感的细胞株。本组结果也显示c-met蛋白表达与肿瘤分化分期之间呈正相关，而且在部分雄激素阴性表达的组织中也发现c-met蛋白强阳性表达[8]，提示c-met表达强度能够反映肿瘤恶性程度和浸润深度，可能是肿瘤生物学行为较有价值的评估指标，其与雄激素之间有密切联系，可能存在着负向调控关系，这有待于今后进一步研究证实。
, http://www.100md.com
研究表明HGF是细胞增殖重要的促进因子[1，4]，本组发现增生和癌上皮细胞中c-met蛋白表达与PCNA指数之间密切相关，而正常组织中两者无显著相关关系，提示由于上皮细胞c-met异常高表达，而导致其对HGF敏感性增强，从而促使该细胞过度增殖、增生乃至恶性转化。虽然HGF是一种血管形成的促进因子，而且本组部分组织中可见血管内皮细胞c-met蛋白阳性染色，但c-met蛋白表达与MVD之间并无相关关系，提示c-met对前列腺血管形成的作用并不显著，表明c-met主要通过促进细胞增殖途径在前列腺生长、分化乃至增生及癌变过程中起重要作用。■
*本课题受南京军区联勤部十八分部科研基金资助(98010501)
参考文献：
[1]Montesano R,Matsumoto K,Nakamura T,et al.Identification of a fibroblast-derived epithelial morphogen as hepatocyte growth factor.Cell,1991,67:901～908
, 百拇医药
[2]Kasai S,Sugimura K,Matsumoto K,et al.hepatocyte growth factor is a paracrine regulator of rat prostate epithelial growth.Biochem Biophys Res Commun, 1996;228:646～652
[3]Bottaro DP,Rubin JS,Faletto DL,et al.Identification of the hepatocyte growth factor receptor as the c-met proto-oncogene product.Science,1991;251:802～804
[4]Birchmeier W,Brinkmann V,Niemann C,et al.Role of HGF/SF and c-met in morphogenesis and metastasis of epithelial cells.Ciba Found Symp,1997;212:230～240
, 百拇医药
[5]Kurimoto S,Moriyama N,Horie S,et al.Co-expression hepatocyte growth factor and its receptor in human prostate cancer.Histochem J,1998;30:27～32
[6]Humphrey PA,Zhu X,Zarnegar R,et al.Hepatocyte growth factor and its receptor (c-met) in prostatic carcinoma.Am J Pathol,1995;147:386～396
[7]Pisters LL,Troncoso P,Zhau HE,et al.c-met proto-oncogene expression in benign and malignant human prostate tissues.J Urol,1995;154:293～298
[8]谢庆祥，刘春晓，姚华强，等.EGFR和ABS有前列腺增生和癌变组织中的表达及意义.临床泌尿外科杂志，1998；13：455～458
赖金庚审稿 黄其伟编辑
1999-05-04收稿, 百拇医药
单位：解放军第175中心医院泌尿外科 漳州 363000
关键词：前列腺增生；前列腺肿瘤；c-met蛋白；增殖细胞核抗原；血管形成
中国现代医学杂志000112目的：探讨肝细胞生长因子受体(c-met)蛋白在前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PC)中表达及其与细胞增殖和血管形成之间的关系。方法：应用免疫组化SP方法检测18例正常前列腺(NP)、62例BPH和33例PC组织中c-met蛋白的表达及其PCNA指数和微血管密度(MVD)。结果：PC组织中c-met表达显著高于BPH和NP上皮细胞中表达，后两者之间比较也有显著性差异。但两者间质组织中表达无显著差异。BPH上皮细胞和PC组织中c-met表达与PCNA指数正相关，但与MVD之间均无显著相关性。c-met表达与肿瘤病理分化分期之间密切相关。结论：c-met可能通过促进细胞增殖增加的途径而在前列腺上皮细胞增生和癌变的发生发展过程中起重要作用，并且可作为肿瘤生物学行为标记物。
, 百拇医药
分类号：R697 R737.2▲
间质-上皮相互作用在良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PC)的发病机制中作用已受到人们重视，其中起主要介导作用的是多肽生长因子。肝细胞生长因子(HGF)是一种具有多种生物学功能的多肽生长因子，其在前列腺发育、生长及癌变过程中的作用近年来已受人们重视，但目前对其受体c-met蛋白研究的较少，国内尚未见报道[1，2]。本组应用免疫组化方法检测c-met蛋白在正常、增生和癌变前列腺组织中分布表达并探讨其与细胞增殖和血管形成之间的关系。
1 材料与方法
1.1 组织标本
62例BPH，年龄51～80岁，平均63.3岁；33例PC，年龄58～72岁，平均66岁，其中按Mostofi分级：高分化10例、中分化14例、低分化9例，按Jewett-Whitmore-Prout分期：A期15例、B期14例、C期和D期各2例。18例正常前列腺(NP)标本作为对照。石蜡包埋，切片厚4μm。所有标本均常规HE染色，病理组织学证实。
, 百拇医药
1.2 免疫组化采用SP方法
c-met(1∶30)和第Ⅷ抗原相关因子(1∶100)均为兔抗多克隆抗体，PCNA(1∶50)为鼠抗单克隆抗体，DAB显色，苏木素复染。PBS替代—抗作为阴性对照。
1.3 结果判定
c-met判定标准：根据染色程度、分布和范围综合判断，分为阴性(-)和阳性(+)、(++)及(+++)，共四个等级。微血管密度(MVD)的计数：第Ⅷ抗原相关因子阳性染色的即为微血管，低倍镜下观察并选择了5个MVD最高的区域而后高倍镜(×400)下计数，取平均值。PCNA指数的计数：高倍镜下分别计数间质和上皮中阳性细胞百分比，其中至少计数500个间质细胞和500个上皮细胞。
1.4 统计方法
χ2检验和t检验。
, 百拇医药
2 结果
c-met蛋白主要分布于前列腺良恶性上皮细胞浆和胞膜，部分NP和BPH间质细胞中可见散在阳性染色。BPH的上皮细胞中c-met蛋白表达显著高于NP(P<0.05)，但间质中两者表达并无显著差异性(P>0.05)。BPH上皮细胞中c-met蛋白表达显著高于间质细胞(P<0.05)，而NP中两者之间并无显著差异性(P>0.05)。PC组织中c-met蛋白表达显著高于NP和BPH(P<0.01)。具体表达见表1。
表1 前列腺组织中c-met蛋白表达的结果 组织
n
上皮细胞
间质细胞
-
+
, 百拇医药
++
+++
-
+
++
+++
NP
18
12
3
3
0
10
5
, 百拇医药
2
1
BPH
62
19
18
23
2
42
7
10
3
PC
33
, http://www.100md.com
8
6
12
7
c-met蛋白表达与PCNA指数及MVD之间关系：BPH上皮细胞中c-met蛋白阴性表达和阳性表达的PCNA指数分别为12.7±6.0和22.8±14.3，P<0.001；PC组织中c-met蛋白阴性和阳性表达的PCNA指数分别为27.9±12.1和41.5±17.2，P<0.05。BPH间质细胞及NP中两者表达之间均无相关性(P>0.05)。NP和BPH中c-met蛋白表达与MVD之间也均无显著相关性(P>0.05)。
c-met蛋白表达与肿瘤分化分期之间关系：高分化+中分化PC组织中c-met蛋白表达显著低于低分化肿瘤的表达(P<0.05)。A期+B期的PC组织中c-met蛋白表达显著低于C期+D期(P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
研究表达HGF广泛分布于体内多种组织中，具有促进细胞有丝分裂、细胞运动、血管形成和上皮形态形成等多种生物学性能[1，4]。HGF受体c-met蛋白为原癌基因c-met拷贝产物，分子量为190KD，属于具有酪氨酸激酶活性的跨膜生长因子受体家庭，也发现其广泛存在于体内多种组织中[3，4]。
实验已表明HGF与上皮形态形成有密切关系，而且以旁分泌方式促进前列腺上皮细胞增殖[2，4]。本组结果则显示c-met蛋白主要分布于前列腺上皮细胞，而且部分标本中可见基底细胞染色增强，这与其它研究结果相似[5～7]，提示c-met参与前列腺上皮细胞生长发育过程。但本组同时发现部分间质组织中c-met蛋白也呈阳性表达，在NP组织中其表达程度甚至略高于上皮细胞，但在BPH组织中却显著低于上皮细胞表达，PC组织中则仅见于癌细胞，因此推测c-met性质、合成部位及分泌途径在前列腺增生、癌变过程中发生了某种改变，这可能与HGF主要促进上皮细胞增殖、增生及癌变有关。
, 百拇医药
对于c-met在BPH发病中详尽作用尚不清楚。本组发现BPH上皮细胞中c-met蛋白表达显著高于NP，但两者间质组织中表达并无显著差异性，提示BPH发生与上皮细胞c-met表达异常有密切关系，上皮细胞c-met蛋白异常高表达表明了其在上皮细胞增生的发生发展过程中起着重要作用，而且HGF-c-met系统可能是间质-上皮相互作用机制中重要的介质因子。
研究已表明c-met异常表达与许多肿瘤发生发展有密切关系。本组结果显示PC组织c-met蛋白表达显著高于NP和BPH组织，而且仅分布于癌细胞中。其它研究也报道了类似结果[5～7]。研究已表明HGF仅分布于PC组织中间质细胞[5，6]，提示HGF-c-met系统可能通过旁分泌途径促进PC的发生发展。Humphrey等[6]研究发现转移的PC组织中c-met蛋白表达明显增高，同时雄激素拮抗的PC细胞株中c-met基因和蛋白表达显著高于雄激素敏感的细胞株。本组结果也显示c-met蛋白表达与肿瘤分化分期之间呈正相关，而且在部分雄激素阴性表达的组织中也发现c-met蛋白强阳性表达[8]，提示c-met表达强度能够反映肿瘤恶性程度和浸润深度，可能是肿瘤生物学行为较有价值的评估指标，其与雄激素之间有密切联系，可能存在着负向调控关系，这有待于今后进一步研究证实。
, http://www.100md.com
研究表明HGF是细胞增殖重要的促进因子[1，4]，本组发现增生和癌上皮细胞中c-met蛋白表达与PCNA指数之间密切相关，而正常组织中两者无显著相关关系，提示由于上皮细胞c-met异常高表达，而导致其对HGF敏感性增强，从而促使该细胞过度增殖、增生乃至恶性转化。虽然HGF是一种血管形成的促进因子，而且本组部分组织中可见血管内皮细胞c-met蛋白阳性染色，但c-met蛋白表达与MVD之间并无相关关系，提示c-met对前列腺血管形成的作用并不显著，表明c-met主要通过促进细胞增殖途径在前列腺生长、分化乃至增生及癌变过程中起重要作用。■
*本课题受南京军区联勤部十八分部科研基金资助(98010501)
参考文献：
[1]Montesano R,Matsumoto K,Nakamura T,et al.Identification of a fibroblast-derived epithelial morphogen as hepatocyte growth factor.Cell,1991,67:901～908
, 百拇医药
[2]Kasai S,Sugimura K,Matsumoto K,et al.hepatocyte growth factor is a paracrine regulator of rat prostate epithelial growth.Biochem Biophys Res Commun, 1996;228:646～652
[3]Bottaro DP,Rubin JS,Faletto DL,et al.Identification of the hepatocyte growth factor receptor as the c-met proto-oncogene product.Science,1991;251:802～804
[4]Birchmeier W,Brinkmann V,Niemann C,et al.Role of HGF/SF and c-met in morphogenesis and metastasis of epithelial cells.Ciba Found Symp,1997;212:230～240
, 百拇医药
[5]Kurimoto S,Moriyama N,Horie S,et al.Co-expression hepatocyte growth factor and its receptor in human prostate cancer.Histochem J,1998;30:27～32
[6]Humphrey PA,Zhu X,Zarnegar R,et al.Hepatocyte growth factor and its receptor (c-met) in prostatic carcinoma.Am J Pathol,1995;147:386～396
[7]Pisters LL,Troncoso P,Zhau HE,et al.c-met proto-oncogene expression in benign and malignant human prostate tissues.J Urol,1995;154:293～298
[8]谢庆祥，刘春晓，姚华强，等.EGFR和ABS有前列腺增生和癌变组织中的表达及意义.临床泌尿外科杂志，1998；13：455～458
赖金庚审稿 黄其伟编辑
1999-05-04收稿, 百拇医药