肺癌中bcl-2蛋白表达的研究
作者：刘巍 黄书伟 刘灿明
单位：广州医学院病理教研室，广州 510182
关键词：肺癌；bcl-2蛋白；免疫组化
广州医学院学报000121 中图分类号 R734.2 文献标识码：A 文章编号：1008-1836(2000)01-0066-03
细胞凋亡与肿瘤发生的关系是目前肿瘤研究的“热点”之一。Bcl-2基因作为抑制细胞凋亡的基因受到了广泛的关注。Bcl-2基因定位于人染色体18q21，编码一相对分子量为25kD的线粒体内膜蛋白，该种蛋白表达时，可抑制细胞凋亡，从而导致癌变[1、2、3]。本文通过对115例肺癌石蜡切片做免疫组化检测，探讨Bcl-2蛋白表达状况及意义。
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 材料
取自广州医学院第一附属医院1994～1996年的外检蜡块共115例，其中鳞癌39例、腺癌46例、小细胞癌30例。各蜡块连续切片2张，分别进行HE染色复诊和免疫组化。
1.2 免疫组化试剂
单克隆鼠抗人Bcl-2蛋白；LSAB试剂盒。均为DAKO公司产品。
Bcl-2蛋白浓度为1∶40，程序按说明书进行。阳性对照为淋巴结，阴性对照以TBS代替一抗。
1.3 结果判断
以胞浆、胞膜呈清晰棕色的细胞数大于10%为阳性。见图1、2、3。
, 百拇医药
图1 肺癌中bcl-2阳性表达(HE10×10)
图2 癌性腺体bcl-2阳性(HE10×10)
图3 bcl-2阳性癌细胞(HE10×40)
1.4 统计分析
采用χ2检验。
2 结果
2.1 115例肺癌中Bcl-2蛋白免疫组化染色结果见表1。Bcl-2蛋白表达率为40.87%，其中鳞癌35.91%，腺癌26.11%，小细胞癌70%。
, 百拇医药
表1 三种类型肺癌中Bcl-2蛋白表达情况 组织学类型
例数
+
-
阳性率%
鳞癌
39
14
25
35.9
腺癌
46
12
, 百拇医药
34
26.1
小细胞癌
30
21
9
70
合计
115
47
69
40.9
小细胞癌与鳞癌比较，两者之间有显著性差异(P<0.01)；小细胞癌与腺癌比较，两者之间有显著性差异(P<0.01)；小细胞癌与非小细胞癌(鳞癌+腺癌)比较，两者之间有显著性差异(P<0.01)；鳞癌与腺癌比较，两者之间无显著性差异(P>0.05)
, 百拇医药
2.2 Bcl-2蛋白与淋巴结转移的关系见表2。表2 Bcl-2蛋白与淋巴结转移的关系 淋巴结转移
Bcl-2
+
蛋白
-
合计
+
14
32
46
-
11
, 百拇医药 12
23
合计
25
44
69
淋巴结转移与Bcl-2蛋白表达无关(P>0.05)
经病理诊断确证115例病例中，46例有淋巴结转移，23例无。其余无法判定。经检验，淋巴结转移与Bcl-2蛋白表达无关(P>0.05)。
2.3 Bcl-2蛋白表达与肺癌分化程度的关系见表3。
表3 Bcl-2蛋白表达与肺癌分化程度的关系 分化程度
, http://www.100md.com
鳞癌
腺癌
例数
+
-
例数
+
-
高分化
8
5
3
10
6
, http://www.100md.com
4
中分化
13
6
7
8
4
4
低分化
18
3
15
28
2
, 百拇医药
22
合 计
39
14
25
46
12
30
高分化肺癌与低分化肺癌比较，两者之间有显著性差异(P<0.05)2.4 Bcl-2蛋白表达与性别、年龄的关系见表4。
表4 Bcl-2蛋白表达与性别、年龄的关系 Bcl-2蛋白表达
+
, http://www.100md.com -
男
36
50
女
11
18
<50
11
14
>=50
36
54
Bcl-2蛋白表达与性别、年龄无关(P>0.05)3 讨论
, 百拇医药
Bcl-2是一种抑制细胞程序性死亡的存活基因，其产生的蛋白质可抑制细胞凋亡[4]，并可促使细胞生长，最终导致细胞癌变[5]。因此，Bcl-2基因及其表达产物在恶性肿瘤的发生和发展方面有很重要的意义[6，7]。我们用免疫组化方法对115例肺癌进行了Bcl-2蛋白检测，分析不同组织学类型和分化程度的肺癌中Bcl-2蛋白的作用。
实验结果表明Bcl-2蛋白在肺癌中有一定的表达率(40%)，尤其是在小细胞癌中，Bcl-2蛋白表达率高达70%，与非小细胞癌(鳞癌+腺癌)比较具有显著性差异(P<0.01)。这与一些文献的报道是一致的[4，8，9]。因此，我们认为Bcl-2蛋白在小细胞癌和非小细胞癌形成和发展过程中所起的作用是不同的。Bcl-2蛋白在小细胞癌的发生和发展中具有极其重要的作用。这可能与小细胞癌的起源组织有关。小细胞癌起源于支气管粘膜上皮的嗜银细胞，与非小细胞癌的起源组织完全不同。Bcl-2导致小细胞癌发生的机制可能与其异常表达阻碍了正常的细胞凋亡进程有关。而在非小细胞癌的形成过程中Bcl-2只是一个次要因素。有研究者认为Bcl-2在非小细胞癌发生中属于基因的次级激活(Secondary Activation)，也就是说，在Bcl-2之前，已有其它致癌因子发挥了作用[4]。我们的合作研究发现Bcl-2和P53蛋白表达在非小细胞肺癌中呈负相关(文献尚未发表)，可能支持以上观点。
, 百拇医药
我们的研究还显示Bcl-2蛋白表达与非小细胞癌的分化程度有关。高分化肺癌中Bcl-2蛋白的表达率高于低分化癌，两者之间有显著性差异，提示Bcl-2蛋白与肺癌分化不良有关，可作为判断非小细胞肺癌生物学行为的参考指标。
同时，我们对Bcl-2蛋白与患者年龄、性别以及淋巴结转移的关系做了分析，发现Bcl-2蛋白与上述因素无关。
作者简介：刘巍，女(1968.8-)，硕士，讲师。研究方向：肺癌。
参考文献
[1]Reed JC. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death[J]. J Cell Biol,1994;124:1
[2]Sinicrope FA,Ruan SB,Cleary KR,et al. Bcl-2 and P53 oncoprotein expression during colorectal rumorignesis[J]. Cancer Res,1995;55:237
, 百拇医药
[3]皋岚湘，丁华野.Bcl-2基因与恶性肿瘤.国外医学生理、病理科学与临床分册[J],1996;16：69
[4]Ritter JH,Dresler CM,Wick MR. Expression of Bcl-2 protein in stage TINOMO non-small cell lung carcinoma[J]. Human Pathology,1995;26:1227-1232
[5]Pezzella F,Turley H,Kuzu I,et al. Bcl-2 protein in non-small lung carcinoma[J]. The New England Journal of Medicine,1993;329:690～5
[6]Walter C,Robertson L,Myskow M,et al. Expression fo the Bcl-2 protein in normal and dysplastic bronchial epithelium and in lung carcinomas[J]. British Journal of Cancer,1995;22:164～169
, 百拇医药
[7]Fleming MV,Guinee DG,Dhu WS,et al. Bcl-2 immunlhistochemistry in a surgical series of non-small cell lung cancer patients[J]. Human Pathology,1998;29(1)60～64
[8]Ben-Evra-JM,Komstein MJ,Grimes MM,et al. Small cell carcinomas of the lung express the Bcl-2 Protein[J]. AM J Pathol,1994;5:1036-40
[9]郭琳琅，曹长安，肖莎.抗凋亡基因Bcl-2在肺癌中的异常表达[J].中华病理学杂志,1996;25(6)：370～3
(收稿：1999-09-21), 百拇医药
单位：广州医学院病理教研室，广州 510182
关键词：肺癌；bcl-2蛋白；免疫组化
广州医学院学报000121 中图分类号 R734.2 文献标识码：A 文章编号：1008-1836(2000)01-0066-03
细胞凋亡与肿瘤发生的关系是目前肿瘤研究的“热点”之一。Bcl-2基因作为抑制细胞凋亡的基因受到了广泛的关注。Bcl-2基因定位于人染色体18q21，编码一相对分子量为25kD的线粒体内膜蛋白，该种蛋白表达时，可抑制细胞凋亡，从而导致癌变[1、2、3]。本文通过对115例肺癌石蜡切片做免疫组化检测，探讨Bcl-2蛋白表达状况及意义。
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 材料
取自广州医学院第一附属医院1994～1996年的外检蜡块共115例，其中鳞癌39例、腺癌46例、小细胞癌30例。各蜡块连续切片2张，分别进行HE染色复诊和免疫组化。
1.2 免疫组化试剂
单克隆鼠抗人Bcl-2蛋白；LSAB试剂盒。均为DAKO公司产品。
Bcl-2蛋白浓度为1∶40，程序按说明书进行。阳性对照为淋巴结，阴性对照以TBS代替一抗。
1.3 结果判断
以胞浆、胞膜呈清晰棕色的细胞数大于10%为阳性。见图1、2、3。
, 百拇医药
图1 肺癌中bcl-2阳性表达(HE10×10)
图2 癌性腺体bcl-2阳性(HE10×10)
图3 bcl-2阳性癌细胞(HE10×40)
1.4 统计分析
采用χ2检验。
2 结果
2.1 115例肺癌中Bcl-2蛋白免疫组化染色结果见表1。Bcl-2蛋白表达率为40.87%，其中鳞癌35.91%，腺癌26.11%，小细胞癌70%。
, 百拇医药
表1 三种类型肺癌中Bcl-2蛋白表达情况 组织学类型
例数
+
-
阳性率%
鳞癌
39
14
25
35.9
腺癌
46
12
, 百拇医药
34
26.1
小细胞癌
30
21
9
70
合计
115
47
69
40.9
小细胞癌与鳞癌比较，两者之间有显著性差异(P<0.01)；小细胞癌与腺癌比较，两者之间有显著性差异(P<0.01)；小细胞癌与非小细胞癌(鳞癌+腺癌)比较，两者之间有显著性差异(P<0.01)；鳞癌与腺癌比较，两者之间无显著性差异(P>0.05)
, 百拇医药
2.2 Bcl-2蛋白与淋巴结转移的关系见表2。表2 Bcl-2蛋白与淋巴结转移的关系 淋巴结转移
Bcl-2
+
蛋白
-
合计
+
14
32
46
-
11
, 百拇医药 12
23
合计
25
44
69
淋巴结转移与Bcl-2蛋白表达无关(P>0.05)
经病理诊断确证115例病例中，46例有淋巴结转移，23例无。其余无法判定。经检验，淋巴结转移与Bcl-2蛋白表达无关(P>0.05)。
2.3 Bcl-2蛋白表达与肺癌分化程度的关系见表3。
表3 Bcl-2蛋白表达与肺癌分化程度的关系 分化程度
, http://www.100md.com
鳞癌
腺癌
例数
+
-
例数
+
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高分化
8
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3
10
6
, http://www.100md.com
4
中分化
13
6
7
8
4
4
低分化
18
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15
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, 百拇医药
22
合 计
39
14
25
46
12
30
高分化肺癌与低分化肺癌比较，两者之间有显著性差异(P<0.05)2.4 Bcl-2蛋白表达与性别、年龄的关系见表4。
表4 Bcl-2蛋白表达与性别、年龄的关系 Bcl-2蛋白表达
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, http://www.100md.com -
男
36
50
女
11
18
<50
11
14
>=50
36
54
Bcl-2蛋白表达与性别、年龄无关(P>0.05)3 讨论
, 百拇医药
Bcl-2是一种抑制细胞程序性死亡的存活基因，其产生的蛋白质可抑制细胞凋亡[4]，并可促使细胞生长，最终导致细胞癌变[5]。因此，Bcl-2基因及其表达产物在恶性肿瘤的发生和发展方面有很重要的意义[6，7]。我们用免疫组化方法对115例肺癌进行了Bcl-2蛋白检测，分析不同组织学类型和分化程度的肺癌中Bcl-2蛋白的作用。
实验结果表明Bcl-2蛋白在肺癌中有一定的表达率(40%)，尤其是在小细胞癌中，Bcl-2蛋白表达率高达70%，与非小细胞癌(鳞癌+腺癌)比较具有显著性差异(P<0.01)。这与一些文献的报道是一致的[4，8，9]。因此，我们认为Bcl-2蛋白在小细胞癌和非小细胞癌形成和发展过程中所起的作用是不同的。Bcl-2蛋白在小细胞癌的发生和发展中具有极其重要的作用。这可能与小细胞癌的起源组织有关。小细胞癌起源于支气管粘膜上皮的嗜银细胞，与非小细胞癌的起源组织完全不同。Bcl-2导致小细胞癌发生的机制可能与其异常表达阻碍了正常的细胞凋亡进程有关。而在非小细胞癌的形成过程中Bcl-2只是一个次要因素。有研究者认为Bcl-2在非小细胞癌发生中属于基因的次级激活(Secondary Activation)，也就是说，在Bcl-2之前，已有其它致癌因子发挥了作用[4]。我们的合作研究发现Bcl-2和P53蛋白表达在非小细胞肺癌中呈负相关(文献尚未发表)，可能支持以上观点。
, 百拇医药
我们的研究还显示Bcl-2蛋白表达与非小细胞癌的分化程度有关。高分化肺癌中Bcl-2蛋白的表达率高于低分化癌，两者之间有显著性差异，提示Bcl-2蛋白与肺癌分化不良有关，可作为判断非小细胞肺癌生物学行为的参考指标。
同时，我们对Bcl-2蛋白与患者年龄、性别以及淋巴结转移的关系做了分析，发现Bcl-2蛋白与上述因素无关。
作者简介：刘巍，女(1968.8-)，硕士，讲师。研究方向：肺癌。
参考文献
[1]Reed JC. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death[J]. J Cell Biol,1994;124:1
[2]Sinicrope FA,Ruan SB,Cleary KR,et al. Bcl-2 and P53 oncoprotein expression during colorectal rumorignesis[J]. Cancer Res,1995;55:237
, 百拇医药
[3]皋岚湘，丁华野.Bcl-2基因与恶性肿瘤.国外医学生理、病理科学与临床分册[J],1996;16：69
[4]Ritter JH,Dresler CM,Wick MR. Expression of Bcl-2 protein in stage TINOMO non-small cell lung carcinoma[J]. Human Pathology,1995;26:1227-1232
[5]Pezzella F,Turley H,Kuzu I,et al. Bcl-2 protein in non-small lung carcinoma[J]. The New England Journal of Medicine,1993;329:690～5
[6]Walter C,Robertson L,Myskow M,et al. Expression fo the Bcl-2 protein in normal and dysplastic bronchial epithelium and in lung carcinomas[J]. British Journal of Cancer,1995;22:164～169
, 百拇医药
[7]Fleming MV,Guinee DG,Dhu WS,et al. Bcl-2 immunlhistochemistry in a surgical series of non-small cell lung cancer patients[J]. Human Pathology,1998;29(1)60～64
[8]Ben-Evra-JM,Komstein MJ,Grimes MM,et al. Small cell carcinomas of the lung express the Bcl-2 Protein[J]. AM J Pathol,1994;5:1036-40
[9]郭琳琅，曹长安，肖莎.抗凋亡基因Bcl-2在肺癌中的异常表达[J].中华病理学杂志,1996;25(6)：370～3
(收稿：1999-09-21), 百拇医药