硝苯地平和SK&F 96365对cyclopiazonic acid触发的大鼠主动脉血管环收缩效应的影响
作者：林默君 关永源 贺华
单位：林默君(福建医科大学生理学教研室,福州 350004); 关永源(中山医科大学药理学教研室,广州 510080); 贺华(中山医科大学药理学教研室,广州 510080)
关键词：Ca2+代谢；血管收缩；Ca2+通道；Ca2+通道阻滞药；血管平滑肌；硝苯地平
福建医科大学学报000101
摘要:目的 探讨介导Ca2+池操纵性Ca2+内流的Ca2+通道特性。方法 取大鼠胸主动脉环，每个动脉环长约2.5 mm，用张力换能器记录主动脉环收缩反应。结果 (1)cyclopiazonic acid(CPA，1～100 μmol.L-1)以浓度依赖性触发大鼠主动脉环的双相收缩反应(收缩峰和平台)，10 μmol.L-1为最大效应浓度。(2)SK&F 96365(1～60 μmol.L-1)以浓度依赖性抑制CPA触发血管环收缩平台。(3)硝苯地平1 μmol.L-1阻断电压依赖性Ca2+通道后，SK&F 96365 30 μmol.L-1仍能抑制CPA触发血管环收缩平台。结论 电压依赖性Ca2+通道和Ca2+池操纵性Ca2+通道介导了CPA触发的大鼠主动脉环平滑肌的收缩反应。
, 百拇医药
中图分类号:Q445;R337.2;R972.4 文献标识码:A
文章编号：1000-2235(2000)01-0001-04
Effects of Nifedipine and SK&F 96365 on CPA-induced Contractile Response of Aortic Ring in Rat
LIN Mo-jun
(Department of Physiology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
GUAN Yong-yuan，HE Hua
(Department of Pharmacology，SunYet-sen University of Medical Science，Guangzhou 510080,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To study the characteristic of Ca2+ channel mediated store-operated Ca2+ influx on rat vascular smooth muscle.Methods The tension of rat aortic ring was measured.Results (1)Cyclopiazonic acid(CPA,1～100 μmol.L-1) produced a concentration-dependent dephasic contractile responses(contractile peak and plateau) of rats aorta.The maximal effects of CPA was reached at a concentration 10 μmol.L-1.(2)SK&F 96365(1～60 μmol.L-1) produced a concentration-dependent inhibition on CPA-induced plateau.Inhibitory rate of 60 μmol.L-1 SK&F 96365 or 1 μmol.L-1 nifedipine on contractile response induced by 100 mmol.L-1 KCl was 84%±14% or 96%±6%,respectively.(3) Inhibition rate of 1 μmol.L-1 nifedipine on CPA-induced plateau was 55%±5%,subsequently addition of 30 μmol.L-1 SK&F 96365 further decreased contractile plateau,inhibitory rate was 42%±12%.Total inhibition of Nif and SK&F 96365 was 92%±3%.Conclusion Voltage-dependent Ca2+ channel and store-operated Ca2+ channel mediated contractile response iniduced by CPA on rat aortic smooth muscle.
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KEY WORD:calium metablism;vasoconstriction;calium channel;calium channal blockers;vascular smooth muscle;nifedipine
细胞对持续性刺激的Ca2+内流反应主要是通过细胞膜上两种性质不同的Ca2+通道介导的，即电压依赖性Ca2+通道(voltage-dependent Ca2+ channel，VDCC)和受体操纵性Ca2+通道(receptor-operated Ca2+ channel，ROCC)。由于缺乏ROCC特异性阻断剂，至今对其仍认识不清，ROCC可能包括多种形式，“Ca2+池操纵性Ca2+内流”被认为是ROCC介导Ca2+内流的主要机制之一[1～3]。许多非兴奋性细胞，激活磷脂酶C偶联的受体可导致双相细胞Ca2+浓度的增加，初始的快速增加，是由于内质网/肌浆网的Ca2+释放；随后幅度较小，持续时间较长的缓慢增加，常与内质网中的Ca2+耗竭的信号开启了细胞膜上Ca2+池操纵性Ca2+通道(store-operated calcium channel，SOCC)所产生的Ca2+池操纵性Ca2+内流有关[4,5]。最近研究表明，Ca2+池操纵性Ca2+内流在调节平滑肌紧张性中起一定作用。但对介导Ca2+池操纵性Ca2+内流的VDCC和SOCC开放的机制，仍认识不清。本文以cyclopiazonic acid(CPA)引起Ca2+池操纵Ca2+内流所触发的主动脉血管环收缩为指标，观察VDCC和SOCC在Ca2+池操纵Ca2+内流中的作用。
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1 材料与方法
1.1 大鼠主动脉血管环张力描记SD大鼠，中山医科大学动物中心提供，180～230 g，雄性，击昏后颈动脉放血处死。取大鼠胸主动脉，置于通混合气体(95%O2+5%CO2)的Krebs液(mmol.L-1:KCl 4.6，MgSO4 1.16，NaH2PO4 1.16，CaCl2 2.5，NaHCO3 21.9，葡萄糖 11，NaCl 115，pH 7.4)中去除结缔组织，剪成2.5 mm宽的动脉环，用镊子去除内皮。血管环置于持续通入混合气体、37℃恒温的、含Krebs液的浴槽(容积4 ml)中，并给以1 g负荷，经换能器(JZ101)转换后在平衡记录仪(上海大华仪表厂)上描记张力变化。平衡2 h，每20 min换Krebs液一次。实验前给予KCl 100 mmol.L-1收缩血管，连续二次得到的收缩幅度差小于10%，被认为标本反应可重复，否则弃之。记录药物对KCl引起收缩反应的影响时，加入酚妥拉明1 μmol.L-1以阻断KCl去极化导致神经末梢递质释放而触发的收缩成分。每次给药后冲洗5次，张力回复到正常水平30 min后，进行下一步实验。
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1.2 试剂
CPA为Sigma公司(USA)产品，以dimethyl sulfoxide(DMSO，Sigma公司)溶解。硝苯地平(Nif，Sigma公司)以无水乙醇溶解。SK&F 96365(Biomol Research Lab Inc,USA)用双蒸水溶解。其他试剂均为市售分析纯。上述各药临用前以相应的溶剂溶解后，分别以Krebs液稀释成所需浓度。其中DMSO和无水乙醇的终浓度小于0.01%。
1.3 数据处理
数据以
表示，各阻断药对收缩反应的抑制率以(用阻断药前收缩幅度—用阻断药后收缩幅度)×100/用阻断药前收缩幅度表示。组间和同组用药前后的差异分别以组间和配对t检验进行统计学分析，P<0.05为统计学差异显著性标准。
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2 结 果
2.1 SK&F 96365和Nif对KCl触发血管环收缩反应的影响(附表)
附表 SK&F 96365对KCl(100 mmol.L-1)引起的收缩作用的影响 药 物
收缩反应
(g.g-1湿组织)
抑制率
(%)
对 照
245±155
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SK&F 96365(μmol.L-1)
10
145±62**
36±19
30
76±55**
68±13
60
22±18**
84±14
n=8.与对照比较,**:P<0.01.
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酚妥拉明1 μmol.L-1预处理10 min，对血管环张力基础值无明显影响。KCl 100 mmol.L-1使血管环张力上升，峰值为245±155 g.g-1湿组织，并稳定于这一水平，加入SK&F 96365 10，30和60 μmol.L-1后，对血管张力的抑制率分别为36%±19%,68%±13%和84%±14%。与给药前收缩张力峰值比较，均表现差异有显著性(P<0.01),提示SK&F 96365对血管平滑肌胞膜上的VDCC也有部分阻断作用。
酚妥拉明1 μmol.L-1预处理10 min后，对血管环张力基础值无明显影响，KCl 100 mmol.L-1使血管环张力上升达峰值(321±151 g.g-1湿组织)，并稳定在这一水平，加入Nif 1 μmol.L-1，血管张力值下降至14±13 g.g-1湿组织，抑制率为94%±6%。与给药前张力峰值比较差异有显著性(P<0.01)，提示Nif 1 μmol.L-1可完全抑制血管平滑肌细胞上VDCC的开放。
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2.2 CPA触发大鼠血管环收缩反应(图1)
图1 CPA触发的血管环收缩反应的量效曲线
n=6.，与用药前比较,*:P<0.05,**:P<0.01(图2同).
不同剂量的CPA(1～60μmol.L-1)对大鼠主动脉环产生浓度依赖性的收缩反应，10 μmol.L-1为CPA的最大反应浓度，潜伏期为3～5 min，大部分血管环呈双相反应，初始张力快速上升，峰值为261±171 g.g-1湿组织，为KCl 100 mmol.L-1所引起收缩最大值(350±143 g.g-1湿组织)的79%±50%。随后张力逐渐下降至94±67 g.g-1湿组织，为KCl 100 mmol.L-1所引起收缩最大值的29%±18%，并在这一水平持续一定时间，称为收缩平台期。本实验主要观察各种药物对CPA引起血管环收缩平台期的影响。
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2.3 SK&F 96365对CPA引起收缩反应的影响及其浓度-效应关系(图2)
图2 SK&F 96365对CPA(10 μmol.L-1)触发的血管环收缩平台期抑制作用的量效曲线
CPA 10 μmol.L-1引起大鼠胸主动脉环收缩平台期张力值为121±61 g.g-1湿组织，SK&F 96365不同剂量(1～60 μmol.L-1)，对CPA引起收缩的平台期表现为剂量依赖性的抑制作用。SK&F 96365 30和60 μmol.L-1的抑制率分别为72%±12%和97%±4%，与使用SK&F 96365前血管环收缩平台期张力值比较，差异有显著性(P<0.01)。
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2.4 Nif与SK&F 96365对CPA引起收缩反应的影响 CPA 10 μmol.L-1引起的大鼠胸主动脉环收缩平台期张力值为91±44 g.g-1湿组织。Nif 1 μmol.L-1使CPA引起的血管环收缩平台期的张力值下降至40±17 g.g-1湿组织，抑制率为55%±5%，与Nif使用前平台期张力值比较差异有显著性(P<0.01，n=6)；再加入SK&F 96365 30 μmol.L-1血管张力又可进一步降低至7±2 g.g-1湿组织，总抑制率为92%±3%，与Nif使用前平台期张力值比较差异有显著性(P<0.01)，表明在Nif阻断血管平滑肌VDCC后，SK&F 96365通过阻断SOCC，进一步抑制血管收缩反应，提示VDCC和SOCC参与介导了由CPA引起的收缩反应。
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3 讨 论
CPA为肌浆网的Ca2+-ATP酶抑制剂，抑制Ca2+-ATP酶将胞浆Ca2+回摄入肌浆网的功能，造成内质网泵-漏平衡失调，耗竭胞内Ca2+池，引起胞浆内Ca2+浓度的升高，触发平滑肌收缩，而无需激动剂激活膜结合受体及与其相关的第二信使的产生。CPA是用来区分Ca2+内流是通过SOCC或是通过ROCC其他形式介导的重要方法[5,6]。因此，CPA触发的Ca2+内流和平滑肌收缩反应是Ca2+池操纵性Ca2+内流参与细胞信号转导的一个重要指标。Tosun等在大鼠主动脉平滑肌细胞上观察到，CPA能浓度依赖性地升高胞浆内Ca2+浓度，呈双相反应，初始快速升高相，由胞内Ca2+池释放引起，随后是一持续升高相，由Ca2+内流引起[6]。本文显示CPA可浓度依赖性地触发大鼠主动脉血管环收缩，平滑肌收缩与胞内Ca2+水平变化相一致，表现为张力快速升高达峰值，随后下降并稳定于收缩平台期。本实验以CPA触发的收缩反应作为反映Ca2+池操纵性Ca2+内流变化的指标。
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特异性VDCC阻断剂硝苯地平(Nif)可完全抑制高KCl去极化触发的收缩反应，SK&F 96365对高KCl去极化触发的收缩反应亦有抑制作用。SK&F 96365对一些非兴奋性细胞(如血小板、血管内皮细胞)及兴奋性细胞(如血管平滑肌细胞)的受体操纵性Ca2+通道(ROCC)具有阻断作用，早期被认为是一个选择性ROCC阻断药。但近来的研究及本文的实验结果显示SK&F 96365对VDCC亦有阻断作用[7，8]。目前由于缺乏特异性的ROCC阻断剂，在缺乏VDCC的非兴奋性细胞的实验中SK&F 96365仍作为ROCC的阻断剂使用。在Nif抑制CPA触发收缩平台期作用的基础上，SK&F 96365可继续产生抑制作用，二者的总抑制作用可达90%以上,提示SK&F 96365可通过阻断ROCC抑制CPA触发的收缩反应。由于CPA触发的Ca2+内流和平滑肌收缩反应是由SOCC介导的，可认为SK&F 96365是通过对SOCC的阻断作用抑制了CPA触发的收缩反应。
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Daniel等人在培养的平滑肌细胞上观察到Nif可以阻断Ca2+泵抑制剂耗竭Ca2+池引起的Ca2+内流[9]；Wayman等以斑片钳技术，在大鼠肛尾平滑肌细胞上观察到，在Nif阻断VDCC的基础上，SK&F 96365能完全阻断CPA耗竭Ca2+池引起的Ca2+内流[5],本组实验结果与之一致。由此认为，VDCC与SOCC参与介导Ca2+池操纵性Ca2+内流过程。
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39770858);美国中华医学会基金资助项目(93-594);福建省卫生厅科研基金资助项目(97049)
作者简介:林默君,男，1964年3月生，副教授，医学硕士.
本工作在中山医科大学完成.
, 百拇医药
参考文献:
[1]Varadi G,Mori Y,Mikala G,et al.Molecular determinants of Ca2+ channel function and drug action[J].Trends Pharmacol Sci,1995;16(2):43～49
[2]Meldolesi J,Clementi E,Fasolato C,et al.Ca2+ influx following receptor activation[J].Trends Pharmacol Sci,1991;12(8):289～292
[3]Putney JW Jr,Bird GS.The signal for capacitative calcium entry[J].Cell,1993;75:199～201
, 百拇医药
[4]Parekh AB,Penner R.Store depletion and calcium influx[J].Physiol Rev,1997;77(4):901～930
[5]Gibson A,McFadzean L,Wallance P,et al.Capacitative Ca2+ entry and the regulation of smooth muscle tone[J].Trends Pharmacol Sci,1998;(19):266～269
[6]Tosun M,Paul RJ,Rapoport RM.Coupling of store-operated Ca2+ entry to contraction in rat aorta[J].J Pharmacl Exp Ther,1998;285(2):759～766
, 百拇医药
[7]Merritt JE,Armstrong WP,Benham CD,et al.SK&F 96365,a novel inhibitor of receptor-mediated calcium entry[J].Biochem J,1990;271(2):515～522
[8]Ciardo A,Meldolesi J.Multiple actions of SC 38249:the blocker of both voltage-operated and second messenger-operated Ca2+ channels also inhibits Ca2+ extrusion[J].Eur J Pharmacol,1990;188(6):417～421
[9]Low AM,Kotecha N,Neild TO,et al.Relative contributions of Ca2+ extracellular Ca2+ store to smooth muscle contraction in arteries and arteriles of rat,guinea pig,dog and rabbit[J].Clin Exp Pharmacol Physiol,1996;23:310～316
收稿日期:1999-09-06, 百拇医药
单位：林默君(福建医科大学生理学教研室,福州 350004); 关永源(中山医科大学药理学教研室,广州 510080); 贺华(中山医科大学药理学教研室,广州 510080)
关键词：Ca2+代谢；血管收缩；Ca2+通道；Ca2+通道阻滞药；血管平滑肌；硝苯地平
福建医科大学学报000101
摘要:目的 探讨介导Ca2+池操纵性Ca2+内流的Ca2+通道特性。方法 取大鼠胸主动脉环，每个动脉环长约2.5 mm，用张力换能器记录主动脉环收缩反应。结果 (1)cyclopiazonic acid(CPA，1～100 μmol.L-1)以浓度依赖性触发大鼠主动脉环的双相收缩反应(收缩峰和平台)，10 μmol.L-1为最大效应浓度。(2)SK&F 96365(1～60 μmol.L-1)以浓度依赖性抑制CPA触发血管环收缩平台。(3)硝苯地平1 μmol.L-1阻断电压依赖性Ca2+通道后，SK&F 96365 30 μmol.L-1仍能抑制CPA触发血管环收缩平台。结论 电压依赖性Ca2+通道和Ca2+池操纵性Ca2+通道介导了CPA触发的大鼠主动脉环平滑肌的收缩反应。
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中图分类号:Q445;R337.2;R972.4 文献标识码:A
文章编号：1000-2235(2000)01-0001-04
Effects of Nifedipine and SK&F 96365 on CPA-induced Contractile Response of Aortic Ring in Rat
LIN Mo-jun
(Department of Physiology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
GUAN Yong-yuan，HE Hua
(Department of Pharmacology，SunYet-sen University of Medical Science，Guangzhou 510080,China)
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ABSTRACT:Objective To study the characteristic of Ca2+ channel mediated store-operated Ca2+ influx on rat vascular smooth muscle.Methods The tension of rat aortic ring was measured.Results (1)Cyclopiazonic acid(CPA,1～100 μmol.L-1) produced a concentration-dependent dephasic contractile responses(contractile peak and plateau) of rats aorta.The maximal effects of CPA was reached at a concentration 10 μmol.L-1.(2)SK&F 96365(1～60 μmol.L-1) produced a concentration-dependent inhibition on CPA-induced plateau.Inhibitory rate of 60 μmol.L-1 SK&F 96365 or 1 μmol.L-1 nifedipine on contractile response induced by 100 mmol.L-1 KCl was 84%±14% or 96%±6%,respectively.(3) Inhibition rate of 1 μmol.L-1 nifedipine on CPA-induced plateau was 55%±5%,subsequently addition of 30 μmol.L-1 SK&F 96365 further decreased contractile plateau,inhibitory rate was 42%±12%.Total inhibition of Nif and SK&F 96365 was 92%±3%.Conclusion Voltage-dependent Ca2+ channel and store-operated Ca2+ channel mediated contractile response iniduced by CPA on rat aortic smooth muscle.
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KEY WORD:calium metablism;vasoconstriction;calium channel;calium channal blockers;vascular smooth muscle;nifedipine
细胞对持续性刺激的Ca2+内流反应主要是通过细胞膜上两种性质不同的Ca2+通道介导的，即电压依赖性Ca2+通道(voltage-dependent Ca2+ channel，VDCC)和受体操纵性Ca2+通道(receptor-operated Ca2+ channel，ROCC)。由于缺乏ROCC特异性阻断剂，至今对其仍认识不清，ROCC可能包括多种形式，“Ca2+池操纵性Ca2+内流”被认为是ROCC介导Ca2+内流的主要机制之一[1～3]。许多非兴奋性细胞，激活磷脂酶C偶联的受体可导致双相细胞Ca2+浓度的增加，初始的快速增加，是由于内质网/肌浆网的Ca2+释放；随后幅度较小，持续时间较长的缓慢增加，常与内质网中的Ca2+耗竭的信号开启了细胞膜上Ca2+池操纵性Ca2+通道(store-operated calcium channel，SOCC)所产生的Ca2+池操纵性Ca2+内流有关[4,5]。最近研究表明，Ca2+池操纵性Ca2+内流在调节平滑肌紧张性中起一定作用。但对介导Ca2+池操纵性Ca2+内流的VDCC和SOCC开放的机制，仍认识不清。本文以cyclopiazonic acid(CPA)引起Ca2+池操纵Ca2+内流所触发的主动脉血管环收缩为指标，观察VDCC和SOCC在Ca2+池操纵Ca2+内流中的作用。
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1 材料与方法
1.1 大鼠主动脉血管环张力描记SD大鼠，中山医科大学动物中心提供，180～230 g，雄性，击昏后颈动脉放血处死。取大鼠胸主动脉，置于通混合气体(95%O2+5%CO2)的Krebs液(mmol.L-1:KCl 4.6，MgSO4 1.16，NaH2PO4 1.16，CaCl2 2.5，NaHCO3 21.9，葡萄糖 11，NaCl 115，pH 7.4)中去除结缔组织，剪成2.5 mm宽的动脉环，用镊子去除内皮。血管环置于持续通入混合气体、37℃恒温的、含Krebs液的浴槽(容积4 ml)中，并给以1 g负荷，经换能器(JZ101)转换后在平衡记录仪(上海大华仪表厂)上描记张力变化。平衡2 h，每20 min换Krebs液一次。实验前给予KCl 100 mmol.L-1收缩血管，连续二次得到的收缩幅度差小于10%，被认为标本反应可重复，否则弃之。记录药物对KCl引起收缩反应的影响时，加入酚妥拉明1 μmol.L-1以阻断KCl去极化导致神经末梢递质释放而触发的收缩成分。每次给药后冲洗5次，张力回复到正常水平30 min后，进行下一步实验。
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1.2 试剂
CPA为Sigma公司(USA)产品，以dimethyl sulfoxide(DMSO，Sigma公司)溶解。硝苯地平(Nif，Sigma公司)以无水乙醇溶解。SK&F 96365(Biomol Research Lab Inc,USA)用双蒸水溶解。其他试剂均为市售分析纯。上述各药临用前以相应的溶剂溶解后，分别以Krebs液稀释成所需浓度。其中DMSO和无水乙醇的终浓度小于0.01%。
1.3 数据处理
数据以
表示，各阻断药对收缩反应的抑制率以(用阻断药前收缩幅度—用阻断药后收缩幅度)×100/用阻断药前收缩幅度表示。组间和同组用药前后的差异分别以组间和配对t检验进行统计学分析，P<0.05为统计学差异显著性标准。, http://www.100md.com
2 结 果
2.1 SK&F 96365和Nif对KCl触发血管环收缩反应的影响(附表)
附表 SK&F 96365对KCl(100 mmol.L-1)引起的收缩作用的影响 药 物
收缩反应
(g.g-1湿组织)
抑制率
(%)
对 照
245±155
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SK&F 96365(μmol.L-1)
10
145±62**
36±19
30
76±55**
68±13
60
22±18**
84±14
n=8.与对照比较,**:P<0.01.
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酚妥拉明1 μmol.L-1预处理10 min，对血管环张力基础值无明显影响。KCl 100 mmol.L-1使血管环张力上升，峰值为245±155 g.g-1湿组织，并稳定于这一水平，加入SK&F 96365 10，30和60 μmol.L-1后，对血管张力的抑制率分别为36%±19%,68%±13%和84%±14%。与给药前收缩张力峰值比较，均表现差异有显著性(P<0.01),提示SK&F 96365对血管平滑肌胞膜上的VDCC也有部分阻断作用。
酚妥拉明1 μmol.L-1预处理10 min后，对血管环张力基础值无明显影响，KCl 100 mmol.L-1使血管环张力上升达峰值(321±151 g.g-1湿组织)，并稳定在这一水平，加入Nif 1 μmol.L-1，血管张力值下降至14±13 g.g-1湿组织，抑制率为94%±6%。与给药前张力峰值比较差异有显著性(P<0.01)，提示Nif 1 μmol.L-1可完全抑制血管平滑肌细胞上VDCC的开放。
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2.2 CPA触发大鼠血管环收缩反应(图1)
图1 CPA触发的血管环收缩反应的量效曲线
n=6.
，与用药前比较,*:P<0.05,**:P<0.01(图2同).不同剂量的CPA(1～60μmol.L-1)对大鼠主动脉环产生浓度依赖性的收缩反应，10 μmol.L-1为CPA的最大反应浓度，潜伏期为3～5 min，大部分血管环呈双相反应，初始张力快速上升，峰值为261±171 g.g-1湿组织，为KCl 100 mmol.L-1所引起收缩最大值(350±143 g.g-1湿组织)的79%±50%。随后张力逐渐下降至94±67 g.g-1湿组织，为KCl 100 mmol.L-1所引起收缩最大值的29%±18%，并在这一水平持续一定时间，称为收缩平台期。本实验主要观察各种药物对CPA引起血管环收缩平台期的影响。
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2.3 SK&F 96365对CPA引起收缩反应的影响及其浓度-效应关系(图2)
图2 SK&F 96365对CPA(10 μmol.L-1)触发的血管环收缩平台期抑制作用的量效曲线
CPA 10 μmol.L-1引起大鼠胸主动脉环收缩平台期张力值为121±61 g.g-1湿组织，SK&F 96365不同剂量(1～60 μmol.L-1)，对CPA引起收缩的平台期表现为剂量依赖性的抑制作用。SK&F 96365 30和60 μmol.L-1的抑制率分别为72%±12%和97%±4%，与使用SK&F 96365前血管环收缩平台期张力值比较，差异有显著性(P<0.01)。
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2.4 Nif与SK&F 96365对CPA引起收缩反应的影响 CPA 10 μmol.L-1引起的大鼠胸主动脉环收缩平台期张力值为91±44 g.g-1湿组织。Nif 1 μmol.L-1使CPA引起的血管环收缩平台期的张力值下降至40±17 g.g-1湿组织，抑制率为55%±5%，与Nif使用前平台期张力值比较差异有显著性(P<0.01，n=6)；再加入SK&F 96365 30 μmol.L-1血管张力又可进一步降低至7±2 g.g-1湿组织，总抑制率为92%±3%，与Nif使用前平台期张力值比较差异有显著性(P<0.01)，表明在Nif阻断血管平滑肌VDCC后，SK&F 96365通过阻断SOCC，进一步抑制血管收缩反应，提示VDCC和SOCC参与介导了由CPA引起的收缩反应。
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3 讨 论
CPA为肌浆网的Ca2+-ATP酶抑制剂，抑制Ca2+-ATP酶将胞浆Ca2+回摄入肌浆网的功能，造成内质网泵-漏平衡失调，耗竭胞内Ca2+池，引起胞浆内Ca2+浓度的升高，触发平滑肌收缩，而无需激动剂激活膜结合受体及与其相关的第二信使的产生。CPA是用来区分Ca2+内流是通过SOCC或是通过ROCC其他形式介导的重要方法[5,6]。因此，CPA触发的Ca2+内流和平滑肌收缩反应是Ca2+池操纵性Ca2+内流参与细胞信号转导的一个重要指标。Tosun等在大鼠主动脉平滑肌细胞上观察到，CPA能浓度依赖性地升高胞浆内Ca2+浓度，呈双相反应，初始快速升高相，由胞内Ca2+池释放引起，随后是一持续升高相，由Ca2+内流引起[6]。本文显示CPA可浓度依赖性地触发大鼠主动脉血管环收缩，平滑肌收缩与胞内Ca2+水平变化相一致，表现为张力快速升高达峰值，随后下降并稳定于收缩平台期。本实验以CPA触发的收缩反应作为反映Ca2+池操纵性Ca2+内流变化的指标。
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特异性VDCC阻断剂硝苯地平(Nif)可完全抑制高KCl去极化触发的收缩反应，SK&F 96365对高KCl去极化触发的收缩反应亦有抑制作用。SK&F 96365对一些非兴奋性细胞(如血小板、血管内皮细胞)及兴奋性细胞(如血管平滑肌细胞)的受体操纵性Ca2+通道(ROCC)具有阻断作用，早期被认为是一个选择性ROCC阻断药。但近来的研究及本文的实验结果显示SK&F 96365对VDCC亦有阻断作用[7，8]。目前由于缺乏特异性的ROCC阻断剂，在缺乏VDCC的非兴奋性细胞的实验中SK&F 96365仍作为ROCC的阻断剂使用。在Nif抑制CPA触发收缩平台期作用的基础上，SK&F 96365可继续产生抑制作用，二者的总抑制作用可达90%以上,提示SK&F 96365可通过阻断ROCC抑制CPA触发的收缩反应。由于CPA触发的Ca2+内流和平滑肌收缩反应是由SOCC介导的，可认为SK&F 96365是通过对SOCC的阻断作用抑制了CPA触发的收缩反应。
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Daniel等人在培养的平滑肌细胞上观察到Nif可以阻断Ca2+泵抑制剂耗竭Ca2+池引起的Ca2+内流[9]；Wayman等以斑片钳技术，在大鼠肛尾平滑肌细胞上观察到，在Nif阻断VDCC的基础上，SK&F 96365能完全阻断CPA耗竭Ca2+池引起的Ca2+内流[5],本组实验结果与之一致。由此认为，VDCC与SOCC参与介导Ca2+池操纵性Ca2+内流过程。
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39770858);美国中华医学会基金资助项目(93-594);福建省卫生厅科研基金资助项目(97049)
作者简介:林默君,男，1964年3月生，副教授，医学硕士.
本工作在中山医科大学完成.
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收稿日期:1999-09-06, 百拇医药