膀胱移行细胞癌中P53、P16蛋白和PCNA的表达和临床意义
作者：蒋雷鸣 姚铁钧 杨燕伟 申鹏飞
单位：蒋雷鸣 姚铁钧 杨燕伟(桂林医学院附属医院泌尿外科 广西桂林 541001)；申鹏飞(湖南医科大学湘雅医院泌尿外科)
关键词：膀胱移行细胞癌；P53蛋白；P16蛋白；PCNA；表达
华夏医学000104 摘 要：目的：探讨多个相关基因蛋白产物与膀胱癌生物学行为的关系。方法：采用免疫组化(SP)法检测58例(63份)膀胱移行细胞癌(BTCC)石腊病理切片及6例正常膀胱组织切片中P53、P16蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况，并与病理分级、临床分期及随防结果相比较。结果：仅一项或无一项指标表达异常的18例(31.03%)，2项或2项以上指标表达异常的40例(68.9%)。本组BTCC大多数表现为多项基因蛋白产物表达异常。两组间比较在病理分级、临床分期上有显著性关系(P<0.005)，并且与肿瘤复发及患者生存情况有显著性关系(P<0.005)。同时检测多项基因蛋白产物的表达作为估价BTCC的生物学行为指标，可能较单一基因蛋白产物表达更具有意义。
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分类号：R737.14;R361
The Expression of P53、P16 Protein and PCNA in Bladder Transitional Cell Carcinoma and Its Clinical Significance
Jiang Leiming Yao Tiejun Yang Yanwei Shen Pengfei
(Department of Urinary Surgery,Affiliated Hospital,Guilin Medical College 541001)
Abstract：Purpose:To probe into the relationship between the products of protein of multiple related genes and the biological behavior of bladder carcinoma.Methods:The expression of pathological paraffin sections of 58 cases (63 portions) of bladder transitional cell cqarcinoma (BTCC),the P53.P16 protein of 6 cases of normal tissue,and the proliferative cell nucleus antigen (PCNA),and compared to the pathological grading,clinical stages and follow-up results.Results:Abnormal expression only in one item or no one item was 18 cases(31.03%),in 2 items or over 2 items was 40 cases (68.9%).The majority of BTCC in this group showed abnormal expression of multiple items of products of gene protein.The comprison in pathological grading and clinical stages between both groups showed significant difference (P<0.05),and showed significant relationship of tumor recurrence and survival stage of patient.Conclusion：To detect simultaneously the expression of the products of multiple items of gene protein as the parameter to assess the biological behavior of BTCC may be of significance than simgle expression of products of gene protein.
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Key words：BTCC;P53.P16protein;PCNA;expression▲
P53蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)分别在膀胱移行细胞癌(BTCC)中表达的研究已有不少报道，P16蛋白也有部分报道。但在同一标本检测上述三种与细胞周期密切相关的基因蛋白产物，尚未见报告。为了阐明P53、P16蛋白和PCNA各自以及三者间相互关系在TBCC患者中的预后价值，对58例(63份)BTCC P53、P16蛋白和PCNA进行免疫组织化学检测，现将结果报告如下：
1 材料与方法
1.1 病例标本
1983～1998年本院泌尿外科收治的膀胱移行细胞癌(BTCC)患者58例，男性49例，女性9例。年龄30～86岁，平均55.26岁。58例中41例获随访，随访6～132个月，平均68个月，肿瘤复发或转移18例，无复发或转移的23例。经手术切除的膀胱肿瘤组织经10%福尔马林固定，石腊包埋，共63份标本(含复发4例)。所有标本均作5μm厚连续切片4张， 1张行HE染色核实诊断，另3张行免疫组织化学染色，肿瘤分期按UICC-TNM标准分为Tis-T1期浅表性肿瘤22例，T2-T4期浸润性瘤41例。病理分级按WHO方法分为G120例，G234例、G39例，另选6例正常膀腕组织标本作对照。
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1.2 实验试剂
实验用鼠抗人PCNA多克隆抗体，鼠抗人P53多克隆抗体及鼠抗人P16单克隆抗体，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(Streptavidin peroxidase，SP)组织化学染色试剂盒均购自于福建Maxin公司。
1.3 免疫组织化学检测(SP)
按下列顺序进行：①二甲苯脱酯，梯度酒精水化；②1%H2O2抑制内源性过氧化物酶10min；③10%非免疫血清阻断特异性IgG，减少非特异性着色；④加P53或P16或PCNA抗体孵育1h；⑤加生物素标记的第2抗体，孵育10min；⑥加链霉亲和素-过氧化物酶溶液，孵育10min；⑦0.04%DAB-H2O2中显色；以上每一步骤后均用PBS缓冲液冲洗3×5s。⑧常规脱水，苏木素复染，中性树脂封固。每批标记物染色均设阴性对照(PBS代替单抗)。阳性对照采用病理切片确诊的乳腺癌石腊包埋标本，切片同法染色。所有染色标本SP染色前均行微波抗原修复处理。
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1.4 阳性标准
阳性细胞为0记作(-)，在1 000个肿瘤细胞中，阳性细胞数>30%为(
)，31%～60%(
)，>60%为(
)；()～()为弱阳性，()为强阳性。 P53蛋白阳性染色仅限于肿瘤细胞，PCNA蛋白阳性染色限于肿瘤细胞及移行上皮的基底层细胞，P16蛋白阳性染色在癌细胞及癌旁正常组织均可见。
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1.5 统计方法 采用χ2检验，统计计算过程在Windows word 6.0 spss软件下进行。
2 结果
2.1 P53，P16蛋白和PCNA表达与BTCC病理分级、临床分期的关系
光镜下P53蛋白和PCNA阳性染色为细胞核内被染成棕黄色，P16蛋白阳性染色为位于细胞浆内的棕黄色颗粒或团块，阴性标本均无上述染色。
P53、P16蛋白和PCNA阳性表达率分别为57.14%(36/63),80.95%(51/63)和93.65%(59/63)；强阳性率分别为19.44%(7/36),71.51%(38/51)和45.76%(27/59)。6例正常膀胱组织P53蛋白及PCNA均为阴性表达，P16蛋白均为阳性表达。P53蛋白表达与病理分级相关，G1(20%)与G2(70.54%)间和G1(20%)与G3(88.89%)间有显著性差异( P<0.01)，G2与G3间无显著性差异(P>0.05)， P16蛋白和PCNA表达与病理分级无显著性差异(P>0.05)，PCNA阳性强度与病理分级相关，G1(22.78%)与G3(77.78%)间有显著性差异(P<0.05)，G1与G2(48.88%)间和G2与G3间无显著性差异(P>0.05)；P53、P16蛋白表达阳性强度与病理分级则不相关( P>0.05)。 P53蛋白表达与临床分期相关，Tis-T1期浅表性肿瘤(22.73%)与T2-T4期浸润性肿瘤(75.61%)间有显著性差异(P<0.05)，而P16蛋白及PCNA表达与临床分期无显著性差异(P>0.05%)，PCNA的阳性强度与临床分期相关，Tis-T1期(22.22%)与T2-T4期间(56.10%有显著性差异( P<0.01)。P53、P16蛋白表达阳性强度与临床分期无显著性关系( P>0.05)。
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2.2 P53、P16蛋白和PCNA表达与BTCC预后的关系
本组随访41例，其中18例复发或转移、复发率为43.39%。复发组和无复发组间P53蛋白阳性率分别77.78%(14/18)和39.13(9/23)，有显著性差异(P<0.05)； P16和PCNA表达与肿瘤复发无统计学差异。本组随访3年以上的29例，5年以上的25例，3年及5年生存率为75.86%(22/29)和56%(14/25)，P53蛋白表达与3年及5年生存率相关，3年生存率阳性组为53.84%，阴性组93.75%(P<0.05)；5年生存率阳性组为27.27%，阴性组为75.75%(P<0.05)。PCNA、P16蛋白表达及其阳性强度均与3年及5年生存率无显著性关系( P>0.05)。
2.3 P53、P16蛋白和PCNA表达间的相互关系与BTCC的关系
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本组58例患者，在3项检测指标中，仅有1项或无1项异常表达的18例，占31.03%(18/58)；有2项或3项异常表达的40例，占68.97%(40/58)，两组在病理分级、临床分期间均有显著性差异(P<0.005)，其中G2-G3间无显著性差异( P>0.05)，其结果见表1。两组在肿瘤复发率间也有显著性差异(P<0.05)，3年生存率和5年生存率间均亦有显著性差异(P<0.05)，其结果见表2。
表1 P53、P16蛋白和PCNA表达间的相互关系与病理分级、临床分期的关系 分级及分期
分组
例数
分 布
构成比(%)
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S
M
S
M
病理分级
G1
18
13
5
27.22
12.5*
G2
32
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5
27
27.78
67.5
G3
8
0
8
0
20.0
临床分期
Tis-T1
18
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13
6
66.67
12.5**
T2-T4
40
5
35
33.33
87.5
*G1∶G2 χ2=13.654 P<0.005 G1∶G3 χ2=7.902 P<0.005
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G2∶G3 χ2=0.04375 P>0.05
**χ2=15.06181 P<0.005表2 P53、P16蛋白和PCNA表达间的相互关系与预后的关系 预后
分组
随访人数
复发人数
复发率(%)
复发率
S
15
3
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18.75*
M
26
15
57.69
3年生存率
S
15
14
93.33**
M
14
5
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35.71
5年生存率
S
14
11
78.57***
M
11
3
27.27
* χ2=4.0635 P<0.05
** χ2=4.02 P<0.05; ***χ2=5.98 P<0.05
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注：S：一项或无一项异常表达组 M：二项或二项以上异常表达组
3 讨论
应用免疫组化研究膀胱癌标本突变型P53蛋白和PCNA表达规律，国内外已有不少的报道，P16蛋白表达也有少量报道。Underwood[1]等报告P53过度表达在病理分级G1、G2、G3中分别是9%、23%、60%，Tis-T1期浅表性肿瘤表达率16%，T2-T4期浸润性肿瘤为60%。但吴明明[2]等研究结果为P53蛋白表达与病理分级、临床分期无显著性关系。在PCNA的免疫组织研究方面，Lipponen[3]等和杨进益[4]等研究表明，PCNA增殖指数随肿瘤分级升高而升高，浸润性肿瘤明显高于乳头状肿瘤，但彭万玲[5]报道PCNA表达与膀胱肿瘤的病理分级，临床分期无显著性关系。本组免疫组化研究结果显示，P53蛋白阳性表达及PCNA阳性强度与病理分级、临床分期相关。其结果与一些文献报道接近。同样，本组P53蛋白表达及PCNA阳性强度与肿瘤复发相关，随访的41例中43.90%(18/41)复发，复发与无复发的阳性率及强阳性率分别为77.78%和77.22%，39.13%和34.78%(P<0.05)，其结果与Esrig[6]等报道相近。本组P53蛋白表达与3年和5年生存率相关，P53蛋白表达阳性组3年和5年生存率分别为53.84%(7/13)和27.27%(3/11)，阴性组分别为93.75%和75.57%(11/14)(P<0.05)。本组PCNA的表达与3年生存率和5年生存率均无显著性关系(P>0.05)，这与Underwood[1]及Thrrell[7]等的报告相似，部分学者认为P53蛋白和PCNA表达与生存率有关系，阳性组或高增殖指数组的生存率低于阴性组或低增殖指数组[4，5，8～10]。由此可见P53蛋白和PCNA表达对肿瘤的恶性程度、生物学行为的判断及预测具有一定意义，但各家报道结果有一定差异，甚至相反。
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P16蛋白的免疫组化检测应用于膀胱癌研究文献不多，且与P16基因检测的结果有一定的差异，膀胱癌细胞系P16缺失率为54%，原发膀胱癌缺失率为19%，目前认为其原因是原发肿瘤组织中或多或少含有一些正常组织细胞，从而干扰了Southern、Northern plot检测方法的结果[11]。P16蛋白的免疫组化检测阴性率为52.54%，与病理分级有关系，在G1、 G2和G3中其阴性率分别为27.27%，36.84%和72.5%[1，2]，其阴性率高于P16基因检测的缺失率。本组P16蛋白阳性表达率为80.95%，阴性率为19.05%，且与病理分级、临床分期及术后肿瘤复发无显著性关系(P>0.05)，P16蛋白表达与生存率亦无显著性关系，所以P16蛋白表达作为一单独因素来判断和预测膀胱肿瘤的恶性程度及生物学行为尚待研究。
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在细胞周期中，PCNA为细胞由G0期或G1期进入S期所必需的物质[13]。野生型P53基因及其蛋白能与序列特异性DNA结合及刺激P21再抑制CDK4致使细胞生长停滞在G1期制止点，突变型P53及其蛋白则丧失以上作用，促使细胞生长[14～17]。 P16蛋白可与Cyline D竞争结合CDK4，从而抑制CDK4的活性，限止细胞由G1期进入S期[18～20]。这些提示P53、P16及PCNA间可能存在着一系列的内在联系。 Eliyahu[21]等发现，仅P53或H-ras一个基因不能使正常胚胎细胞形成增生化，即使基因产物达到致癌水平仍不能致癌，但两者协同就可能产生这种作用。可见仅1种癌基因或抑癌基因的改变可能不足以导致肿瘤的发生或发展，而需要多种基因的协同作用。本组免疫组化资料显示：P53、P16蛋白和PCNA中，2项或2项以上表达异常的为40例，占68.97%(40/58)，1项表达异常或3项表达正常的为18例,占31.03%(18/58)。可见膀胱癌大部分有多基因的突变或表达异常。两组在病理分级、临床分期、肿瘤复发及5年生存率间均有显著性差异(P<0.05)，2项或2项以上表达异常组，病理分级、临床分期级别高，复发率达57.69%(15/26)，3年和5年生存率分别为35.71%(5/14)和27%(3/11)，而1项或无1项异常表达的复发率仅为18.75%(3/16)。3年和5年生存率分别为93.33%(14/15)和78.57(11/14)。将上述的多基因表达异常资料与单基因表达异常资料进行比较，我们能否可以从中得出以下结论：多个相关基因表达异常与膀胱移行细胞癌的生物学行为可能有密切关系，可以作为判断该肿瘤恶性程度、自然病程及预后的估价指标，并可为治疗和预防方案的制定提供依据。因为本组资料尚少，所以对上述结论还需进一步研究、证实。
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参考文献：
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收稿日期：1999-11-01, 百拇医药
单位：蒋雷鸣 姚铁钧 杨燕伟(桂林医学院附属医院泌尿外科 广西桂林 541001)；申鹏飞(湖南医科大学湘雅医院泌尿外科)
关键词：膀胱移行细胞癌；P53蛋白；P16蛋白；PCNA；表达
华夏医学000104 摘 要：目的：探讨多个相关基因蛋白产物与膀胱癌生物学行为的关系。方法：采用免疫组化(SP)法检测58例(63份)膀胱移行细胞癌(BTCC)石腊病理切片及6例正常膀胱组织切片中P53、P16蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况，并与病理分级、临床分期及随防结果相比较。结果：仅一项或无一项指标表达异常的18例(31.03%)，2项或2项以上指标表达异常的40例(68.9%)。本组BTCC大多数表现为多项基因蛋白产物表达异常。两组间比较在病理分级、临床分期上有显著性关系(P<0.005)，并且与肿瘤复发及患者生存情况有显著性关系(P<0.005)。同时检测多项基因蛋白产物的表达作为估价BTCC的生物学行为指标，可能较单一基因蛋白产物表达更具有意义。
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分类号：R737.14;R361
The Expression of P53、P16 Protein and PCNA in Bladder Transitional Cell Carcinoma and Its Clinical Significance
Jiang Leiming Yao Tiejun Yang Yanwei Shen Pengfei
(Department of Urinary Surgery,Affiliated Hospital,Guilin Medical College 541001)
Abstract：Purpose:To probe into the relationship between the products of protein of multiple related genes and the biological behavior of bladder carcinoma.Methods:The expression of pathological paraffin sections of 58 cases (63 portions) of bladder transitional cell cqarcinoma (BTCC),the P53.P16 protein of 6 cases of normal tissue,and the proliferative cell nucleus antigen (PCNA),and compared to the pathological grading,clinical stages and follow-up results.Results:Abnormal expression only in one item or no one item was 18 cases(31.03%),in 2 items or over 2 items was 40 cases (68.9%).The majority of BTCC in this group showed abnormal expression of multiple items of products of gene protein.The comprison in pathological grading and clinical stages between both groups showed significant difference (P<0.05),and showed significant relationship of tumor recurrence and survival stage of patient.Conclusion：To detect simultaneously the expression of the products of multiple items of gene protein as the parameter to assess the biological behavior of BTCC may be of significance than simgle expression of products of gene protein.
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Key words：BTCC;P53.P16protein;PCNA;expression▲
P53蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)分别在膀胱移行细胞癌(BTCC)中表达的研究已有不少报道，P16蛋白也有部分报道。但在同一标本检测上述三种与细胞周期密切相关的基因蛋白产物，尚未见报告。为了阐明P53、P16蛋白和PCNA各自以及三者间相互关系在TBCC患者中的预后价值，对58例(63份)BTCC P53、P16蛋白和PCNA进行免疫组织化学检测，现将结果报告如下：
1 材料与方法
1.1 病例标本
1983～1998年本院泌尿外科收治的膀胱移行细胞癌(BTCC)患者58例，男性49例，女性9例。年龄30～86岁，平均55.26岁。58例中41例获随访，随访6～132个月，平均68个月，肿瘤复发或转移18例，无复发或转移的23例。经手术切除的膀胱肿瘤组织经10%福尔马林固定，石腊包埋，共63份标本(含复发4例)。所有标本均作5μm厚连续切片4张， 1张行HE染色核实诊断，另3张行免疫组织化学染色，肿瘤分期按UICC-TNM标准分为Tis-T1期浅表性肿瘤22例，T2-T4期浸润性瘤41例。病理分级按WHO方法分为G120例，G234例、G39例，另选6例正常膀腕组织标本作对照。
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1.2 实验试剂
实验用鼠抗人PCNA多克隆抗体，鼠抗人P53多克隆抗体及鼠抗人P16单克隆抗体，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(Streptavidin peroxidase，SP)组织化学染色试剂盒均购自于福建Maxin公司。
1.3 免疫组织化学检测(SP)
按下列顺序进行：①二甲苯脱酯，梯度酒精水化；②1%H2O2抑制内源性过氧化物酶10min；③10%非免疫血清阻断特异性IgG，减少非特异性着色；④加P53或P16或PCNA抗体孵育1h；⑤加生物素标记的第2抗体，孵育10min；⑥加链霉亲和素-过氧化物酶溶液，孵育10min；⑦0.04%DAB-H2O2中显色；以上每一步骤后均用PBS缓冲液冲洗3×5s。⑧常规脱水，苏木素复染，中性树脂封固。每批标记物染色均设阴性对照(PBS代替单抗)。阳性对照采用病理切片确诊的乳腺癌石腊包埋标本，切片同法染色。所有染色标本SP染色前均行微波抗原修复处理。
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1.4 阳性标准
阳性细胞为0记作(-)，在1 000个肿瘤细胞中，阳性细胞数>30%为(
)，31%～60%()，>60%为()；()～()为弱阳性，()为强阳性。 P53蛋白阳性染色仅限于肿瘤细胞，PCNA蛋白阳性染色限于肿瘤细胞及移行上皮的基底层细胞，P16蛋白阳性染色在癌细胞及癌旁正常组织均可见。, 百拇医药
1.5 统计方法 采用χ2检验，统计计算过程在Windows word 6.0 spss软件下进行。
2 结果
2.1 P53，P16蛋白和PCNA表达与BTCC病理分级、临床分期的关系
光镜下P53蛋白和PCNA阳性染色为细胞核内被染成棕黄色，P16蛋白阳性染色为位于细胞浆内的棕黄色颗粒或团块，阴性标本均无上述染色。
P53、P16蛋白和PCNA阳性表达率分别为57.14%(36/63),80.95%(51/63)和93.65%(59/63)；强阳性率分别为19.44%(7/36),71.51%(38/51)和45.76%(27/59)。6例正常膀胱组织P53蛋白及PCNA均为阴性表达，P16蛋白均为阳性表达。P53蛋白表达与病理分级相关，G1(20%)与G2(70.54%)间和G1(20%)与G3(88.89%)间有显著性差异( P<0.01)，G2与G3间无显著性差异(P>0.05)， P16蛋白和PCNA表达与病理分级无显著性差异(P>0.05)，PCNA阳性强度与病理分级相关，G1(22.78%)与G3(77.78%)间有显著性差异(P<0.05)，G1与G2(48.88%)间和G2与G3间无显著性差异(P>0.05)；P53、P16蛋白表达阳性强度与病理分级则不相关( P>0.05)。 P53蛋白表达与临床分期相关，Tis-T1期浅表性肿瘤(22.73%)与T2-T4期浸润性肿瘤(75.61%)间有显著性差异(P<0.05)，而P16蛋白及PCNA表达与临床分期无显著性差异(P>0.05%)，PCNA的阳性强度与临床分期相关，Tis-T1期(22.22%)与T2-T4期间(56.10%有显著性差异( P<0.01)。P53、P16蛋白表达阳性强度与临床分期无显著性关系( P>0.05)。
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2.2 P53、P16蛋白和PCNA表达与BTCC预后的关系
本组随访41例，其中18例复发或转移、复发率为43.39%。复发组和无复发组间P53蛋白阳性率分别77.78%(14/18)和39.13(9/23)，有显著性差异(P<0.05)； P16和PCNA表达与肿瘤复发无统计学差异。本组随访3年以上的29例，5年以上的25例，3年及5年生存率为75.86%(22/29)和56%(14/25)，P53蛋白表达与3年及5年生存率相关，3年生存率阳性组为53.84%，阴性组93.75%(P<0.05)；5年生存率阳性组为27.27%，阴性组为75.75%(P<0.05)。PCNA、P16蛋白表达及其阳性强度均与3年及5年生存率无显著性关系( P>0.05)。
2.3 P53、P16蛋白和PCNA表达间的相互关系与BTCC的关系
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本组58例患者，在3项检测指标中，仅有1项或无1项异常表达的18例，占31.03%(18/58)；有2项或3项异常表达的40例，占68.97%(40/58)，两组在病理分级、临床分期间均有显著性差异(P<0.005)，其中G2-G3间无显著性差异( P>0.05)，其结果见表1。两组在肿瘤复发率间也有显著性差异(P<0.05)，3年生存率和5年生存率间均亦有显著性差异(P<0.05)，其结果见表2。
表1 P53、P16蛋白和PCNA表达间的相互关系与病理分级、临床分期的关系 分级及分期
分组
例数
分 布
构成比(%)
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S
M
S
M
病理分级
G1
18
13
5
27.22
12.5*
G2
32
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5
27
27.78
67.5
G3
8
0
8
0
20.0
临床分期
Tis-T1
18
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13
6
66.67
12.5**
T2-T4
40
5
35
33.33
87.5
*G1∶G2 χ2=13.654 P<0.005 G1∶G3 χ2=7.902 P<0.005
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G2∶G3 χ2=0.04375 P>0.05
**χ2=15.06181 P<0.005表2 P53、P16蛋白和PCNA表达间的相互关系与预后的关系 预后
分组
随访人数
复发人数
复发率(%)
复发率
S
15
3
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18.75*
M
26
15
57.69
3年生存率
S
15
14
93.33**
M
14
5
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35.71
5年生存率
S
14
11
78.57***
M
11
3
27.27
* χ2=4.0635 P<0.05
** χ2=4.02 P<0.05; ***χ2=5.98 P<0.05
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注：S：一项或无一项异常表达组 M：二项或二项以上异常表达组
3 讨论
应用免疫组化研究膀胱癌标本突变型P53蛋白和PCNA表达规律，国内外已有不少的报道，P16蛋白表达也有少量报道。Underwood[1]等报告P53过度表达在病理分级G1、G2、G3中分别是9%、23%、60%，Tis-T1期浅表性肿瘤表达率16%，T2-T4期浸润性肿瘤为60%。但吴明明[2]等研究结果为P53蛋白表达与病理分级、临床分期无显著性关系。在PCNA的免疫组织研究方面，Lipponen[3]等和杨进益[4]等研究表明，PCNA增殖指数随肿瘤分级升高而升高，浸润性肿瘤明显高于乳头状肿瘤，但彭万玲[5]报道PCNA表达与膀胱肿瘤的病理分级，临床分期无显著性关系。本组免疫组化研究结果显示，P53蛋白阳性表达及PCNA阳性强度与病理分级、临床分期相关。其结果与一些文献报道接近。同样，本组P53蛋白表达及PCNA阳性强度与肿瘤复发相关，随访的41例中43.90%(18/41)复发，复发与无复发的阳性率及强阳性率分别为77.78%和77.22%，39.13%和34.78%(P<0.05)，其结果与Esrig[6]等报道相近。本组P53蛋白表达与3年和5年生存率相关，P53蛋白表达阳性组3年和5年生存率分别为53.84%(7/13)和27.27%(3/11)，阴性组分别为93.75%和75.57%(11/14)(P<0.05)。本组PCNA的表达与3年生存率和5年生存率均无显著性关系(P>0.05)，这与Underwood[1]及Thrrell[7]等的报告相似，部分学者认为P53蛋白和PCNA表达与生存率有关系，阳性组或高增殖指数组的生存率低于阴性组或低增殖指数组[4，5，8～10]。由此可见P53蛋白和PCNA表达对肿瘤的恶性程度、生物学行为的判断及预测具有一定意义，但各家报道结果有一定差异，甚至相反。
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P16蛋白的免疫组化检测应用于膀胱癌研究文献不多，且与P16基因检测的结果有一定的差异，膀胱癌细胞系P16缺失率为54%，原发膀胱癌缺失率为19%，目前认为其原因是原发肿瘤组织中或多或少含有一些正常组织细胞，从而干扰了Southern、Northern plot检测方法的结果[11]。P16蛋白的免疫组化检测阴性率为52.54%，与病理分级有关系，在G1、 G2和G3中其阴性率分别为27.27%，36.84%和72.5%[1，2]，其阴性率高于P16基因检测的缺失率。本组P16蛋白阳性表达率为80.95%，阴性率为19.05%，且与病理分级、临床分期及术后肿瘤复发无显著性关系(P>0.05)，P16蛋白表达与生存率亦无显著性关系，所以P16蛋白表达作为一单独因素来判断和预测膀胱肿瘤的恶性程度及生物学行为尚待研究。
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在细胞周期中，PCNA为细胞由G0期或G1期进入S期所必需的物质[13]。野生型P53基因及其蛋白能与序列特异性DNA结合及刺激P21再抑制CDK4致使细胞生长停滞在G1期制止点，突变型P53及其蛋白则丧失以上作用，促使细胞生长[14～17]。 P16蛋白可与Cyline D竞争结合CDK4，从而抑制CDK4的活性，限止细胞由G1期进入S期[18～20]。这些提示P53、P16及PCNA间可能存在着一系列的内在联系。 Eliyahu[21]等发现，仅P53或H-ras一个基因不能使正常胚胎细胞形成增生化，即使基因产物达到致癌水平仍不能致癌，但两者协同就可能产生这种作用。可见仅1种癌基因或抑癌基因的改变可能不足以导致肿瘤的发生或发展，而需要多种基因的协同作用。本组免疫组化资料显示：P53、P16蛋白和PCNA中，2项或2项以上表达异常的为40例，占68.97%(40/58)，1项表达异常或3项表达正常的为18例,占31.03%(18/58)。可见膀胱癌大部分有多基因的突变或表达异常。两组在病理分级、临床分期、肿瘤复发及5年生存率间均有显著性差异(P<0.05)，2项或2项以上表达异常组，病理分级、临床分期级别高，复发率达57.69%(15/26)，3年和5年生存率分别为35.71%(5/14)和27%(3/11)，而1项或无1项异常表达的复发率仅为18.75%(3/16)。3年和5年生存率分别为93.33%(14/15)和78.57(11/14)。将上述的多基因表达异常资料与单基因表达异常资料进行比较，我们能否可以从中得出以下结论：多个相关基因表达异常与膀胱移行细胞癌的生物学行为可能有密切关系，可以作为判断该肿瘤恶性程度、自然病程及预后的估价指标，并可为治疗和预防方案的制定提供依据。因为本组资料尚少，所以对上述结论还需进一步研究、证实。
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收稿日期：1999-11-01, 百拇医药